李金玲，張 輝，陳 剛，王 琴，徐曉玉，*

(1.西南大學(xué)藥學(xué)院，重慶400716;2.重慶九龍坡區(qū)第五人民醫(yī)院，重慶401329;3.重慶工商大學(xué)藥物研究中心，重慶400067)

灰氈毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand-Mazz)俗稱大花忍冬，是中國藥典規(guī)定的山銀花項(xiàng)下的品種之一?；覛置潭幕ɡ倬哂星鍩峤舛?、涼散風(fēng)熱的功效，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)其有抗炎、抗菌、抗病毒、保肝、免疫調(diào)節(jié)、降血脂等作用［1］?；覛置潭奶伲?-3］也具有藥用價(jià)值，有祛風(fēng)除濕，通絡(luò)止痛的功效，用于治療肢體關(guān)節(jié)風(fēng)濕痹痛。重慶灰氈毛忍冬產(chǎn)量大、發(fā)展快［4］，為當(dāng)?shù)厣絽^(qū)農(nóng)民帶來了良好的經(jīng)濟(jì)效益。但是，目前國內(nèi)外對(duì)灰氈毛忍冬的利用［5］主要集中在花、莖、葉、藤上，對(duì)于灰氈毛忍冬芽的利用還未見報(bào)道。課題組為了進(jìn)一步拓展灰氈毛忍冬的藥用價(jià)值，充分利用藥材資源，增加藥農(nóng)的收入，對(duì)灰氈毛忍冬芽進(jìn)行了系列研究，擬開發(fā)成為新的藥用部位或者茶葉原料，相關(guān)論文已有發(fā)表［6］。本文按照2005年頒布的《新藥(中藥)研究指導(dǎo)原則》［7-9］對(duì)灰氈毛忍冬芽進(jìn)行了急性毒性、亞急性毒性等系列研究，旨在對(duì)灰氈毛忍冬芽的毒理學(xué)做出初步的客觀評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

灰氈毛忍冬芽 采自重慶秀山壩芒基地，批號(hào):110510;本研究所用的各種血液生理生化試劑盒 南京建成生物工程研究所;灌胃用的灰氈毛忍冬芽提取物供試液 按干燥灰氈毛忍冬芽(g)∶蒸餾水(mL)=1∶10煮沸提取3次，每次45min，合并提取液并真空加熱干燥，配制1000mL濃度為1500、750、375mg·mL-1的灰氈毛忍冬芽提取物供試液，4℃保存?zhèn)溆?SPF級(jí)昆明種小鼠 體重18～22g;SPF級(jí) SD大鼠 體重180～220g;均為雄性，購于重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(渝)2007-0001，飼養(yǎng)于西南大學(xué)藥學(xué)院SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，使用許可證號(hào):SCXK(渝)2009-0002。

Eos-Bravo自動(dòng)生化分析儀 意大利HOSPITEX DIAGNOSTICS s.r.l公司;CM1900冰凍切片機(jī)德國徠卡儀器有限公司;BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng) 成都泰盟科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)

表1 灰氈毛忍冬芽對(duì)小鼠體重的影響±s，n=10)Table 1The effect of Lonicera bud on weight of mice(±s，n=10)

表1 灰氈毛忍冬芽對(duì)小鼠體重的影響±s，n=10)Table 1The effect of Lonicera bud on weight of mice(±s，n=10)

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表2 灰氈毛忍冬芽對(duì)大鼠體重及體重增長的影響(單位:g;±s，n=10)Table 2Effect of Lonicera bud on weight and weight gain of rats(unit:g;±s，n=10)

表2 灰氈毛忍冬芽對(duì)大鼠體重及體重增長的影響(單位:g;±s，n=10)Table 2Effect of Lonicera bud on weight and weight gain of rats(unit:g;±s，n=10)

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1.2.1.1 預(yù)實(shí)驗(yàn) 取昆明種小鼠16只，雌雄各半，分成4組，每組2只，分別按1、5、15g·kg-1(最大耐受量)給藥，若在某個(gè)劑量上給藥后動(dòng)物死亡，則從低一級(jí)劑量(例如5g·kg-1)開始給藥，每組增加劑量5g·kg-1，直到出現(xiàn)動(dòng)物死亡為止［10-11］，得到 Dmax，對(duì)所有死亡動(dòng)物進(jìn)行尸檢。

1.2.1.2 正式實(shí)驗(yàn) 選用健康、成熟，體重18～22gKM小鼠20只，雌雄各半。按實(shí)驗(yàn)的最大給藥劑量給藥一次，連續(xù)觀察14d，并稱量小鼠給藥前、給藥后第3、7、14d的體重。小鼠的一般癥狀(皮膚、毛發(fā)，行為活動(dòng)，呼吸，心跳，眼淚、瞳孔和飲食等)和死亡情況，對(duì)死亡動(dòng)物進(jìn)行尸檢并記錄死亡原因，必要時(shí)做病理檢查。

