于秀文 吳甜

大腸黏膜組織sialyl lewis X表達(dá)及生物學(xué)意義

于秀文 吳甜

目的探討大腸腫瘤sLex(sialyl lewis X)表達(dá)及其與大腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法對(duì)55例大腸腺癌、15例遠(yuǎn)切端大腸黏膜及20例大腸腺瘤進(jìn)行sLex檢測(cè)。結(jié)果大腸腺瘤、大腸腺癌sLex陽性表達(dá)率分別為50．0%(9/18)，80．0%(44/55)(P=0．005);34例大腸腺癌、相應(yīng)的癌旁正常黏膜及相應(yīng)遠(yuǎn)切端正常黏膜sLex陽性表達(dá)率分別為79．4%(27/34)，41．2%(14/34)，5．88%(2/34)(P＜0．05);55例大腸腺癌sLex陽性表達(dá)與患者的性別、部位、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Duke's分期及生存時(shí)間無關(guān)(P＞0．05)，而與分化程度有關(guān)(P=0．021)。結(jié)論sLex是檢測(cè)大腸腫瘤發(fā)生及大腸癌分化程度的重要生物學(xué)標(biāo)志物。

大腸腺癌sLex免疫組織化學(xué)

大腸癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，目前對(duì)于檢測(cè)大腸癌的發(fā)生、分化、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后還沒有一個(gè)特異性的標(biāo)志物。唾液酸化的路易斯寡糖X(sialyl lewis X，簡(jiǎn)稱sLex)抗原是近年來發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤標(biāo)志物，關(guān)于sLex與大腸癌關(guān)系的報(bào)道觀點(diǎn)不一［1］。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大腸癌、癌旁正常黏膜、遠(yuǎn)切端黏膜及大腸腺瘤組織，探討sLex在大腸腫瘤發(fā)生，大腸癌分化、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的價(jià)值，為臨床診斷、治療及預(yù)后的判斷提供依據(jù)。

材料與方法

1．研究對(duì)象:隨機(jī)選取黑龍江省齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院病理中心2000～2005年經(jīng)手術(shù)切除的大腸癌組織標(biāo)本55例(男性29例，女性26例，年齡20～75歲，平均年齡為58．89±14．72歲，發(fā)生部位:結(jié)腸20例，直腸35例;根據(jù)2004年WHO腫瘤組織學(xué)分類:高分化16例，中分化18例，低分化21例;侵及肌層以上者29例，侵及漿膜和(或)漿膜以外器官26例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者23例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例;Duke's分期:A期21例，B期11例，C期20例，D期3例;生存期＞5年者27例，＜5年者28例)，34例帶有癌旁正常黏膜(據(jù)癌組織＜1.0cm)及遠(yuǎn)切端黏膜(據(jù)癌組織＞10cm)。另外選取18例大腸腺瘤組織作對(duì)照研究。

2．方法:采用免疫組織化學(xué)SP法(鏈酶卵白素－過氧化酶法)。一抗為多克隆兔抗sLex－IgA(BD，Denmark A/S)濃縮型抗體，工作濃度為1∶200;SABC試劑盒為武漢博士德生物公司產(chǎn)品、DAB試劑盒為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。用0．01mol/L，pH值為6．0±0．1檸檬酸緩沖液進(jìn)行微波抗原修復(fù)，其余操作步驟按說明書進(jìn)行。人的胃癌組織作為陽性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

3．結(jié)果判定:采用綜合評(píng)分法:sLex定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野記數(shù)100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)其中陽性細(xì)胞的比率和染色強(qiáng)度分別進(jìn)行綜合評(píng)定。(1)按陽性細(xì)胞的比率評(píng)分:0分為陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)＜5%;1分為5%～30%;2分為31%～60%;3分為＞60%。(2)按染色強(qiáng)度評(píng)分:0分為細(xì)胞無棕色顆粒與背景一致;1分為出現(xiàn)淡棕黃色顆粒;2分為出現(xiàn)明顯的棕色或棕黃色顆粒;3分為強(qiáng)棕色或棕黃色顆粒。(3)總積分=陽性細(xì)胞的比率評(píng)分×染色強(qiáng)度評(píng)分:0分為陰性(－);1～3分為弱陽性(+);4～6分為弱陽性(++);7～9分為強(qiáng)陽性(+++)。

