張桂賢

（臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院動物疫病抗體檢測中心，山東臨沂 276005）

新城疫以高熱、呼吸困難、下痢、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血為特征[1]。目前出現(xiàn)的雞新城疫發(fā)病率一般在10%～25%，死亡率在15%～35%，產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋率下降30%左右，是危害養(yǎng)禽業(yè)的一種主要傳染病[2]。沂南縣某規(guī)?；半u場采血樣50份向我院動物疫病抗體檢測中心送檢，以監(jiān)測雞場新城疫抗體水平，為雞場后續(xù)免疫計劃的制定奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

電子天平、離心機(jī)、高壓鍋、pH計、冰箱、移液槍（0-100 μL，0-1000 μL）、恒溫箱。

1.2 試劑

1.2.1 試驗試劑

阿氏液（紅細(xì)胞保存液）、3.8%檸檬酸鈉、pH值7.2 0.01 mol/L PBS、1%雞紅細(xì)胞懸液均自配。

1.2.2 生物制品

雞新城疫血凝抑制試驗抗原、雞新城疫血凝抑制試驗陽性血清均購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司批號分別為201105、201101。

2 方法

2.1 血樣的處理

血液樣品50份，將其編號，待樣品凝固后自然析出血清可直接吸取血清待檢或?qū)⒀簶悠?000-3000 rpm離心15 min，用移液槍吸取血清加入滅菌的0.5 mL離心管。若需較長時間保存血清，可置于4 ℃或 -20 ℃冰箱。

2.2 雞紅細(xì)胞懸液

用2 mL注射器采集未免疫的健康公雞（翅靜脈采血）的血液于含有抗凝劑的滅菌離心管內(nèi)（按每mL血加入3.8%滅菌檸檬酸鈉0.2 mL做抗凝劑），迅速混勻。如當(dāng)時不用，可采血放入阿氏液內(nèi)（保存液2份，血液1份）于4 ℃冰箱內(nèi)可保存兩周。再用pH值7.2的0.01 mol/L PBS液洗滌3次，每次均以1 000 r/min離心10 min，洗滌后用PBS配成0.5%～1%（V/V）紅細(xì)胞懸液[3]，4 ℃保存?zhèn)溆?。對免疫狀態(tài)不明的雞，應(yīng)至少洗滌5次，每次離心后都要將紅細(xì)胞上層的灰白色層（白細(xì)胞、血小板等）吸除。

2.3 抗原、陽性血清的配制

均用2 mL PBS溶解。溶解后用0.5 mL EP管分裝，每支100 μL，-20 ℃凍存，隨用隨取，切忌反復(fù)凍融。

2.4 微量血凝及血凝抑制試驗

嚴(yán)格按照新城疫微量紅細(xì)胞凝集抑制試驗操作規(guī)程（SN/T 1109—2002）操作。

3 結(jié)果

3.1 微量血凝試驗

經(jīng)血凝試驗表明新城疫血凝抑制試驗抗原血凝價為6 log2，則4單位抗原的稀釋度為1:64。經(jīng)4單位抗原的驗證試驗表明，4、2、1個血凝單位孔紅細(xì)胞應(yīng)出現(xiàn)完全凝集，0.5個血凝單位孔紅細(xì)胞應(yīng)出現(xiàn)50%凝集。新城疫血凝抑制試驗抗原血凝價測定準(zhǔn)確可靠。

3.2 微量血凝抑制試驗

對50份血清經(jīng)血凝抑制試驗結(jié)果見下表1。

表1 新城疫抗體效價分布情況

4 討論

4.1 試驗結(jié)果表明沂南縣該養(yǎng)殖場新城疫平均抗體效價為9.4 log2，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于5 log2，抗體水平較高，能抵抗新城疫病毒的侵入，該養(yǎng)殖場新城疫防疫工作效果好，雞群不需要補(bǔ)種。但新城疫抗體水平會逐漸回落，一般認(rèn)為雛雞HI價≤4 log2時需進(jìn)行首免，成年雞HI價在6 log2時便需進(jìn)行免疫接種[5]。

4.2 新城疫一般情況要用血凝抑制試驗檢測1日齡雛雞的母源抗體，依據(jù)公式：首免日齡=4.5×（1日齡HI滴度－4）+5，一般為1～10日齡。如果監(jiān)測發(fā)現(xiàn)大部分雞只抗體水平較低，而少數(shù)抗體效價過高（≥9 log2）時，表明雞群極可能遭受野毒的侵襲，必須采取緊急防制措施[6]。

4.3 由于養(yǎng)殖業(yè)對新城疫的重視以及預(yù)防免疫措施的改進(jìn)，新城疫控制的比較好，自上世紀(jì)以來沒有大規(guī)模的流行。臨床上新城疫的發(fā)生多以非典型性形式出現(xiàn)，且新城疫常以大腸桿菌、傳支、法氏囊、禽流感等混合或繼發(fā)感染，給本病的診斷帶來困難[7]。必須遵循“預(yù)防為主，養(yǎng)防結(jié)合，防重于治”的原則。從加強(qiáng)飼養(yǎng)管理著手，加強(qiáng)營養(yǎng)，改善環(huán)境，提高機(jī)體抵抗力；科學(xué)制定免疫程序，正確使用疫苗，及時做好免疫抗體監(jiān)測，才能有效防控疫病的發(fā)生，提高雞的健康水平和生產(chǎn)性能，確保養(yǎng)雞業(yè)的健康發(fā)展。

[1]王林業(yè).雞新城疫的癥狀及防治[J].畜禽業(yè)，2011，21（8）：59.

[2]韓憲友.雞新城疫發(fā)病特點(diǎn)及防治對策[J].養(yǎng)殖與飼料，2008，（2）：41.

[3]趙瑞宏，張丹俊，潘孝成.不同新城疫疫苗和免疫途徑對雞新城疫HI抗體的影響[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2009，37（19）：38.

[4]楊萍.血凝抑制試驗（HI）影響因素探討[J].吉林農(nóng)業(yè)，2011，22（7）：64.

[5]董志剛.怎樣制定一個合理的免疫程序[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊，2011，4（8）：41.

[6]方遠(yuǎn)書，祝麗麗.雞新城疫的診斷和綜合防控措施探討[J].山東畜牧獸醫(yī)，2011，32（7）：30-32.

[7]李言譜，尤永君，徐兆強(qiáng).當(dāng)前我國主要禽病的流行特點(diǎn)及防治措施[J].中國動物保健，2011，12（8）：42.