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        林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠肝臟保護(hù)作用研究

        2012-09-05 14:21:08張平高迪杜鵑楊敬研崔柏青
        食品研究與開發(fā) 2012年12期
        關(guān)鍵詞:小鼠劑量

        張平,高迪,杜鵑,楊敬研,崔柏青

        (1.吉林醫(yī)藥學(xué)院軍事體育教學(xué)部,吉林吉林 132013;2.吉林醫(yī)藥學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué),吉林吉林 132013;3.吉林醫(yī)藥學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生教研室,吉林吉林 132013)

        林蛙油是一種營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值極高的藥食兩用食物,含有多種營(yíng)養(yǎng)成分及保健功能因子[1]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,林蛙油具有調(diào)節(jié)血脂、耐缺氧作用、耐寒和抗疲勞作用[2-6]。長(zhǎng)時(shí)間大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)會(huì)引起機(jī)體肝臟組織自由基增多,對(duì)肝細(xì)胞造成損傷,影響運(yùn)動(dòng)能力[7]。林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)過(guò)程中抗自由基氧化功能的影響研究報(bào)道較少。本研究通過(guò)觀察林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)小鼠肝臟組織自由基代謝和超微結(jié)構(gòu)的影響,為林蛙油進(jìn)一步的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

        1 材料和方法

        1.1 材料

        1.1.1 林蛙油

        吉林市市售,-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。按成?0 kg體重計(jì),按日攝入量6 g的1倍、5倍和10倍設(shè)計(jì)。加水將林蛙油泡發(fā)12 h后,蓋上保鮮膜放入鍋內(nèi)蒸15 min,冷卻,勻漿,制成所需濃度,冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

        ICR雄性小鼠,20 g~22 g,65只。由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

        1.1.3 主要儀器

        TD-5A離心機(jī):湖南凱達(dá)湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司;JD-XSC小鼠恒溫游泳池:上海繼德教學(xué)實(shí)驗(yàn)器械廠;722分光光度計(jì):上海欣茂儀器有限公司;透射電子顯微鏡:日本JEM-1200EX;LKB超薄切片機(jī):日本;九陽(yáng)料理機(jī):九陽(yáng)股份有限公司。

        1.1.4 主要試劑

        超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)測(cè)試盒:南京建成生物技術(shù)研究所。

        1.2 方法

        1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組

        將小鼠按體重隨機(jī)分為5組,為安靜組、運(yùn)動(dòng)組、林蛙油低劑量組、中劑量組和高劑量組,每組13只小鼠,其中安靜組和運(yùn)動(dòng)組灌胃蒸餾水,林蛙油各組給予對(duì)應(yīng)的林蛙油勻漿液灌胃,每組灌胃劑量為0.4 mL。每周稱重1次,調(diào)節(jié)林蛙油灌胃劑量。

        1.2.2 小鼠運(yùn)動(dòng)模型的建立

        運(yùn)動(dòng)組進(jìn)行4周的游泳訓(xùn)練,水深不低于40 cm,水溫(25±1)℃,每周訓(xùn)練6 d,休息 1 d,每次灌胃 30 min后進(jìn)行游泳訓(xùn)練。第1周每天游泳30 min,以后每周運(yùn)動(dòng)時(shí)間遞增15 min。第4周后最后1 d灌胃30 min后,各組進(jìn)行無(wú)負(fù)重力竭性游泳,記錄游泳時(shí)間。游泳至力竭判斷標(biāo)準(zhǔn)為:小鼠沉入水中8 s不能自主浮上水面,且放在平面上無(wú)法完成翻正反射,記錄小鼠自游泳開始至沉入水中8 s不能浮起時(shí)間。

        1.2.3 超氧化物歧化酶活性(SOD)和丙二醛(MDA)含量測(cè)定

        于第4周最后1 d,各組力竭運(yùn)動(dòng)后,眼球取血,斷頭處死,取肝臟組織,4℃預(yù)冷,生理鹽水洗凈,用濾紙吸去肝臟組織表面水分,制成100g/L的勻漿液,3500 r/min,離心10 min,取上清液,4℃冰箱保存?zhèn)溆?。超氧化物歧化酶活性(SOD)、丙二醛(MDA)含量測(cè)定均采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒,測(cè)試方法嚴(yán)格按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書進(jìn)行。

        1.2.4 透射電鏡標(biāo)本制備

        各組隨機(jī)取小鼠3只,烏拉坦麻醉,固定在解剖臺(tái)上,開腹暴露肝臟,取肝臟右葉,將其切成1 mm×1 mm×1 mm組織塊,放在2.5%戊二醛4%多聚甲醛固定液中,1%鋨酸后固定,梯度丙酮脫水,Epon812包埋,LKM超超薄切片機(jī)切片,透射電子顯微鏡JEM-1200EX進(jìn)行觀察照相。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示,用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,各組間差異采用SNK檢驗(yàn)。

        2 結(jié)果

        2.1 不同劑量林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠游泳至力竭時(shí)間的影響

        不同劑量林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠游泳至力竭時(shí)間的影響,見表1。

        表1 不同劑量林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠游泳至力竭時(shí)間的影響(±s)n=10Table 1 Effect on exhaustive swimming time of athletic training mice with different dosages of oviductus ranae

        表1 不同劑量林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠游泳至力竭時(shí)間的影響(±s)n=10Table 1 Effect on exhaustive swimming time of athletic training mice with different dosages of oviductus ranae

        注:*p<0.05,**p<0.01。

        組別 力竭時(shí)間/min對(duì)照組 95.90±8.41運(yùn)動(dòng)組 111.00±10.36低劑量組 111.40±7.24中劑量組 286.80±59.01**高劑量組 243.50±48.65**

