田艷俠

北京市仁和醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 102600

血型鑒定錯誤會使患者在輸血治療時產(chǎn)生嚴(yán)重的輸血反應(yīng)或溶血現(xiàn)象，危及患者生命[1]。因此準(zhǔn)確的血型鑒定是臨床用血安全的保障[2]。應(yīng)用傳統(tǒng)的手工試管法檢測血型，檢測過程易于出現(xiàn)人為差錯和受到其他因素的干擾，并且無法進(jìn)行批量檢測，操作較為費(fèi)時[3]，結(jié)果不易觀測保存，不能夠滿足臨床大量用血需求。全自動血型儀彌補(bǔ)了傳統(tǒng)手工試管法檢測血型的不足，其優(yōu)勢尤為突出。現(xiàn)將我院2009年1月～2011年12月1 861例患者應(yīng)用全自動血型儀與手工試管法血型檢測的結(jié)果進(jìn)行比較，現(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 血液樣本

選取我院大量失血、貧血或低蛋白血癥、重癥感染、凝血異常、有輸血需求的患者1 861例，年齡13～78歲，用75%的酒精消毒左手無名指指腹，待干，根據(jù)手指表皮的厚度用自動采血筆以足夠深度刺入，自然流出足量血液并進(jìn)行測定。所有患者均取血液樣本5mL加入乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA-Na2）進(jìn)行抗凝處理。用血量大時批量檢測，用血量小時單獨(dú)檢測。

1.2 試劑

抗-A、抗-B定型血清(長春博德生物公司生產(chǎn))；抗D血清（ALBA clone公司生產(chǎn)）；標(biāo)準(zhǔn)A血球、B血球（北京金豪制藥有限公司生產(chǎn)）；所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 儀器設(shè)備

強(qiáng)生Auto Vue Imnova全自動血型儀 （美國強(qiáng)生公司生產(chǎn)）；LDZ5-2 醫(yī)用離心機(jī) （北京京立離心機(jī)有限公司生產(chǎn)），10、40 μL 微量加樣槍各一只。

1.4 手工試管法

正定型：使用前血液樣本加入生理鹽水稀釋，自行配制5%的ABO細(xì)胞懸液，取20 μL紅細(xì)胞懸濁液，加入50 μL抗-A、抗-B、抗D血清，3 000 r/min離心5min。反定型：標(biāo)準(zhǔn)A血球、B血球加入50 μL樣本血漿，3 000 r/min離心5min。顯微鏡下肉眼觀測，有凝集效果的為反應(yīng)陽性，呈散在游離狀態(tài)為反應(yīng)陰性，判讀患者血型。

1.5 儀器法

樣本制備，正定型：抗-A、抗-B、抗D血清50 μL中加入20 μL 5%的紅細(xì)胞懸液；反定型：標(biāo)準(zhǔn)A血球、B血球加入50 μL 樣本血漿；Rh（D）血型測定：加入 50 μL 抗 D 試劑和5%紅細(xì)胞懸液20 μL。待檢樣本用振蕩儀震蕩30 s，20℃下孵育10 min后1 000 r/min離心1 min，紅細(xì)胞懸浮后靜止1 min,在Auto Vue Imnova全自動血型儀中加入待檢血液樣本和試劑，批量檢測血型，全自動血型儀自動生成檢測結(jié)果。若結(jié)果可疑[正反不符或Rh（D）陰性]，血液樣本送血型室，用血型血清進(jìn)行復(fù)查[4-5]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 18.0 對數(shù)值數(shù)據(jù)進(jìn)行秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 全自動血型儀與手工試管法定型結(jié)果比較

兩種方法血液樣本定型結(jié)果基本一致，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。所有血型檢測正反不符及可疑樣本送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行進(jìn)一步檢測，血清學(xué)方法復(fù)檢檢測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)手工試管法判讀錯誤26例 （A型錯誤10例+B型錯誤3例+O型錯誤10例+AB型錯誤3例），3例可疑樣本復(fù)檢后證實(shí)一次判讀正確 （29例可疑樣本中經(jīng)過復(fù)檢證實(shí)一次判讀正確3例），儀器法判讀錯誤或無法判讀者僅為4例（A型錯誤2例+B型錯誤2例），由加樣操作錯誤引起的患者血型檢測正反不符者9例；患者自身有嚴(yán)重溶血者2例，嚴(yán)重脂血者3例，檢測結(jié)果均呈現(xiàn)出假陰性；由紅細(xì)胞亞型引起的正反不符者9例(A2 型6例、A2B型3例)，由紅細(xì)胞上抗原較弱或血清中抗體較弱引起的正反不符者3例；孵育后患者冷凝消失者5例；Rh（D）陰性儀器法判讀，一例結(jié)果為1+，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室復(fù)查證實(shí)為弱D型。

表1 兩種方法血液樣本定型結(jié)果比較（份）

2.2 全自動血型儀與手工試管法檢測結(jié)果準(zhǔn)確性比較

試管法與儀器法檢測血液樣本，其檢測結(jié)果判讀正確率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），兩種方法在血型鑒定方面均較為可靠，儀器法的誤定率則更低，僅為0.21%。見表2。

