謝寧

(南寧市第四人民醫(yī)院檢驗科，廣西南寧530023)

3905例艾滋病患者血培養(yǎng)病原菌分布結(jié)果分析

謝寧

(南寧市第四人民醫(yī)院檢驗科，廣西南寧530023)

目的了解艾滋病患者血培養(yǎng)病原菌的分布情況。方法采用BACTEC9050血培養(yǎng)儀進行血液培養(yǎng)，使用VITEK-32全自動微生物分析儀進行細菌鑒定，沙門菌以血清學(xué)結(jié)果為準，部分菌株使用傳統(tǒng)常規(guī)方法鑒定。結(jié)果2008年1月至2010年12月我院艾滋病患者的血液標本3 905份，共分離出628株致病菌，培養(yǎng)陽性率為16.1%(628/3905)，以單一菌為主；首位為馬爾尼菲青霉菌389株，其后依次為新型隱球菌83株，凝固酶陰性的葡萄球菌45株，沙門氏菌屬40株。結(jié)論艾滋病患者血液病原菌以馬尼菲青霉菌和新型隱球菌為主，表明在HIV感染率高的地區(qū)，這兩種真菌的感染率也較高；注意少見病原體引起的感染。臨床醫(yī)師應(yīng)及時對艾滋病患者做血液培養(yǎng)，微生物檢驗人員加強對這兩種真菌的認識。

艾滋病；血培養(yǎng)；病原菌

艾滋病患者因感染人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)后造成機體免疫系統(tǒng)功能下降，往往表現(xiàn)出各種機會性感染。敗血癥、菌血癥又是艾滋病患者病情加重乃至死亡的重要原因。為了解艾滋病患者血培養(yǎng)標本病原菌的種類，為臨床合理有效治療血液感染疾病提供依據(jù)。本文總結(jié)分析了三年來3 905份艾滋病患者血液培養(yǎng)，結(jié)果如下：

1 材料與方法

1.1 標本來源和采集標本來源于2008年1月至2010年12月住院及門診已確診的3 905例艾滋病患者，其中男3173例，女732例，年齡1～77歲。無菌體液標本以血液、骨髓為主。標本采集時間：按照《臨床微生物學(xué)血培養(yǎng)操作規(guī)范》[1]，患者入院后應(yīng)用抗生素治療之前，嚴格無菌操作采集血量8～10 ml(盡可能按1:10比例)，按操作規(guī)程加入相應(yīng)的血培養(yǎng)瓶做需氧增菌培養(yǎng)。已治療的患者在下一次抗生素使用前采集標本。

1.2 儀器和試劑BACTEC9050全自動血培養(yǎng)儀及專用標準需氧血培養(yǎng)瓶。VITEK-32全自動微生物分析系統(tǒng)及專用細菌鑒定卡。沙保氏培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂均為杭州天和公司提供。

1.3 方法

1.3.1 微生物培養(yǎng)采用BACTEC9050血培養(yǎng)儀進行振蕩培養(yǎng)和自動檢測。連續(xù)恒溫震蕩方式，使微生物易于快速生長，24 h連續(xù)監(jiān)測，每10 min自動讀取熒光數(shù)據(jù)信號，讀取各培養(yǎng)瓶內(nèi)的動態(tài)變化，當熒光值增高與所產(chǎn)生的CO2量成正比時儀器報警“陽性”。儀器的溫度設(shè)置為(35±1)℃。血液標本陰性報警時限設(shè)定7 d。儀器陽性報警后及時轉(zhuǎn)種血平板、麥康凱平板和沙保氏培養(yǎng)基，35℃做需氧培養(yǎng)分離菌株，沙保氏平板分別置于25℃和35℃分離培養(yǎng)。陰性標本繼續(xù)放35℃溫箱培養(yǎng)到12 d再用血平板盲轉(zhuǎn)35℃培養(yǎng)2 d無細菌生長報告陰性。

1.3.2 微生物鑒定使用VITEK-32進行菌種的鑒定。沙門菌以血清學(xué)結(jié)果為準，部分菌株使用傳統(tǒng)常規(guī)方法鑒定。絲狀真菌用沙氏培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，再根據(jù)菌落特征、培養(yǎng)特性、革蘭染色及鏡下形態(tài)進行鑒定。

1.3.3 質(zhì)量控制所用的培養(yǎng)基、染液、試劑等均用標準菌株ATCC25922、ATCC25923、ATCC27853進行質(zhì)量控制。微生物實驗室符合生物安全Ⅱ級要求，并嚴格消毒，排除實驗室污染可能。

2 結(jié)果

2.1628 株分離菌的分布情況從3 905份標本中共分離出628株致病菌，培養(yǎng)陽性率為16.1% (628/3 905)。除2例為復(fù)數(shù)菌(1例為馬爾尼菲青霉菌和表皮葡萄球菌，另1例為馬爾尼菲青霉菌和大腸艾希氏菌)外，其余均為單一菌種，628株分離菌株構(gòu)成比見表1。

2.2 不同年份血液培養(yǎng)分離菌株比較三年培養(yǎng)分離菌株，前四位主要分離菌馬尼菲青霉菌、新型隱球菌、凝固酶陰性的葡萄球菌和沙門氏菌屬差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表1 628株分離菌的分布情況

