葉 青，汪何雅，錢 和

（江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江南大學(xué)食品學(xué)院，江蘇無錫214122）

蘆薈粗多糖和蘆薈苷對(duì)急性酒精中毒小鼠的解酒作用

葉 青，汪何雅，錢 和*

（江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江南大學(xué)食品學(xué)院，江蘇無錫214122）

目的：通過建立急性酒精中毒小鼠模型來研究蘆薈粗多糖和蘆薈苷對(duì)于急性酒精中毒小鼠的解酒作用。結(jié)果表明：蘆薈粗多糖（AP）和蘆薈苷（Aloin）可以延長小鼠的醉酒潛伏期，縮短睡眠時(shí)間和醒酒時(shí)間。AP實(shí)驗(yàn)組的乙醇吸收最高峰在120min左右出現(xiàn)，與對(duì)照組相比，AP（9mg/kg·bw）組小鼠血液乙醇濃度縮小了25.49%；Aloin組的乙醇吸收最高峰在120～180min出現(xiàn)，Aloin（200mg/kg·bw）組乙醇濃度縮小了42.56%。因此，蘆薈苷和蘆薈粗多糖都對(duì)急性酒精中毒小鼠具有明顯的解酒作用，能夠顯著降低小鼠血液乙醇濃度。

蘆薈粗多糖，蘆薈苷，急性酒精中毒，解酒

Abstract：The protective effects of crude aloe polysaccharides（AP） and aloin on acute ethanol-administrated mice were studied.The results showed that AP and aloin significantly prolonged drunk incubation period，decreased sleeping time and waking time of mice.The peak of ethanol concentration in plasm of AP administrated group appeared at about 120min after ethonal intake，and in the low dosage group（9mg/kg·bw），the peak appeared 25.49%less than the control group.The ethanol concentration peak of aloin administrated groups appeared around 120～180min and the peak of high dosage group（200mg/kg·bw） appeared 42.56%less than the control group.The results demonstrated that aloin and AP can effectively alleviated hangover and decreased alcohol content of plasma in acute ethanol-administrated mice.

Key words：crude aloe polysaccharides；aloin；acute liver injury；sober-up effect

蘆薈（Aloe vera）是多年生百合科常綠草本植物，全世界連同變種約有500余種。按照其用途可大致分為藥用、食用和觀賞三種類型。蘆薈富含多種活性物質(zhì)，據(jù)研究表明蘆薈有治愈炎癥、提高免疫力、增強(qiáng)胃腸功能、治療糖尿病、抗癌、抗菌等多種功能[1]。聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）把蘆薈列為“21世紀(jì)人類的最佳保健品”[2]。蘆薈苷（Aloin）是蘆薈蒽醌類混合物中的一種，在蘆薈葉表皮及葉肉中均有分布。傳統(tǒng)上認(rèn)為蘆薈苷突出的功效是消炎[3]、瀉下[4]等。而蘆薈多糖（Aloe Polysaccarides，AP）是一種蘆薈的天然高分子化合物，分子量大于5000道爾頓。主要成分為葡萄糖、甘露糖、乳糖等，以由乙酰化的甘露糖聚合而成的長鏈化合物為特征[5]。目前對(duì)于蘆薈在酒精代謝方面的研究還比較少，但是研究發(fā)現(xiàn)蘆薈苷和蘆薈多糖具有增強(qiáng)免疫能力[6]、下調(diào)有關(guān)炎癥基因表達(dá)[7]以及抗氧化等方面的作用[8-9]，目前也有專利表明蘆薈有效成分能夠緩解飲酒帶來的不適反應(yīng)[10]。這些研究和專利顯示出蘆薈苷和蘆薈多糖在解酒方面的潛力。本文通過用大量酒精對(duì)小鼠灌胃來分別研究用蘆薈粗多糖和蘆薈苷對(duì)小鼠解酒的作用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

