楊惠新

(鶴山市計(jì)劃生育服務(wù)站，廣東鶴山529700)

OFT與MCV聯(lián)合檢測(cè)在地中海貧血產(chǎn)前篩查中的應(yīng)用

楊惠新

(鶴山市計(jì)劃生育服務(wù)站，廣東鶴山529700)

目的探討紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)(Osmotic fragility test，OFT)與平均紅細(xì)胞容積檢測(cè)(Mean corpuscular volume，MCV)兩種方法聯(lián)合使用在孕婦產(chǎn)前地中海貧血篩查的優(yōu)越性。方法選取2010年8月至2011年10在我站產(chǎn)前檢查的孕婦312例，抽取靜脈血，獨(dú)立進(jìn)行OFT、MCV檢測(cè)和PCR基因診斷。以PCR基因診斷為參照，對(duì)比分析OFT、MCV單項(xiàng)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度等指標(biāo)。結(jié)果地貧基因攜帶率為7.69%，OFT檢測(cè)靈敏度高于MCV(91.67%與87.50%)，OFT檢測(cè)特異度低于MCV(88.54%與92.36%)；OFT和MCV平行聯(lián)合檢測(cè)提高檢測(cè)靈敏度，系列聯(lián)合檢測(cè)提高特異度和準(zhǔn)確度。結(jié)論OFT和MCV聯(lián)合檢測(cè)在產(chǎn)前地中海貧血篩查中具有重要價(jià)值，其應(yīng)用有利于預(yù)防與控制地中?；純撼錾?，提高優(yōu)生優(yōu)育服務(wù)質(zhì)量。

地中海貧血；篩查；紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)；平均紅細(xì)胞容積

地中海貧血(地貧)是世界范圍最常見的單基因遺傳性血紅素合成障礙疾病，目前國(guó)內(nèi)外都無有效的治療方法。在我國(guó)，其發(fā)病率為3%～8%，廣東、廣西和海南等是高發(fā)地區(qū)。廣泛開展產(chǎn)前篩查，降低地貧兒出生率是降低該疾病發(fā)病率的最有效措施[1]。為優(yōu)化地貧篩查方法，本站對(duì)紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)(Osmotic fragility test，OFT)和平均紅細(xì)胞容積(Mean corpuscular volume，MCV)兩種方法聯(lián)合使用情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象選取2010年8月至2011年10月到我站進(jìn)行產(chǎn)前檢查單胎妊娠孕婦為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：無地貧檢出史；無貧血癥狀；未接受輸血和鐵劑治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：有其他已知異常型血紅蛋白，特別是HbE型者；失訪者；無檢測(cè)結(jié)局資料者。對(duì)納入研究的312例孕婦開展標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)前保健，抽取其外周靜脈血樣5 ml，添加EDTA抗凝劑保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 OFT檢測(cè)用OFT檢測(cè)紅細(xì)胞在低滲溶液中的穩(wěn)定性。取1 ml血樣，于1.5 ml離心管中3 000 r/min離心5 min，棄血漿，將10 μl紅細(xì)胞加入10 ml含0.45%甘油的氯化鈉磷酸緩沖溶液中，翻轉(zhuǎn)離心管混合15 s后，記錄2 min的溶血?jiǎng)恿W(xué)情況，間隔時(shí)間為2 s，測(cè)定溶液620 nm光密度值。OFT值以溶血細(xì)胞百分比表示。計(jì)算方法：(OD15-OD120)×100/OD15。判斷標(biāo)準(zhǔn)：OFT＜60為異常。

1.3 MCV檢測(cè)MCV測(cè)定用Sysmex公司的自動(dòng)血液分析儀進(jìn)行，80 fl為MCV的截?cái)嘀怠?/p>

1.4 血清鐵蛋白檢測(cè)檢測(cè)血清鐵蛋白以排除缺鐵性貧血。利用AXSYM免疫化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行分析。