1.2.2 亞急性毒性實(shí)驗(yàn) SD大鼠，180～220g，雌雄各半，80只隨機(jī)分為4組，每組20只，對(duì)照組給予純水，忍冬芽提取物三個(gè)劑量組，按高中低劑量分別給1500、750、375mg·mL-1濃度的供試藥液 2mL，折合生藥量為15、7.5、3.75g·kg-1。各組灌胃給藥，每天一次，給藥前4h，給藥后2h動(dòng)物禁食不禁水，其他時(shí)間自由飲食。實(shí)驗(yàn)期間觀察動(dòng)物的一般癥狀，每周稱重。喂養(yǎng)30d后，股動(dòng)脈取血做生化指標(biāo)及血常規(guī)測定，對(duì)腎、肝、脾等稱重，并做相應(yīng)的病理學(xué)檢查［12-13］。觀察的指標(biāo)主要有:

a.一般情況觀察:記錄動(dòng)物的一般癥狀(皮膚、毛發(fā)，行為活動(dòng)，呼吸，心跳，瞳孔、眼淚和飲食等)、死亡情況和每周體重等。

b.血液學(xué)指標(biāo):血紅蛋白、血小板數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)。

c.血液生化指標(biāo):谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、白蛋白(ALB)、肌酐(CR)、甘油三酯(TG)、總蛋白(TP)和總膽固醇(TCH)。

d.病理檢查:臟體比(臟器系數(shù))、大體觀察及病理組織檢查。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 用SPSS 18.0對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)或單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 當(dāng)劑量達(dá)到15g·kg-1時(shí)小鼠仍未死亡，因此未能測出LD50，初步確定了最大耐受量為 15g·kg-1。

2.1.2 正式實(shí)驗(yàn)結(jié)果 給藥2h內(nèi)，小鼠活動(dòng)減少、食量減少，12h后癥狀基本消失，24h后癥狀完全消失。13d實(shí)驗(yàn)恢復(fù)期間，20只小鼠無死亡，其毛色、活動(dòng)和飲食均正常。在給藥前，給藥后3d、7d、14d動(dòng)物稱重(表1)，顯示體重隨周齡而增長，且雌雄各組間無顯著性差異。確定了灰氈毛忍冬芽對(duì)小鼠經(jīng)口的最大給藥量為15g·kg-1·BW，說明灰氈毛忍冬芽對(duì)小鼠正常生長影響小，安全性高。

2.2 亞急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 一般體征觀察 實(shí)驗(yàn)期間各組的雌、雄大鼠均正常生長，各組動(dòng)物皮毛光滑、毛色正常，無死亡［14-16］。給藥30d后，各劑量組雌、雄大鼠的體重增長情況良好，雄性大鼠體重增長都略高于雌性大鼠，但各劑量組的體重和體重增重與純水組相比無顯著性差異(p＞0.05)，大鼠體重及體重增長變化值見表2。

2.2.2 血液學(xué)指標(biāo) 見表3。大鼠給藥30d后，在血液學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)中，各劑量組與純水組比較無顯著性差異(p＞0.05)，均在正常值范圍內(nèi)。

2.2.3 血液生化指標(biāo) 見表4。大鼠給藥30d后，各劑量組的血液生化指標(biāo)與純水組比較無顯著性差異性(p＞0.05)，均在正常值范圍內(nèi)。

2.2.4 病理組織檢查 見表5。解剖后經(jīng)切片、染色、鏡檢檢查，大體標(biāo)本未發(fā)現(xiàn)明顯病變。取各臟器稱重比較知各組臟器系數(shù)與純水組相比差異無顯著性(p＞0.05。

3 討論

通過急性毒性實(shí)驗(yàn)確定了灰氈毛忍冬芽對(duì)KM小鼠的最大給藥量為15g·kg-1·BW，據(jù)此可以得出結(jié)論，灰氈毛忍冬芽的急性毒性很小，在常規(guī)劑量下服用是安全可靠的。從急性毒性來看，飲用灰氈毛忍冬芽具有很高的安全性，但是任何事物都有一個(gè)合理的使用范圍，超過這個(gè)限量就不可能發(fā)揮好的作用，據(jù)研究大鼠在攝入過高量的蒸餾水也會(huì)致死，因此科學(xué)地飲用灰氈毛忍冬芽則是飲茶健身的必然要求。

表3 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對(duì)大鼠血液的影響(±s，n=10)Table 3Effects of Lonicera bud on rats’blood by ig in 30 days(±s，n=10)

表3 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對(duì)大鼠血液的影響(±s，n=10)Table 3Effects of Lonicera bud on rats’blood by ig in 30 days(±s，n=10)

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表4 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響(±s，n=7)Table 4Effect of Lonicera bud on biochemical indexes of rat blood by ig in 30 days(±s，n=7)

表4 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響(±s，n=7)Table 4Effect of Lonicera bud on biochemical indexes of rat blood by ig in 30 days(±s，n=7)

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表5 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響(g/100g，±s，n=10)Table 5Effect of Lonicera bud on organ index of rat by ig in 30 days(g/100g，±s，n=10)

表5 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響(g/100g，±s，n=10)Table 5Effect of Lonicera bud on organ index of rat by ig in 30 days(g/100g，±s，n=10)

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通過慢性毒性實(shí)驗(yàn)得到灰氈毛忍冬芽對(duì)SD大鼠生長發(fā)育無不良影響，血常規(guī)、血液生化指標(biāo)和臟器指數(shù)均在正常值范圍內(nèi)，皆無潛在的毒性作用［17-18］，病理學(xué)檢查未見明顯病變。表明灰氈毛忍冬芽無明顯毒性，可為其應(yīng)用推廣的安全性提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

綜上所述，灰氈毛忍冬芽具有豐富的營養(yǎng)價(jià)值，經(jīng)過一定的衛(wèi)生處理和加工后，對(duì)人體健康不會(huì)造成危害，可作為新食品資源進(jìn)行開發(fā)利用。

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［8］中華人民共和國衛(wèi)生部(GB/T15193，13-2003).30天和90天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)［S］.中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委會(huì)，2003:9.

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