劉玉明，馬建榮

(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院神經(jīng)外科，湖南長沙410007)

芬太尼對蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的影響

劉玉明，馬建榮

(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院神經(jīng)外科，湖南長沙410007)

目的研究芬太尼(Fentanyl)對蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的影響及其作用機(jī)制。方法選用健康成年家兔72只，隨機(jī)分成假手術(shù)對照組(A組)、SAH組(B組)、芬太尼靜脈干預(yù)組(C組)、芬太尼肌注干預(yù)組(D組)。每天進(jìn)行神經(jīng)生物學(xué)評分，并在實(shí)驗(yàn)24 h、72 h、7 d后處死，取基底動脈進(jìn)行H-E染色，觀察管壁情況，同時取左側(cè)海馬分別行HE染色及免疫組化染色，觀測神經(jīng)元密度、Bcl-2及Bax的表達(dá)。結(jié)果SAH后Bcl-2、Bax表達(dá)均增加，芬太尼干預(yù)后Bcl-2表達(dá)升高，Bax表達(dá)下降。B組的神經(jīng)生物學(xué)評分、神經(jīng)元密度、Bcl-2及Bax的表達(dá)與C、D組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論芬太尼可抑制CVS后細(xì)胞凋亡，可能通過促進(jìn)SAH家兔Bcl-2的表達(dá)而抑制Bax表達(dá)。

腦血管痙攣；芬太尼；家兔；腦保護(hù)；Bax；Bcl-2

腦血管痙攣(CVS)作為蛛網(wǎng)膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage，SAH)后的常見并發(fā)癥以及致殘、致死的重要原因，已經(jīng)得到多家研究證實(shí)[1]，其發(fā)生率達(dá)30%～90%，常導(dǎo)致十分嚴(yán)重的腦組織缺血缺氧或者遲發(fā)性的缺血性腦損害，甚至出現(xiàn)腦梗死。目前盡管對SAH后CVS的機(jī)理進(jìn)行了廣泛的研究，但其發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明。既往研究表明，阿片受體激動劑能夠減輕組織的缺血再灌注損傷[2]，本實(shí)驗(yàn)的目的在于通過建立SAH模型，觀察實(shí)驗(yàn)中家兔基底動脈管壁變化和腦組織切片中神經(jīng)元存活數(shù)及Bax、Bcl-2表達(dá)強(qiáng)度的變化情況，從而研究芬太尼對于SAH后CVS的腦組織有無保護(hù)作用以及其可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物及分組選取健康的成年家兔72只(湘雅醫(yī)學(xué)院動物學(xué)部提供)，性別不限，兔齡3～4個月，體重1.5～2.5 kg。隨機(jī)分成4組，每組18只，每組都依次按照設(shè)計的三個時間點(diǎn)(24 h、72 h、7 d)隨機(jī)再分為3個亞組，故共含12個亞組。A組為對照的假手術(shù)組，B組為SAH組，C組為芬太尼靜脈干預(yù)組，D組為芬太尼肌注干預(yù)組。

1.2 藥品及試劑芬太尼(湖北宜昌人福藥業(yè)，每支0.1 mg)，SA1022型SABC型免疫組化試劑盒，多聚體抗兔IgG-HRP(SV0002-12)，DAB顯色試劑盒(AR1022)，Bcl-2多抗，Bax多抗(均為武漢博士德公司)。

