苑芳 王成龍 岳建蕓 茍瑩 魯彥

乙型肝炎病毒前S1抗原與HBV－DNA相關(guān)性分析

苑芳 王成龍 岳建蕓 茍瑩 魯彥

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)前S1抗原與HBV－DNA含量在反映HBV復(fù)制方面的相關(guān)性。方法采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和聚合酶聯(lián)反應(yīng)(PCR)方法分別檢測414例乙型肝炎患者的HBV－PreS1抗原和HBV－DNA，比較檢出率。結(jié)果414名患者中，HBeAg和HBV－PreS檢測結(jié)果一致者64．5%，不一致者占36．5%，兩種方法之間陽性率有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=53．33，P＜0．05);HBeAg和HBV－DNA同時陽性130人，占63．8%，不一致者占33．2%，兩種方法檢測陽性率之間有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=66．13，P＜0．05);HBV－DNA和HBV－PreS1檢測結(jié)果一致者占94．9%，不一致者占5．1%，兩種檢測方法結(jié)果沒有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=0．418，P＞0．05)。結(jié)論HBV－PreS1抗原與HBV－DNA呈高度相關(guān)，HBV－PreS1可作為HBV活動性復(fù)制指標。

乙型肝炎病毒前S1抗原乙型肝炎病毒e抗原乙型肝炎病毒DNA

材料與方法

1．標本來源:414例HBV感染者均來自筆者醫(yī)院2010年8月～2011年2月門診和住院患者，其中男性224例，女性180例。年齡6～89歲，平均年齡為36．3歲。乙型肝炎診斷依據(jù)，中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會和中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會2006年9月聯(lián)合制定的《中國乙型肝炎防治指南》的標準「5」。

2．試劑與方法:(1)血清HBV標志物檢測采用(ELISA)法:夾心法檢測HBsAg、HBsAb，HBeAg、競爭法檢測HBeAb、HBcAb，試劑為上海科華股份有限公司(生產(chǎn)批號: 201002022)。前S1抗原的檢測采用(ELISA)法雙抗體夾心法，試劑盒有上?？迫A股份有限公司生產(chǎn)(試劑批號: 201001014)。所有的操作過程均由熟練的技術(shù)人員嚴格按照規(guī)程操作。結(jié)果檢測使用山東高密彩虹分析儀器有限公司生產(chǎn)的GF－M3000型酶標儀，采用雙波長檢測，主波長450nm，參考波長630nm，空白孔校零，讀取OD值，結(jié)果判讀依據(jù)配套說明書。(2)HBV－DNA檢測:依據(jù)試劑盒說明樣本提取，加入患者血清以及DNA提取液振蕩混勻、沸水浴等，13000r/min離心提取HBV裂解產(chǎn)物;病毒擴增，依據(jù)說明書加入裂解產(chǎn)物、PCR反應(yīng)液，Taq酶及UNG酶，加入已設(shè)定好循環(huán)條件的PCR擴增儀進行擴增檢測。將擴增檢測結(jié)果DNA拷貝數(shù)＞1×103定為陽性。

3．統(tǒng)計學(xué)方法:計數(shù)資料采用百分率表示，四格表卡方檢驗分析HBeAg、前S1抗原及HBV－DNA結(jié)果的相關(guān)性和差異，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1．414名乙型肝炎血清標志(5項)檢測結(jié)果: 414名乙型肝炎患者中，大三陽(HBsAg，HBeAg，HB-cAb同時陽性)147例，占35．5%;小三陽(HBsAg HBeAb HBcAb同時陽性)171例，占41．3%;慢性肝炎(HBsAg，HBcAb同時陽性者)96例，占23．2%;HBeAg陽性組的HBV－PreS1和HBV－DNA檢出率分別為84．3%和88．4%，HBeAg陰性組的HBV－PreS1和HBV－DNA檢出率分別為47．9%和50.2%。50名健康體檢者，檢測結(jié)果均為陰性(表1)。