表2 兩種方法血液樣本檢測結(jié)果準(zhǔn)確性比較

3 討論

血型系統(tǒng)主要是指由紅細(xì)胞表面抗原所決定的血液抗原類型，包括ABO血型系統(tǒng)、MN血型系統(tǒng)及Rh血型系統(tǒng)等。臨床上重要的血型檢測主要針對的是ABO及Rh血型系統(tǒng)，ABO血型系統(tǒng)的判讀依據(jù)是紅細(xì)胞表面血型抗原和血清中所含抗體常分為四個類型：A型血者是指紅細(xì)胞上有A抗原，血清中有抗B抗體；B型血者是指紅細(xì)胞上有B抗原，血清中有抗A抗體；而AB型血者是指紅細(xì)胞上有A、B抗原，血清中無抗A、抗B抗體；紅細(xì)胞上既無A抗原也無B抗原，只有H抗原，血清中有既有抗A抗體又有抗B抗體的者為O型血，并且ABO血型系統(tǒng)分別由其各自的亞型，如A1、A2、B1 等亞型。Rh（D）血型則依據(jù)的是紅細(xì)胞表面的D抗原，紅細(xì)胞上有D抗原，并且可與抗D血清發(fā)生凝集者，稱為Rh（D）陽性，反之成為陰性；同時Rh（D）血型系統(tǒng)還含有弱D和不完全D抗原，接受正常D陽性紅細(xì)胞仍有可能產(chǎn)生抗D反應(yīng)，因此臨床上常將其作為陽性對待，如果Rh(D)陰性的受血者接受了Rh（D）陽性者血液后，可產(chǎn)生免疫性抗體，如再次輸受Rh陽性血液時，可發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)。ABO血型檢測常用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正定型（細(xì)胞試驗(yàn)）、反定型（血清試驗(yàn)）鑒定ABO血型，通過兩次檢測判讀用血者血型有效地降低了誤判率。傳統(tǒng)手工試管法與全自動血液儀的操作原理均為采用凝集實(shí)驗(yàn)檢測用血者血型，強(qiáng)生Auto Vue Imnova全自動血型儀主要是應(yīng)用玻璃珠凝集技術(shù)，將紅細(xì)胞定量加于凝柱頂端與試劑發(fā)生反應(yīng)，未凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下通過玻璃珠到達(dá)底端，為反應(yīng)陰性，而凝集的紅細(xì)胞懸浮于玻璃珠頂端，為反應(yīng)陽性。

本研究中分別應(yīng)用全自動血型儀及傳統(tǒng)手工試管法檢測了1 861例患者的血液樣本，并且對其結(jié)果進(jìn)行比較分析，兩種方法檢測結(jié)果雖差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），儀器法檢測結(jié)果準(zhǔn)確率更高，為99.7%，這與鄧曦[6]的研究結(jié)果一致，但仍存在判讀錯誤的情況，其誤定率為0.21%。由于患者血型錯誤輸血所產(chǎn)生的危害是致命的，應(yīng)有效改進(jìn)用血者血型判讀方法，保證判讀正確率。紅細(xì)胞懸液過濃或過淡引起的抗原抗體比例不適當(dāng)，反應(yīng)不明顯，易于誤判為陰性反應(yīng)[7]。Filipowicz等[8]認(rèn)為稀釋后待檢者紅細(xì)胞懸液的濃度為3%～5%時，紅細(xì)胞濃度較為合適。本研究中紅細(xì)胞懸液的濃度取其高值為5%，但仍有3例患者顯現(xiàn)出紅細(xì)胞上抗原較弱或血清中抗體較弱的現(xiàn)象，參考患者病歷時發(fā)現(xiàn)該3例患者年齡均在70歲以上，筆者認(rèn)為其原因應(yīng)為老年人血清中抗體水平大幅度下降所致，排除患者自身因素，全自動血型儀檢測血型的優(yōu)勢尤為突出。研究結(jié)果顯示加樣錯誤會引致用血者血型鑒定錯誤，何永勛等[9]認(rèn)為，全自動加樣儀能有效防止人工加樣造成的錯誤，并且應(yīng)用傳統(tǒng)手工試管法易于出現(xiàn)筆誤、試管標(biāo)識錯誤等非技術(shù)性原因造成的血型判讀錯誤。并且血型儀對于患者紅細(xì)胞表面抗原亞型鑒定更有優(yōu)勢，手工試管法將A2 亞型6例誤判為O型，A2B型3例誤判為B型，而血型儀全部判讀正確；兩種方法對于Rh（D）血型的鑒定結(jié)果一致，儀器法判讀出1例弱D用血者，符合率為100%，以往的血液檢測常用傳統(tǒng)手工試管法，該方法是交叉配血試驗(yàn)中最基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)方法之一，具有一定的準(zhǔn)確性和可靠性，但結(jié)果主要是以肉眼或顯微鏡下觀測獲得，受觀測者主觀因素及環(huán)境因素影響較大，且結(jié)果不易判讀，待檢樣本含量大時，耗時長，常滿足不了臨床用血需求。而全自動血型儀檢測過程完全自動化，操作流程簡單、檢測過程易于標(biāo)準(zhǔn)化，避免了人為因素的誤差；并且血型儀有拍照功能，可直觀的保存檢測結(jié)果。

綜上所述，儀器檢測血型速度快，使用該儀器后，不僅提高了工作效率，檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性同樣有所提高；同時血型微量化檢測具有節(jié)約大量昂貴抗血清的功能。筆者認(rèn)為應(yīng)用全自動血型儀進(jìn)行臨床血型判讀，并且在加樣時應(yīng)用全自動加樣儀能有效地提高臨床輸血安全，適宜加大推廣力度。

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