1.5 地貧基因診斷檢測(cè)用TIANGEN試劑盒提取篩查陽性者外周血樣DNA，深圳益生堂生物公司的試劑盒鑒定α-地中海貧血和β-地中海貧血攜帶者。其中，α-珠蛋白基因以PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析，β-珠蛋白基因的PCR產(chǎn)物的反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行分析。該方法能對(duì)3種常見缺失型和6種非缺失型α-地貧及17種β-地貧進(jìn)行分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法檢測(cè)方法靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值均用百分比表示，不同檢測(cè)方法指標(biāo)間的比較采用χ2檢驗(yàn)。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)分析在SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件中進(jìn)行。P＜0.05時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因診斷結(jié)果312例產(chǎn)前檢查孕婦中，α-地貧基因基因攜帶者有14例，檢出率為4.49%；β-地貧基因攜帶者為8例，檢出率2.56%；α/β復(fù)合地貧基因攜帶者2例，檢出率為0.6%。地貧基因攜帶者總檢出率為7.69%。

2.2 單項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果OFT檢測(cè)的靈敏度=22/ 24=91.67%，特異度=255/288=88.54%，其陰性預(yù)測(cè)值= 255/257=99.22%，陽性預(yù)測(cè)值=22/55=40.00%，準(zhǔn)確度= 277/312=88.78%。MCV檢測(cè)的敏感性=21/24=87.50%，特異性=266/288=92.36%，其陰性預(yù)測(cè)值=266/269= 98.88%，陽性預(yù)測(cè)值=21/43=48.84%，準(zhǔn)確度=287/312= 91.99%。兩種檢測(cè)方法比較，OFT靈敏度較高，而MCV檢測(cè)特異性和準(zhǔn)確度較高，見表1和表2。

表1 OFT檢測(cè)結(jié)果(例)

表2 MCV檢測(cè)結(jié)果(例)

2.3 兩種方法聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果OFT與MCV平行檢測(cè)(OFT或MCV之一為陽性者被視為檢測(cè)陽性)靈敏度=23/24=95.83%，特異度=253/288=87.85%，陰性預(yù)測(cè)值=253/254=99.61%，陽性預(yù)測(cè)值=23/58= 39.66%，準(zhǔn)確度=276/312=88.46%。系列檢測(cè)(OFT和MCV均為陽性者被視為檢測(cè)陽性)靈敏度=20/24= 83.33%，特異度=288/288=100%，陰性預(yù)測(cè)值=288/ 292=98.63%，陽性預(yù)測(cè)值=20/20=100%，準(zhǔn)確度=308/ 312=98.72%。與單項(xiàng)檢測(cè)比較，兩項(xiàng)指標(biāo)平行檢測(cè)靈敏度顯著增高(χ2=4.96，P＜0.05)，系列檢測(cè)特異度與準(zhǔn)確度顯著增高(χ2=5.72，P＜0.05)，見表3。

表3 OFT與MCV聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果

3 討論

地中海貧血常見于我國(guó)南方地區(qū)，特別是在廣東、廣西等省，由于目前尚無有效的治療措施，其預(yù)防與控制主要依靠產(chǎn)前篩查。目前，基于PCR的基因診斷技術(shù)被認(rèn)為是地貧診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。本研究利用PCR法對(duì)312例孕婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷，發(fā)現(xiàn)地貧基因攜帶者總檢出率為7.69%，低于廣東其他地區(qū)的近期報(bào)道[2-3]。可能是由于本研究獲取樣本時(shí)間段短，采取的樣本量少?；鶎佑?jì)劃生育服務(wù)站在產(chǎn)前篩查中發(fā)揮重要作用，是預(yù)防地貧兒出生率、保障優(yōu)生優(yōu)育的第一道防線。然而，目前國(guó)內(nèi)還有很多計(jì)劃生育服務(wù)站還存在經(jīng)費(fèi)短缺、儀器配備相對(duì)滯后的現(xiàn)狀。為此，如何利用低成本、高效率、快捷、簡(jiǎn)便的篩查方法是我們亟待解決的課題。