表1 414例乙肝患者的血清標志物和HBV－PreS1、HBV－DNA的分布［n(%)］

2．HBeAg和HBV－PreS1、HBV－DNA相關(guān)性:結(jié)果見表2。414名患者中，HBeAg和HBV－PreS1同時陽性124人，占30．0%;HBeAg和HBV－PreS1同時陰性139人，占33．6%;HBeAg陽性和HBVPreS1陰性23人，占5．6%，HBeAg陰性和HBVPreS1陽性128人，占30．9%。兩種方法之間陽性率有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=53．33，P＜0．05)。414名患者中，HBeAg和HBV－DNA同時陽性130人，占31.4%;HBeAg和HBV－DNA同時陰性133人，占32．4%;HBeAg陽性和HBV－DNA陰性17人，占4.1%;HBeAg陰性和HBV－DNA陽性134人，占32．4%，兩種方法檢測陽性率之間有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=66．13，P＜0．05)。

表2 414例乙肝患者HBeAg和HBV－PreS1、HBV－DNA檢測結(jié)果

3．PreS1和HBV－DNA相關(guān)性:414名患者中，HBV－DNA和HBV－PreS1同時陽性249人，占60.1%，兩者同時陰性144人，占34．8%;HBV－DNA陽性HBV－PreS1陰性15人，占3．6%;HBV－DNA陰性HBV－PreS1陽性6人，占1．4%。兩種檢測方法結(jié)果沒有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=0．418，P＞0．05，表3)。

表3 PreS1和HBV－DNA檢測乙型肝炎患者結(jié)果

討論

本實驗結(jié)果表明:前S1抗原檢測結(jié)果和HBVDNA檢測結(jié)果之間具有高度相關(guān)性，可以作為觀察病毒是否復(fù)制的實驗室指標。HBV－DNA是反映病毒是否復(fù)制的金標準［5］。但HBV－DNA定量檢測需要依賴昂貴的設(shè)備，且對檢測環(huán)境和技術(shù)人員操作有較高的要求，限制了這些方法在基層單位的開展。Real time PCR檢測收費標準比較昂貴;抗病毒治療需要患者多次檢測病毒載量，給患者造成一定的負擔(dān)。相對而言，HBV－preS1價格便宜，設(shè)備要求簡單，收費比較低，因此，我們考慮在患者可否在用藥過程中能否用HBV－PreS1替代HBV－DNA。本實驗結(jié)果表明，在HBeAg陽性、DNA病毒載量陽性(即復(fù)制拷貝數(shù)＞103)和HBsAg陰性、病毒載量陰性(即復(fù)制拷貝數(shù)＜103)者占所有檢測患者60．9%，兩種方法檢測陽性率不一致;HBeAg陽性、HBV－PreS1陽性和HBeAg陰性、HBV－PreS1陰性占所有檢測者63．8%，兩種方法檢測陽性率也不一致。提示HBeAg雖然也是傳統(tǒng)的反映乙肝患者病毒是否復(fù)制的指標，但不能完全代表病毒復(fù)制的情況，還有相當(dāng)部分病毒復(fù)制的患者(32．4%)HBeAg陰性。與此相反，HBV－PreS1和HBV－DNA檢測陽性符合率高達94.9%，兩種檢測方法之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。因此日常監(jiān)測中，可以用HBV－PreS1替代HBV－DNA作為病毒是否復(fù)制的標志。

乙肝病毒外膜蛋白包括前S、前S1和前S2其3種成分，前S1蛋白在病毒侵入肝細胞過程中起重要作用，在病毒感染，復(fù)制和刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)等方面起十分重要的作用，由于前S1只存在于具有傳染性的完整的乙肝病毒顆粒上［5］?？杀砻鱄BVPreS1陽性是HBV存在和復(fù)制的一種新標志，且可彌補HBeAg和DNA的檢測不足［6，7］。與HBV－DNA熒光定量PCR法相比，方法直接，操作簡單，實驗要求低，價格低廉，不需大型儀器。在沒有條件展開HBV－DNA檢測的中小型醫(yī)院，可通過檢測HBVPreS1作為HBV－DNA的替代實驗，但在對待抗病毒治療時必須綜合分析，不能只依靠一個指標。在有條件的情況下同時進行HBeAg和HBV－PreS1檢測，可提高檢測敏感性，評估乙型肝炎療效。