昆明種雄性小鼠，體重（25±5）g 上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司；200∶1庫拉索蘆薈凝膠凍干粉由云南萬綠生物股份有限公司惠贈(zèng)；蘆薈苷（經(jīng)檢驗(yàn)純度達(dá)99.14%） 成都瑞芬思生物科技有限公司；乙醇脫氫酶（ADH），氧化型輔酶Ⅰ（NAD+） sigma公司；蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)品 中國食品藥品檢定研究所；56°北京紅星二鍋頭 北京紅星股份有限公司；金龍魚大豆油 購自超市；甲醇 色譜純；肝素鈉、焦磷酸鈉、甘氨酸、鹽酸氨基脲、氫氧化鈉、氯化鈉、乙醇等 均為分析純。

Agilent1100高效液相色譜儀 美國安捷倫公司；5804R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 德國eppendorf AG公司；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋 上海申順生物科技有限公司；TU-1900雙光束紫外可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器公司；101C-3B電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蘆薈粗多糖的制備 取萬綠公司200∶1庫拉索蘆薈凝膠凍干粉，加入適量蒸餾水溶解，再加入4倍的無水乙醇充分混合。靜置過夜，待蘆薈多糖完全沉淀之后，于4℃，5000r/min離心10min，取沉淀干燥后備用。

1.2.2 苯酚-硫酸法測(cè)定蘆薈多糖中多糖含量[11]取不同濃度的甘露糖溶液，用苯酚-硫酸法測(cè)定總糖含量，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，方程為y=9.7011x（x為蘆薈多糖濃度，單位為mg/mL，y為吸光度），R2=0.996。取25mg的蘆薈粗多糖，按同樣的操作方法，測(cè)定其吸光度值，用上述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算其多糖含量。

1.2.3 最適灌酒量的選擇 取昆明種雄性小鼠40只，隨機(jī)分為5組，每組8只。末次禁食不禁水12h后，采用56°北京紅星二鍋頭白酒，對(duì)各組小鼠分別按10、12、13、14、16mL/kg·bw灌胃。觀察小鼠酒后入醉情況及時(shí)間，記錄小鼠的入睡數(shù)、醒酒數(shù)和死亡數(shù)。取醉酒率最高而小鼠死亡率較低的劑量進(jìn)行小鼠急性酒精中毒實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 小鼠急性酒精中毒醒酒指標(biāo)的測(cè)定

1.2.4.1 給酒及給藥方法 取70只昆明雄性小鼠，隨機(jī)分為8組：生理鹽水對(duì)照組；大豆油對(duì)照組；AP1（12.50mg/kg·bw）組；AP2（25mg/kg·bw）組；AP3（50mg/kg·bw）組；Aloin1（50mg/kg·bw）組；Aloin2（100mg/kg·bw）組；Aloin3（200mg/kg·bw）組。

實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食不禁水12h，對(duì)照組按體重灌胃0.10mL/10g劑量的生理鹽水，30min后灌胃劑量為0.13mL/10g的白酒。AP實(shí)驗(yàn)組先按體重灌胃0.10mL/10g劑量的相應(yīng)提取物溶液，30min后灌胃同等劑量的56°白酒。記錄給藥、給酒時(shí)間，觀察小鼠的活動(dòng)狀況及記錄小鼠的翻正反射消失和翻正反射恢復(fù)時(shí)間。

蘆薈苷在水溶液中溶解度低且不穩(wěn)定，本實(shí)驗(yàn)將蘆薈苷溶解到大豆油中灌胃，對(duì)照組為同樣劑量的大豆油。文獻(xiàn)報(bào)道，蘆薈苷在體內(nèi)代謝10～12h后，所生產(chǎn)的代謝產(chǎn)物解酒效果較強(qiáng)[12]。因此，本實(shí)驗(yàn)中Aloin實(shí)驗(yàn)和對(duì)照組按0.10mL/10g的劑量先灌胃蘆薈苷-大豆油或大豆油溶液，10h后對(duì)Aloin實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組按灌胃劑量為0.13mL/10g灌白酒，觀察小鼠的活動(dòng)狀況及記錄小鼠的翻正反射消失和翻正反射恢復(fù)時(shí)間。

1.2.4.2 醒酒指標(biāo) 小鼠背部向下保持30s為翻正反射消失；醒酒則以小鼠翻正反射恢復(fù)，并且行動(dòng)靈活自如，毛滑順時(shí)為判斷標(biāo)準(zhǔn)。醉酒潛伏期為翻正反射消失時(shí)間減去給酒時(shí)間；睡眠時(shí)間為翻正反射恢復(fù)時(shí)間減去翻正反射消失時(shí)間；醒酒時(shí)間為翻正恢復(fù)時(shí)間減去給酒時(shí)間。