        由表1可知,游泳訓(xùn)練能顯著延長(zhǎng)小鼠力竭性游泳時(shí)間。游泳訓(xùn)練的同時(shí)補(bǔ)充林蛙油,可使力竭性游泳時(shí)間進(jìn)一步顯著延長(zhǎng)。林蛙油各劑量組小鼠游泳時(shí)間中劑量組最高,各劑量組與訓(xùn)練運(yùn)動(dòng)組比較,中、高劑量組有顯著差異(p<0.01)。

        2.2 不同劑量林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠肝臟SOD活性和MDA含量的影響

        不同劑量林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠肝臟SOD活性和MDA含量的影響,見表2。

        表2 林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠肝臟SOD活性和MDA含量的影響(±s)n=10Table 2 Effect on SOD activity and MDA amount in liver of athletic training mice with different dosages of oviductus ranae

        表2 林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠肝臟SOD活性和MDA含量的影響(±s)n=10Table 2 Effect on SOD activity and MDA amount in liver of athletic training mice with different dosages of oviductus ranae

        注:*p<0.05,**p<0.01。

        組別SOD/(U/mgrpot)MDA/(nmoL/mgrpot)對(duì)照組 11.48±0.86 3.86±1.00運(yùn)動(dòng)組 9.26±0.97** 3.91±0.78低劑量組 10.22±0.86* 3.50±0.58中劑量組 11.13±0.42** 3.37±0.53高劑量組 10.80±77** 3.35±0.44

        表2顯示,運(yùn)動(dòng)組與對(duì)照組比較,SOD活性顯著降低,有顯著差異(p<0.01)。運(yùn)動(dòng)組與林蛙油各劑量組比較,SOD活性顯著降低,其中低劑量組(p<0.05),中、高劑量組(p<0.01)。MDA的含量運(yùn)動(dòng)組最高,林蛙油各劑量組有下降趨勢(shì),與運(yùn)動(dòng)組相比,無(wú)顯著異。

        2.3 林蛙油對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠肝臟組織超微結(jié)構(gòu)的影響

        對(duì)照組肝細(xì)胞核呈圓形,核膜完整,核內(nèi)常染色質(zhì)多,胞質(zhì)內(nèi)可見較豐富排列整齊的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和結(jié)構(gòu)完整的線粒體,糖原顆粒分布均勻(見圖1~圖2)。游泳組核仁可見,胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少,輕度擴(kuò)張,線粒體減少呈致密狀,胞質(zhì)基質(zhì)高度空化,細(xì)胞器局

        3 討論

        運(yùn)動(dòng)性疲勞是由運(yùn)動(dòng)而引起的運(yùn)動(dòng)能力和身體功能暫時(shí)下降現(xiàn)象。力竭是指肌肉或器官完全不可能維持運(yùn)動(dòng)的特殊疲勞現(xiàn)象。隨著對(duì)自由基研究的深入,自由基生成的增加是導(dǎo)致疲勞的重要因素之一。在正常生理情況下,機(jī)體保持低水平自由基,劇烈運(yùn)動(dòng)會(huì)使自由基生成量增多,是誘發(fā)疲勞的原因之一[7-8]。力竭運(yùn)動(dòng)作為一種生理應(yīng)激,使機(jī)體肝臟產(chǎn)生的自由基增多已被許多實(shí)驗(yàn)證實(shí)[9-12],MDA作為脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)物之一,其含量能間接反映機(jī)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生情況和機(jī)體組織細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化程度。SOD能有部消失,糖原顆粒減少(見圖3~圖4)。林蛙油組與運(yùn)動(dòng)組有相同情況的變化,但損傷程度明顯較運(yùn)動(dòng)組輕(見圖 5~圖 6)。效清除自由基,阻止脂質(zhì)過(guò)氧化,保持機(jī)體細(xì)胞免受運(yùn)動(dòng)性損傷。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,小鼠補(bǔ)充林蛙油后,SOD活性增加,MDA的含量下降,有明顯的抗自由基氧化的功能,可阻止細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化,提高小鼠運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練的運(yùn)動(dòng)能力,延緩運(yùn)動(dòng)疲勞的發(fā)生。

        許多學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)過(guò)急性力竭或劇烈運(yùn)動(dòng)后,體內(nèi)產(chǎn)生過(guò)多的自由基對(duì)肝臟造成損傷。表現(xiàn)為線粒體腫脹,空泡化,膜與嵴溶解,有基質(zhì)電子密度不均勻現(xiàn)象;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)斷裂、減少、變形、扭曲,規(guī)則分布消失;糖原分布減少;細(xì)胞核出現(xiàn)不規(guī)則的變化,電子密度明顯變異[9-12]。本研究結(jié)果表明,小鼠力竭運(yùn)動(dòng)后,也有相似的結(jié)構(gòu)變化,補(bǔ)充林蛙油可使肝細(xì)胞損傷減輕。這可能是林蛙油能提高肝臟細(xì)胞SOD活性和降低MDA含量,有利于自由基的清除。表明林蛙油具有保護(hù)肝臟細(xì)胞正常結(jié)構(gòu),增強(qiáng)機(jī)體防御體系的功能,進(jìn)而防止運(yùn)動(dòng)性損傷及提高運(yùn)動(dòng)能力,也為林蛙油的深度開發(fā)提供參考。

        [1]胡鑫,劉成柏,陳曉平,等.林蛙油中主要營(yíng)養(yǎng)保健成分含量的研究[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,25(2):218-220

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        [10]唐量,熊正英.蘆薈對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠肝組織自由基代謝及超微結(jié)構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志,2002,21(6):607-609

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