1莊輝．乙型肝炎流行病學(xué)研究進展［J］．國外醫(yī)學(xué):流行病學(xué)·傳染病學(xué)分冊，2004，31(3):133－135

2竇亞玲，李永哲，劉志肖，等．乙型肝炎病毒前S1抗原檢測的臨床價值［J］．中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2006，29(8):714－716

3黃江渝，郭平．血清乙肝病毒前S1抗原檢測的臨床意義［J］．重慶醫(yī)學(xué)，2003，32(3):366－367

4郭亞光，樓大勇．乙肝前S1抗原與HBV－DNA，HBeAg(HBeAb)相關(guān)性的研究［J］．安徽醫(yī)藥，2007，11(5):444

5孫穎，辛紹杰，雷厲，等．乙肝病毒外膜大蛋白檢測對于判定HBV DNA復(fù)制的意義［J］．世界華人消化雜志，2006，14(3):354－357

6李步榮，李麗華，李妙羨．乙肝病毒PreS1抗原的臨床應(yīng)用［J］．第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2007，28(5):442－444

7高建國，周運恒，姚雯穎．前S1蛋白在檢測乙型肝炎的研究進展［J］．醫(yī)學(xué)綜述，2003，9(6):361－362

(收稿:2011－12－26)

(修回:2012－02－16)

Correlation Analysis of HBV－PreS1Ag and HBV－DNA．

Yuan Fang，Wang Chenglong，Yue Jianyun，Gou Ying，Lu Yan．Department of Clinical Laboratory，The First Hospital of PLA，Gansu 730050，China

ObjectiveTo analyze the correlation of HBV－PreS1Ag and HBV－DNA．MethodsHBV－PreS1Ag and HBVDNA of 414 HBV patients and 50 non－HBV people were detected by ELISA and PCR．The detection rate was compared．ResultsThe detection rate of HBV－PreS1Ag and HBV－DNA in 414 HBV patients were 60．7%and 63．7%．The detection rate of HBV－PreS1Ag and HBV－DNA in HBeAg－positive group were 84．3%were 88．4%．The detection rate of HBV－PreS1Ag and HBV－DNA of HBeAg－negative group were 47．9%and 50．2%．ConclusionHBV－PreS1Ag and HBV－DNA were highly correlated．HBV－PreS1Ag is an index of HBV replication．

HBV－PreS1Ag;HBeAg;HBV－DNA

乙型肝炎是嚴重危害我國人民身體健康的傳染病之一。流行病學(xué)調(diào)查顯示，目前我國有1．2億名乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者，3000萬名乙型肝炎患者［1］。長期以來臨床通過檢測HBV標志物作為感染HBV的診斷依據(jù)，并通過檢測HBV－DNA觀察抗病毒治療療效。隨著對乙肝病毒研究的深入，越來越多的研究顯示乙型肝炎病毒前S1抗原(簡稱前S1抗原，以下同)可以作為觀察HBV抗病毒治療療效的指標，在一定程度上反映治療的效果［2～4］。但前S1抗原和HBV－DNA相關(guān)性研究目前鮮有文獻報道。筆者收集了414名HBV感染患者，同時檢測了患者血清前S1抗原和HBV－DNA，對前S1抗原反映病毒載量的效果進行評價，為臨床治療HBV提供理論依據(jù)。

蘭州大學(xué)中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項基金資助項目(lzujbky－290－146)

730030蘭州，解放軍第一醫(yī)院檢驗科

魯彥，電子信箱:lu73free@yahoo．com．cn