1.2.5 小鼠急性酒精中毒血液乙醇濃度的測(cè)定

1.2.5.1 血液乙醇濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作[13-15]小鼠眼眶取血0.25mL，用生理鹽水稀釋4倍，加入不同濃度的乙醇溶液，然后再加4mL的3.4%高氯酸，混勻后靜置30min，充分沉淀蛋白，于4℃、5000r/min離心8min；吸取上清0.1mL，加入4.9mL新配制的ADH-NAD+酶液，充分混勻，在室溫靜置反應(yīng)90min后，于波長340nm測(cè)定吸光度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為y=0.001x-0.016（x為血液中乙醇濃度，單位為mg/dL，y為吸光度），R2=0.9968。

1.2.5.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法 取昆明小鼠108只，體重（25±5）g，每組18只，隨機(jī)分為6組。生理鹽水對(duì)照組；大豆油對(duì)照組；AP0（9mg/kg·bw）組；AP1（12.5mg/kg·bw）組；Aloin2（100mg/kg·bw）組；Aloin3（200mg/kg·bw）組。每只鼠取血2次，取血間隔90min以上。

生理鹽水、大豆油對(duì)照組、AP實(shí)驗(yàn)組和Aloin實(shí)驗(yàn)組灌胃方法同1.2.4.1。分別于灌胃酒后30、60、90、120、180、240min對(duì)小鼠進(jìn)行眼眶取血。為避免小鼠取血過多導(dǎo)致死亡，每次隨機(jī)對(duì)每組中6只小鼠取血，每只小鼠取血2次，同一只小鼠取血間隔90min以上。

1.2.5.3 樣品中乙醇濃度的測(cè)定 將不同時(shí)間段取的小鼠血液按1.2.5.1的方法測(cè)定其吸光度[11]，用標(biāo)準(zhǔn)方程計(jì)算乙醇含量。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理方法 采用SPSS17．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組數(shù)據(jù)以±SD的形式表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆薈粗多糖中多糖含量的測(cè)定

平行取4份蘆薈粗多糖溶液，經(jīng)苯酚-硫酸法顯色后測(cè)定可得蘆薈粗多糖中甘露糖濃度為0.05072mg/mL，換算得蘆薈粗多糖的含量為10.14%。

2.2 蘆薈粗多糖和蘆薈苷對(duì)急性酒精中毒小鼠醒酒時(shí)間的影響

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，13mL/kg·bw（折合乙醇5.75g/kg·bw）的灌胃劑量能夠使實(shí)驗(yàn)小鼠保持較高的醉酒率，并且其醉后的死亡率保持較低。故選擇此劑量作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的最適灌酒劑量。

表1 蘆薈苷對(duì)小鼠酒后睡眠時(shí)間的影響Table 1 Effect of Aloin on the sleeping time of drunk mice

表1顯示了蘆薈苷對(duì)急性酒精中毒小鼠醉酒潛伏期、睡眠時(shí)間及醒酒時(shí)間的影響。與對(duì)照組相比，蘆薈苷實(shí)驗(yàn)組小鼠的醉酒潛伏期沒有明顯的延長作用。而在睡眠時(shí)間指標(biāo)中，除了Aloin1組與對(duì)照組沒有明顯差異，其他組的睡眠時(shí)間都明顯縮短（與對(duì)照組相比，Aloin2組縮短80.50%；Aloin3組縮短了86.62%）。在醒酒時(shí)間指標(biāo)中，Aloin1組與對(duì)照組沒有明顯差異，其他實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比均出現(xiàn)大幅縮短（Aloin2組縮短75.27%；Aloin3組縮短了83.85%）。

表2顯示了蘆薈粗多糖對(duì)急性酒精中毒小鼠醉酒潛伏期、睡眠時(shí)間及醒酒時(shí)間的影響。蘆薈粗多糖實(shí)驗(yàn)組對(duì)于小鼠的醉酒潛伏期沒有明顯延長作用，但睡眠時(shí)間和醒酒時(shí)間都有明顯的縮短。其中，AP1組睡眠時(shí)間縮短62.97%；AP2組縮短了56.92%；AP3組縮短了31.53%。醒酒時(shí)間AP1組比對(duì)照縮短了57.53%；AP2組縮短了52.14%；AP3組縮短了31.51%。

