王曉云，徐天剛，王光華，李秀萍，馬國福，馬利青，蔡其剛

（1.青海省湟中縣畜牧獸醫(yī)工作站，青海湟中 817000；2.青海省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院， 青海西寧 810016；3.中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266114）

青海省湟中縣田家寨某奶牛場(chǎng)，為2009年新建奶牛場(chǎng)，建成后陸續(xù)從山西、陜西和甘肅等不同地方引進(jìn)了320多頭奶牛，由于引進(jìn)時(shí)沒有進(jìn)行很好把關(guān)，牛群中陸續(xù)發(fā)生流產(chǎn)病例，截止2011年累計(jì)發(fā)生流產(chǎn)54例，給牛場(chǎng)造成了極大地經(jīng)濟(jì)損失，為了摸清奶牛場(chǎng)發(fā)生流產(chǎn)的原因，在相關(guān)部門的協(xié)助下，我們于2011年12月份在該牛場(chǎng)采集了發(fā)生過流產(chǎn)群的95份奶牛血清，進(jìn)行了布氏桿菌病、衣原體病及弓形蟲病的血清學(xué)調(diào)查，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 被檢血清

95份血清均采自青海省湟中縣田家寨某奶牛場(chǎng)發(fā)生過流產(chǎn)的奶牛群，均空腹，經(jīng)奶牛尾根靜脈采集血3～5 mL血液，采集后擺成斜面，置4 ℃冰箱5 h后，放在室溫下待血清析出后收集血清，冷凍保存。

1.2 診斷試劑盒

布病試管凝集抗原、陽性血清、陰性血清均由中國CDC 傳染病所提供，生產(chǎn)日期：20110423；

衣原體的IHA抗原、陰性標(biāo)準(zhǔn)血清、陽性標(biāo)準(zhǔn)血清和稀釋液，均購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)為：2010331；

弓形蟲的GST、GST-SAG1、陰、陽性血清等，均由青海省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院獸醫(yī)生物技術(shù)室提供。

1.3 器械

康氏管、96孔“V”型有機(jī)玻璃微量反應(yīng)板、微量加樣器、微量振蕩器、酶標(biāo)儀和培養(yǎng)箱均為實(shí)驗(yàn)室自備。

1.4 檢測(cè)方法

布氏桿菌病的SAT法、衣原體HIA法和弓形蟲ELISA法，分別按文獻(xiàn)介紹的方法進(jìn)行操作[1-3]。

1.5 結(jié)果判定

1.5.1 布氏桿菌病結(jié)果判定 被檢血清在1:100稀釋度出現(xiàn)“++”以上的凝集現(xiàn)象時(shí)，判為陽性，在1:50稀釋度出現(xiàn)“++”以上的凝集現(xiàn)象時(shí)，判為可疑。

1.5.2 衣原體病結(jié)果判定 陽性對(duì)照血清各孔均為（+），陰性對(duì)照血清各孔均為（-），被檢血清滴度不低于1:16（第二孔）為陽性，被檢血清滴度低于1:4（第一孔）為陰性，被檢血清滴度在1:4～1:16之間為可疑。

1.5.3 弓形蟲的結(jié)果判定 ELISA滴度表示成最大稀釋度的倒數(shù)，且展示ELISA值是等于或大于0.1，在抗原GST-SAG1孔和GST孔之間的光密度吸收值是不同的，兩孔陰性血清對(duì)照孔的平均值必須低于0.1，樣品ELISA抗體滴度值等于或大于0.1為陽性，低于0.1為陰性。

2 結(jié)果

應(yīng)用SAT、IHA和ELISA三種方法，對(duì)來自青海省湟中縣田家寨鎮(zhèn)某奶牛場(chǎng)發(fā)生過流產(chǎn)群的95份奶牛血清，進(jìn)行布氏桿菌病、衣原體病和弓形蟲病的血清學(xué)調(diào)查。結(jié)果：檢出布氏桿菌病陽性血清1份，衣原體陽性血清15份，弓形蟲陽性血清2份，血清陽性率分別為1.05%、15.79%和2.11%。初步說明引起該牛場(chǎng)流產(chǎn)的病因?yàn)椴际蠗U菌病、衣原體病及弓形蟲混合感染引起。檢測(cè)結(jié)果詳見表1。

表1 布病、衣原體病和弓形蟲病的血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 從監(jiān)測(cè)結(jié)果看，該奶牛場(chǎng)奶牛布氏桿菌、衣原體病和弓形蟲病的感染率為1.05%、15.79%和2.11%，說明該奶牛場(chǎng)牛群中存在布氏桿菌病、衣原體病及弓形蟲混合感染。通過回訪發(fā)現(xiàn)，以上陽性血清的牛均發(fā)生過流產(chǎn)，進(jìn)一步說明該牛群中流產(chǎn)與上述疾病有直接的關(guān)系。同時(shí)，在部分發(fā)生過流產(chǎn)的奶牛的血清中沒有檢測(cè)到上述疫病的抗體，是否存在其他未檢測(cè)的疫病，或由于管理方面存在的問題引起的，有待于在今后進(jìn)一步確診。

3.2 在常規(guī)例行檢查中，國家把布病列入必檢范圍內(nèi)，而沒有把衣原體病和弓形蟲病列入必檢范圍內(nèi)，這是該牛場(chǎng)發(fā)生衣原體病和弓形蟲病的主要原因，也成為引起奶牛的流產(chǎn)的主要原因，同時(shí)給奶牛場(chǎng)造成了一定的經(jīng)濟(jì)損失。建議今后的養(yǎng)牛業(yè)中把衣原體和弓形蟲也作為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。常規(guī)檢測(cè)的所有步驟必須如實(shí)進(jìn)行，發(fā)現(xiàn)陽性病畜及時(shí)進(jìn)行隔離、淘汰，將該類疾病的控制在發(fā)病初期，確保人畜安全。

3.3 為了徹底杜絕此類傳染病發(fā)生，探討該牛場(chǎng)感染以上疾病的途徑有三種形式，一是產(chǎn)地感染，二是運(yùn)輸過程感染，三是飼養(yǎng)過程感染。為此，嚴(yán)格把關(guān)，尤其認(rèn)真開展產(chǎn)地檢疫，陽性者一律全部淘汰，切斷傳染源。布氏桿菌、衣原體和弓形蟲病可以引起動(dòng)物的流產(chǎn)，給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。另外這三種病也是人畜共患傳染病，人們可以通過跟動(dòng)物及其產(chǎn)品的接觸而感染，并造成該類疾病的流行和傳播，給人畜的安全帶來了威脅[4]。

[1]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫局.SN/T1090-2002布氏桿菌病試管凝集試驗(yàn)操作規(guī)程[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[2]周繼章，邱昌慶.鸚鵡熱衣原體分子結(jié)構(gòu)研究 [J].中國獸醫(yī)科技，2002，36（12）：18-21.

[3]陸艷，馬利青.青海省牛弓形蟲病的ELISA診斷及試劑盒建立[J].中國動(dòng)物檢疫，2009，26（10）：40-41.

[4]李桂蘭，蔡其剛，馬利青，等.青海省某奶牛場(chǎng)引進(jìn)奶牛群的流產(chǎn)類疾病血清學(xué)調(diào)查[J].畜牧與獸醫(yī)，2011，43（7）：112-113.