表2 2008年、2009年、2010年血液培養(yǎng)分離菌比較

2 討論

本組資料顯示，馬尼菲青霉菌和新型隱球菌依然是我院艾滋病患者敗血癥發(fā)生的主要病原菌，與國內(nèi)外不少資料報道相似[2-5]。在所分離的628株致病菌中，馬尼菲青霉菌占分離菌的61.9%，高于其他菌很多，而且感染病例全部為艾滋病患者，說明馬尼菲青霉菌在正常健康人群感染率較低，在免疫功能缺陷者特別是艾滋病患者感染率較高，因此馬尼菲青霉菌是艾滋病患者機會感染的特有的重要致病菌。主要原因是：馬爾尼菲青霉菌多發(fā)于東南亞及中國南部等氣候溫熱潮濕地區(qū)，廣西所處的地帶在氣候、溫度和濕度都正好符合該菌的生長條件，而且免疫力低下者為易感人群。同時馬尼菲青霉菌感染者的臨床表現(xiàn)多種多樣，包括發(fā)熱、全血細胞減少、肝脾腫大、肺炎等，感染累及多個臟器，多見于肺、肝和皮膚，易侵犯血管形成菌血癥，全身播散型報道越來越多[6]。自1973年第1例淋巴瘤患者發(fā)生播散型馬爾尼菲青霉菌后，世界各地報道也不斷增加，至今有將近140例的病例報告，其中85%發(fā)生于艾滋病(AIDS)患者，已成為AIDS的臨床診斷指征之一[7]。因此臨床醫(yī)生應(yīng)正確認識此病的臨床特點，引起高度的重視，盡早做血培養(yǎng)檢查，使該病得到早期診斷、早期治療。近年來，鑒于艾滋病在中國的流行現(xiàn)狀，且早期窗口期常常不能在初次檢查中獲得陽性結(jié)果，因此，對馬尼菲青霉菌感染者應(yīng)警惕可能存在艾滋病。馬爾尼菲青霉菌鑒定的主要依據(jù)：(1)雙相性真菌；(2)菌落形態(tài)；(3)鏡下形態(tài)。即在25℃～28℃條件下生長特征是菌絲相，48 h后基質(zhì)內(nèi)可見玫瑰紅色，呈細長分隔菌絲，有典型的帚狀枝；37℃條件下生長是酵母相，呈卵圓形、橢圓形長形酵母樣孢子，孢子中間可見分隔為臘腸形細胞，可見少量菌絲。

新型隱球菌占分離菌的13.2%，位居第二，有報道其發(fā)生率為6%～l0%，在非洲的發(fā)病率較高，而在歐美地區(qū)的發(fā)病率較低[8]，是引起AIDS患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的最常見病原體。凝固酶陰性的葡萄球菌占分離菌的第三，原因可能是AIDS患者免疫功能低下，致病菌容易通過皮膚、肺部感染或醫(yī)院交叉感染等途徑而感染有關(guān)，有待進一步探討。通過菌種分析發(fā)現(xiàn)馬紅球菌在AIDS患者感染率較高，這與近年的報告是一致的[5]，在非AIDS患者中少見報道[9-10]。馬紅球菌在血平板35℃培養(yǎng)18～24 h可見黏液狀的、產(chǎn)生桔紅、橙紅色菌落，新鮮菌落涂片革蘭氏染色陽性，部分抗酸染色陽性，可見菌體呈多形態(tài)性，觸酶試驗陽性。沙門氏菌屬中以傷寒沙門氏菌和豬霍亂沙門氏菌為主，金黃色葡萄球菌未發(fā)現(xiàn)甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)菌株。

艾滋病患者由于免疫功能缺陷，常常以合并各種感染而就醫(yī)，而血液感染又是比較嚴重的并發(fā)癥，因此及時做血液培養(yǎng)就顯得十分重要，以便發(fā)現(xiàn)病原菌早期治療。本試驗使用的是BACTEC9050血培養(yǎng)儀，采用的是連續(xù)振蕩、24 h連續(xù)監(jiān)測的培養(yǎng)法，大大縮短了陽性的報告的時間，也提高了檢出率。應(yīng)該注意的是：由于BACTEC9050血培養(yǎng)儀的普通需氧血培養(yǎng)默認時間為只有7 d，如果儀器報陰性后直接發(fā)報告，漏檢率會比較高。我們在實際工作中發(fā)現(xiàn)，延長血培養(yǎng)的時間到14 d能提高陽性檢出率，而且所有血標本都要至少盲轉(zhuǎn)一次，且轉(zhuǎn)種后不能只培養(yǎng)24 h，應(yīng)培養(yǎng)48 h以上，特別是馬爾尼菲青霉菌大部分需要培養(yǎng)48 h后才能看到菌落，這樣就能避免漏檢，提高陽性率。

綜上所述，艾滋病患者血液病原菌連續(xù)三年均以馬尼菲青霉菌和新型隱球菌為主，表明在HIV感染率高的地區(qū)，這兩種真菌的感染率也較高，且病情兇險，若不及時治療其死亡率極高。而且艾滋病患者會出現(xiàn)各種少見的病原菌，使微生物實驗室檢測的工作將愈來愈重要，因此臨床醫(yī)師應(yīng)及時對艾滋病患者做血液培養(yǎng)，微生物檢驗人員加強對這些病原菌的認識，及時更新知識，迎接挑戰(zhàn)。

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R512.91

A

1003—6350(2012)09—089—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.09.039

2011-12-06)

謝寧(1967—)，女，廣西南寧市人，主管技師。