4．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 13．0軟件進(jìn)行非參數(shù)檢驗(yàn)，sLex表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系采用Kaplan－meier生存率曲線及Log Rank檢驗(yàn)，所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1．大腸腺瘤及大腸腺癌組織sLex的表達(dá):sLex陽性染色位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)，正常黏膜及大腸腺瘤組織sLex主要表達(dá)于腺腔的腔緣及細(xì)胞膜周圍的細(xì)胞質(zhì)，而癌細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)的彌漫表達(dá)(圖1)。大腸腺瘤、大腸腺癌sLex陽性表達(dá)率分別為50.0%(9/18)，80．0%(44/55)，大腸腺癌sLex陽性表達(dá)率高于大腸腺瘤，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0．005) (表1)。

圖1 大腸腺瘤及大腸腺癌組織sLex的表達(dá)(×400)

表1 大腸腺瘤及大腸癌組織sLex的表達(dá)

2．大腸腺癌、癌旁正常黏膜及遠(yuǎn)切端正常黏膜sLex的表達(dá):癌旁正常黏膜sLex陽性染色主要位于黏膜固有層深層的腺體，而大腸腺癌sLex陽性染色表現(xiàn)于癌細(xì)胞浸潤(rùn)越深表達(dá)越明顯。34例大腸腺癌、相應(yīng)的癌旁正常黏膜及遠(yuǎn)切端正常黏膜sLex陽性表達(dá)率分別為79．4%(27/34)，41．2%(14/34)， 5.88%(2/34)，大腸腺癌＞癌旁正常黏膜＞遠(yuǎn)切端正常黏膜，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05，表2)。

圖2 大腸腺癌及癌旁正常黏膜sLex的表達(dá)(×400)

表2 大腸腺癌、癌旁正常黏膜及遠(yuǎn)切端正常黏膜sLex的表達(dá)

3．大腸腺癌sLex的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系:55例大腸腺癌sLex陽性表達(dá)與患者的性別、發(fā)生部位、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Duke's分期無關(guān)(P＞0．05)，而與分化程度有關(guān)(P=0．021)(表4)。

表4 大腸腺癌sLex的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

4．大腸腺癌sLex的表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系:55例大腸腺癌Kaplan－Meier生存曲線(圖3)顯示，sLex陽性表達(dá)組的生存曲線位于陰性組的下方，即sLex陽性表達(dá)率高者，生存時(shí)間短，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log－rank=0．919，P=0．338)。

討論

sLex是Lewis X抗原的唾液酸基衍化物，屬于

Lewis血型決定簇抗原之一。其結(jié)構(gòu)為NeuAcα2→3

圖3 大腸腺癌sLex表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系

Galβ1→4Fucα1→3GclNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer［2］。正常情況下，sLex主要表達(dá)于人體粒細(xì)胞和單核細(xì)胞表面。近年研究表明，它是糖化的腫瘤相關(guān)抗原，其表達(dá)是腫瘤惡性發(fā)展和預(yù)后不良的標(biāo)志物［3，4］。

關(guān)于sLex在大腸正常黏膜，腺瘤及腺癌的表達(dá)情況文獻(xiàn)觀點(diǎn)不一，Croce等［5］應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了88例大腸癌，22例腺瘤和23正常黏膜sLex的表達(dá)，大腸癌、腺瘤陽性率分別為31%，41%，而在正常的黏膜中只有2例陽性。而Portela等［6］研究表明，sLex表達(dá)在大腸癌癌周正常組織為sLex為6．7%，腺瘤為27．0%，交界區(qū)及腫瘤組織分別為25.6%、74．8%。本研究結(jié)果顯示，大腸腺瘤、腺癌sLex陽性表達(dá)率分別為50．0%(9/18)、80.0%(44/ 55);癌旁正常黏膜為41．2%(14/34)，主要表達(dá)于固有層深部增生腺體;遠(yuǎn)切端正常黏膜只有2例陽性，其表達(dá)率為5．88%。從遠(yuǎn)切端黏膜－癌旁黏膜－大腸腺癌sLex表達(dá)呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)，提示sLex參與了大腸腫瘤的發(fā)生及惡性轉(zhuǎn)化，并且在這一過程中sLex表達(dá)部位出現(xiàn)了變化。文獻(xiàn)報(bào)道Fuc－TVI調(diào)節(jié)sLex的生物合成［7］。那么sLex表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，Nakamori等［8］將132例大腸癌分為sLex陰性、陽性兩組，研究表明，sLex陽性組瘤細(xì)胞侵襲能力、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高于sLex陰性組，尤其是肝轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)，而且患者5年生存率sLex陽性組(58．3%)低于陰性組(93%)。本研究結(jié)果顯示，sLex的表達(dá)與患者性別、發(fā)生部位、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Duke's分期均無關(guān)，而與分化程度有關(guān)，而且通過Kaplan－Meier生存曲線及Log－rank檢驗(yàn)顯示，sLex陽性表達(dá)率高者，生存時(shí)間短，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示sLex表達(dá)與不同分化的大腸癌相關(guān)，即中低分化者，sLex表達(dá)高，而高分化者，sLex表達(dá)低。