表2 蘆薈粗多糖對(duì)小鼠酒后睡眠時(shí)間的影響Table 2 Effect of AP on the sleeping time of drunk mice

2.3 蘆薈粗多糖和蘆薈苷對(duì)急性酒精中毒小鼠血醇濃度的影響

參考Aloin和AP對(duì)小鼠的酒后睡眠時(shí)間影響，為了研究小鼠酒后乙醇在體內(nèi)的代謝情況，采用Aloin2組和Aloin3組研究。由于AP在低濃度下對(duì)于縮短醒酒時(shí)間等指標(biāo)的效果更為顯著，故采用AP1組和更低濃度AP0（9mg/kg·bw）組研究小鼠血醇濃度代謝情況。

AP對(duì)小鼠急性酒精中毒血液乙醇濃度的影響見圖1。由圖1可見，AP對(duì)小鼠血液乙醇含量的降低作用從第90min時(shí)開始比較明顯。對(duì)照組和AP實(shí)驗(yàn)組的乙醇吸收最高峰在120min左右出現(xiàn)，與對(duì)照組相比，AP0組縮短了25.49%，AP1組縮短了24.40%。同時(shí)，從物理特征來觀察，AP作用之后的小鼠明顯比對(duì)照組小鼠活潑，動(dòng)作協(xié)調(diào)。而AP0組和AP1組之間在120～240min的血醇含量并無顯著差異。

圖1 蘆薈粗多糖對(duì)小鼠急性酒精中毒血液乙醇濃度的影響Fig.1 Influence of AP on acute alcohol hepatic injured mice’s blood alcohol concentration

蘆薈苷對(duì)小鼠急性酒精中毒血液乙醇濃度的影響見圖2。從圖2可看出，蘆薈苷各干預(yù)組計(jì)劃能降低各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的小鼠血液乙醇濃度，并且其作用隨著灌胃濃度的升高而升高。從30min開始，Aloin3組的小鼠血液中乙醇起始濃度就非常低，與對(duì)照組相比具有明顯差異（p<0.05），該劑量組小鼠血液乙醇濃度也在監(jiān)測(cè)的時(shí)間段一直保持著較低的水平。與對(duì)照相比，Aloin2組小鼠的血醇含量直到第180min時(shí)，才出現(xiàn)了較明顯的下降，大約在120～180min左右出現(xiàn)吸收的最高峰。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，在120min處，Aloin2組和Aloin3組出現(xiàn)了明顯差異。與對(duì)照組相比，約在180min處，Aloin2組乙醇濃度降低了27.67%；Aloin3組乙醇濃度降低了42.56%。

圖2 蘆薈苷對(duì)小鼠急性酒精中毒血液乙醇濃度的影響Fig.2 Influence of Aloin on acute alcohol hepatic injured mice’s blood alcohol concentration

2.4 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，蘆薈多糖和蘆薈苷都能顯著縮短小鼠酒后睡眠時(shí)間和醒酒時(shí)間，促進(jìn)小鼠體內(nèi)乙醇的代謝，降低小鼠血液乙醇濃度。其中蘆薈多糖實(shí)驗(yàn)組小鼠在酒精灌胃后一段時(shí)間后（大約90～120min后），小鼠血液乙醇濃度降低的效果比較明顯，這也與多糖實(shí)驗(yàn)組小鼠的睡眠時(shí)間和醒酒時(shí)間相呼應(yīng)，可能是因?yàn)樵谶@段時(shí)間內(nèi)，小鼠血液中酒精濃度快速降到小鼠醒酒水平。而蘆薈苷實(shí)驗(yàn)組小鼠，尤其是高劑量組（Aloin3）能夠在一開始就保持較低的血醇濃度，并一直維持到測(cè)量結(jié)束，這也是蘆薈苷實(shí)驗(yàn)組小鼠能夠保持較低的醉酒率和較短的睡眠時(shí)間、醒酒時(shí)間的重要原因。