OFT是利用最為廣泛的篩查方法，其主要優(yōu)點(diǎn)在于低成本、易操作，但是由于主要靠手工操作，自動(dòng)化程度較低。MCV是近年來引進(jìn)的新篩查技術(shù)，主要依靠自動(dòng)化血液分析儀進(jìn)行，然而其成本較高。MCV與OFT檢測(cè)方法比較在國(guó)內(nèi)外報(bào)道還存在分歧。Sirichotiyakul等[1]研究發(fā)現(xiàn)，OFT檢測(cè)靈敏度高于MCV，而MCV特異度高于OFT。而王曉忠等[3]的研究認(rèn)為，MCV的靈敏度高于OFT，OFT的特異性高于MCV。我們將312例孕婦產(chǎn)前篩查結(jié)果與基因診斷的結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)OFT檢測(cè)的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度分別為91.67%、88.54%和88.78%；而MCV分別為87.50%、92.36%和91.99%。兩者相比，OFT靈敏度顯著高于MCV，而MCV特異度和準(zhǔn)確度顯著高于OFT。該結(jié)果與Sirichotiyakul等[1]的結(jié)果相似?？赡苁且?yàn)镾irichotiyakul等[1]和我們的調(diào)查均采取了橫斷面研究，參與檢查孕婦的基因診斷與OFT、MCV篩查同時(shí)獨(dú)立進(jìn)行，避免了結(jié)果的相互干擾，攜帶者與非攜帶者比例也更接近于篩查人群。而王曉忠等[4]是選取已知病例和對(duì)照樣本進(jìn)行進(jìn)行檢測(cè)，病例與對(duì)照數(shù)量的比例與實(shí)際參與篩查的人群并不一定相符。

對(duì)OFT和MCV聯(lián)合結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，與單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果相比，平行檢測(cè)靈敏度顯著增高，而系列檢測(cè)的特異性和準(zhǔn)確度顯著增高。本研究結(jié)果提示，OFT檢測(cè)和MCV檢測(cè)都不失為孕婦產(chǎn)前地貧篩查的有效方法。在條件相對(duì)滯后的檢測(cè)機(jī)構(gòu)，可以采用成本低廉、操作簡(jiǎn)單、靈敏度較高的OFT檢測(cè)法進(jìn)行篩查。在有條件配備自動(dòng)化血液分析儀的機(jī)構(gòu)，可根據(jù)實(shí)際情況利用OFT和MCV平行聯(lián)合檢測(cè)，以提高檢測(cè)的靈敏度，減少漏檢；或利用系列聯(lián)合檢測(cè)提高特異性和準(zhǔn)確度，降低假陽性率。

總之，OFT和MCV聯(lián)合檢測(cè)在產(chǎn)前地中海貧血篩查中具有重要價(jià)值，其應(yīng)用有利于預(yù)防與控制地中?；純撼錾?，提高優(yōu)生優(yōu)育服務(wù)質(zhì)量。

[1]Sirichotiyakul S,Wanapirak C,Srisupundit K.et al.A comparison of the accuracy of the corpuscular fragility and mean corpuscular volume tests for the alpha-thalassemia 1 and beta-thalassemia traits [J].International Journal of Gynecology and Obstetrics,2009,107: 26-29.

[2]紀(jì)妍,林靜吟,李旭艷.地中海貧血的產(chǎn)前篩查及產(chǎn)前診斷探討[J].海南醫(yī)學(xué),2009,20(9):104-105.

[3]容永忠,李斌,賴兆新,等.地中海貧血產(chǎn)前篩查及基因診斷研究[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志,2006,14(5):7-9.

[4]王曉忠,曾學(xué)輝,占葆娥.MCV和RBC脆性及血紅蛋白電泳在產(chǎn)前篩查地中海貧血的價(jià)值[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2009,13(6): 761-763.

R446.11+3

A

1003—6350(2012)09—095—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.09.041

2011-11-28)

楊惠新(1972—)，女，廣東省鶴山市人，主治醫(yī)師，本科。