本研究應(yīng)用免疫組化研究了大腸癌及腺瘤sLex表達(dá)，同時(shí)對(duì)大腸癌周圍及遠(yuǎn)切端黏膜進(jìn)行了sLex檢測(cè)，結(jié)果表明sLex是檢測(cè)大腸腫瘤發(fā)生及大腸癌分化程度的重要生物學(xué)標(biāo)志物。

1Doekhie FS，Morreau H，de Bock GH，et al．Sialyl Lewis X expression and lymphatic microvessel density in primary tumors of node－negative colorectal cancer patients predict disease recurrence［J］．Cancer Microenviron，2008，1(1):141－151

2Mannori G，Crottet P，Cecconi O，et al．Differential colon cancer cell adhesion to E－，P－，and L－selectin:role of mucin－type glycoproteins［J］．Cancer Res，1995，55(19):4425－4431

3Hiratani K．The clinical significance of tumor－associated glycosylated antigen，sialylated Lewis［J］．Nihon Kyobu Shikkan Gakkai Zasshi，1991，29(9):1096－1103

4Jorgensen T，Berner A，Kaalhus O，et al．Up－regulation of the oligosaccharide sialyl LewisX:a new prognostic parameter in metastatic prostate cancer［J］．Cancer Res，1995，55(9):1817－1819

5Croce MV，Sálice VC，Lacunza E，et al．Alpha 1－acid glycoprotein (AGP):a possible carrier of sialyl lewis X(slewis X)antigen in colorectal carcinoma［J］．Histol Histopathol，2005，20(1):91－97

6Portela SV，Martín CV，Romay LM，et al．sLea and sLex expression in colorectal cancer:implications for tumourigenesis and disease prognosis［J］．Histol Histopathol，2011，26(10):1305－1316

7Trinchera M，Malagolini N，Chiricolo M，et al．The biosynthesis of the selectin－ligand sialyl Lewis x in colorectal cancer tissues is regulated by fucosyltransferase VI and can be inhibited by an RNA interferencebased approach［J］．Int J Biochem Cell Biol，2011，43(1):130－139

8Nakamori S，Kameyama M，Imaoka S，et al．Increased expression of sialyl Lewisx antigen correlates with poor survival in patients with colorectal carcinoma:clinicopathological and immunohistochemical study［J］．Cancer Res，1993，53(15):3632－3637

(收稿:2011－12－12)

(修回:2012－01－04)

Expression and Biological Significance of Sialyl Lewis X in Colorectal Mucosal Tissues．

Yu Xiuwen，Wu Tian．Department of Pathology，Qiqihaer Medical College，Heilongjiang 161006，China

ObjectiveTo explore relationship between expression sLex(sialyl lewis X)and clinicopathological parameters in colorectal tumors．MethodsThe expression of sLex was detected in 20 colorectal adenomas，55 colorectal adenocarcinomas and 15 normal colorectal mucosal tissues by immunohistochemical method．ResultsThe positive expression rates of sLex in colorectal adenoma and colorectal adenocarcinomas and normal colorectal mucosal tissues were 50．0%(9/18)，80．0%(44/55)(P=0．005)．The positive ex-pression rates of sLex in 34 colorectal carcinoma and carcinoma adjacent mucosa were 79．4%(27/34)，41．2%(14/34)，5．88%(2/34) (P＜0．05)．The colorectal adenocarcinomas sLex expression was unrelated to patient's sex，site，invasion，lymph node metastasis，Duke' s stages and survival time(P＞0．05)．The positive expression of sLex was related with differentiation of tumor(P=0．021)．Conclusion sLex is the detection of colorectal tumorigenesis and colorectal cancer differentiation degree important biological markers．

Colorectal adenocarcinoma;sLex;Immunohistochemistry

黑龍江省教育廳高等學(xué)校青年學(xué)術(shù)骨干支持計(jì)劃項(xiàng)目基金資助項(xiàng)目(1155G66)

161006齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院病理教研室