蘆薈苷的解酒功效可能主要源于其促進(jìn)乙醇的代謝。酒精在體內(nèi)代謝主要通過首過效應(yīng)、ADH氧化途徑、乙醇氧化酶系（MEOS）系統(tǒng)和肝過氧化酶系統(tǒng)來進(jìn)行。蘆薈苷是蘆薈中的一種重要蒽醌類成分，具有較強(qiáng)的抗菌抗氧化功能[4]，蘆薈提取物中的蒽醌類成分對(duì)O2-·和·OH等自由基具有強(qiáng)烈的清除作用，能夠提高老齡小鼠全血谷甘肽（GSH）和過氧化物歧化酶（SOD）的含量，降低血清中丙二醛（MDA）含量，具有抑制紅細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，能夠明顯提升機(jī)體抗氧化能力[16]，保護(hù)細(xì)胞膜及細(xì)胞[17]，減輕由乙醇引起的對(duì)機(jī)體的損傷。另外據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，蘆薈苷的代謝產(chǎn)物可以加速NADH和NAD+之間的轉(zhuǎn)化，促進(jìn)乙醇的脫氫和降解，對(duì)于迅速降低小鼠血液中乙醇量有很大作用[12]。

在本實(shí)驗(yàn)的濃度下，蘆薈粗多糖的作用沒有蘆薈苷的突出。但是其與對(duì)照相比，仍然具有顯著的緩解作用。這可能是由于蘆薈多糖對(duì)于急性酒精中毒起到的是間接輔助作用。蘆薈多糖具有調(diào)節(jié)免疫方面突出的作用，研究表明，蘆薈凝膠可以對(duì)抗環(huán)磷酰胺的免疫抑制作用，具有提高免疫力低下小鼠的胸腺、脾臟重量，溶血素抗體含量和巨噬細(xì)胞的吞噬功能[18]。并且據(jù)報(bào)道，除蘆薈多糖外，蘆薈凝膠提取物中至少有兩種低分子量免疫調(diào)節(jié)劑，能夠減少對(duì)于免疫細(xì)胞郎格漢斯細(xì)胞佐細(xì)胞的損傷[19]。因此，蘆薈多糖的作用很可能是調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫力、調(diào)節(jié)代謝速度以及相關(guān)酶活等，對(duì)乙醇的代謝過程中后期進(jìn)行調(diào)控。

蘆薈苷和蘆薈多糖對(duì)于解酒及緩解由酒精引起的肝損傷機(jī)制還有待進(jìn)一步研究，但是其對(duì)于酒精的快速代謝預(yù)示蘆薈具有解酒及保肝的可能性，也顯示了蘆薈可能成為一種新型的解酒保肝資源。

3 結(jié)論

本研究分析和評(píng)價(jià)了蘆薈粗多糖和蘆薈苷的解酒效果，發(fā)現(xiàn)蘆薈粗多糖和蘆薈苷對(duì)小鼠能起到一定的防醉解酒效果，二者都能減少小鼠睡眠時(shí)間，縮短醒酒時(shí)間，降低小鼠血液乙醇濃度。其中，蘆薈多糖干預(yù)組小鼠血液乙醇含量在酒后90～120min后開始明顯下降。而蘆薈苷干預(yù)組，尤其是高劑量組能夠在小鼠灌酒后一直保持其較低的血醇含量，顯示出非常好的解酒效果。在本實(shí)驗(yàn)劑量下，雖然蘆薈多糖降低小鼠血醇的幅度比蘆薈苷組小，但是其在低劑量下獲得了良好效果，也值得進(jìn)一步研究及開發(fā)。

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Protective effects of crude aloe polysaccharides and aloin on mice with acute liver injury induced by alcohol

YE Qing，WANG He-ya，QIAN He*
（State Key Laboratory of Food Science and Technology，School of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China）

TS201.4

A

1002-0306（2012）13-0355-04

2011－10－10 *通訊聯(lián)系人

葉青（1988-），女，碩士，研究方向：肝損傷危害和防治。

區(qū)域特產(chǎn)資源生態(tài)高值利用技術(shù)研究與產(chǎn)品開發(fā)（2011BAZ02169）。