1.3 制作實(shí)驗(yàn)動物模型、藥物干預(yù)及標(biāo)本處理采用枕大池二次注血法+一側(cè)頸內(nèi)動脈結(jié)扎法[3]，手術(shù)中采用10%水合氯醛(200 mg/kg)經(jīng)耳緣靜脈注射行全身麻醉。先行結(jié)扎右側(cè)頸內(nèi)動脈：將家兔仰臥，束縛四肢及兔牙，固定于實(shí)驗(yàn)臺四角，頸部中部及右側(cè)備皮，75%酒精消毒，加用1%利多卡因行局部麻醉，選頸部正中偏右側(cè)切口，長約5 cm，找到右側(cè)頸總動脈，遠(yuǎn)、近端穿線，遠(yuǎn)心端先結(jié)扎。用22 G頭皮針朝向近心端插入頸內(nèi)動脈，抽取動脈血(約2 ml)備用，結(jié)扎近心端，關(guān)閉切口，消毒?？焖賹⒓彝酶母┡P為，再次固定，行枕大池注血操作：項(xiàng)背部備皮、消毒、局麻同前，切口取枕外粗隆至第二頸椎的枕下正中部位，長約3 cm，顯露至寰枕筋膜，采用自制穿刺針小心穿刺，進(jìn)針深度為超過筋膜約1 mm，緩慢回抽，抽出腦脊液約1.5 ml，再緩慢注入上述采取的自體動脈血1 ml，雙擊電凝電凝穿刺部位防止腦脊液漏。止血，抗生素(無菌生理鹽水稀釋的慶大霉素)沖洗，縫合，消毒。讓家兔保持頭低腳高位30 min，以保證基底池有注入的血。48 h后行枕大池第二次注血，操作基本同前。假手術(shù)組僅做兩次同樣的手術(shù)切口來顯露右側(cè)頸總動脈和寰枕筋膜，并行兩次結(jié)扎右側(cè)頸總動脈的手術(shù)操作。

1.4 方法枸櫞酸芬太尼注射液用法：C組按0.05 mg·kg-1·次-1用生理鹽水稀釋10倍后緩慢耳緣靜脈注射；D組按0.05 mg·kg-1·次-1稀釋一倍后行大腿肌肉注射，均為2次/d，中間間隔1 h。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計分別再飼養(yǎng)24 h、72 h、7 d后處死并采集標(biāo)本。先行灌注再斷頭取腦，灌注前予10%水合氯醛(200 mg/kg)耳緣靜脈注射麻醉。將家兔仰臥位固定于實(shí)驗(yàn)臺上，開胸，于膈肌上用止血鉗夾閉胸主動脈及下腔靜脈，再經(jīng)心尖行左心室插管。插管成功后剪開右心耳，先用300 ml生理鹽水加壓(灌注液體液平面與試驗(yàn)臺的垂直距離＞70 cm)沖洗至沖洗液變淡紅色或澄清，再用4%多聚甲醛溶液灌注，直至流出液體變清或家兔雙上肢抽搐后僵硬，迅速斷頭取腦。在視交叉后方1.4 cm及2.0 cm處垂直于基底動脈，切開腦干獲取帶基底動脈的腦組織冠狀切片，同時沿著縱裂剖開標(biāo)本大腦，分離獲取左側(cè)海馬組織。兩種組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)操作，獲取病理切片，再進(jìn)行H-E染色及Bcl-2、Bax免疫組化。

1.5 數(shù)據(jù)、圖片采集

1.5.1 家兔神經(jīng)生物學(xué)評分方法于家兔處死前，每組實(shí)驗(yàn)動物每天進(jìn)行一次神經(jīng)生物學(xué)評分，內(nèi)容包含攝食及神經(jīng)功能障礙的有無及障礙程度，詳細(xì)的評分標(biāo)準(zhǔn)如下：(1)攝食評分：食量100%，1分；50%～99%，2分；＜50%，3分；0%，4分。(2)神經(jīng)功能障礙分級(4級)：正常，1級；輕度或可疑障礙(嗜睡、活動減少)，2級；中度障礙不伴運(yùn)動異常(肢體無力)，3級；重度障礙伴運(yùn)動異常(劃圈運(yùn)動或行走困難)；4級。

1.5.2 基底動脈的HE切片觀察采用雙盲法，使用光學(xué)顯微鏡將圖像放大100倍，觀測基底動脈血管形態(tài)，并進(jìn)行圖像采集。

1.5.3 左側(cè)海馬的神經(jīng)元切片觀察采取雙盲法，應(yīng)用400倍的光學(xué)顯微鏡，在顯微鏡下選取500μm長度海馬CA1區(qū)，計數(shù)此范圍內(nèi)正常的神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量，從而獲得神經(jīng)元密度(個/mm)(該區(qū)的正常神經(jīng)元數(shù)與該區(qū)長度的比值)。共求得8個數(shù)據(jù)，求出平均值，即為這個實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的觀測指標(biāo)，作為評價缺血程度的指標(biāo)。

1.5.4 觀察免疫組化結(jié)果采取標(biāo)本及切片都嚴(yán)格根據(jù)免疫組化試劑使用說明書來操作。正常情況下Bcl-2、Bax表達(dá)和染色程度的關(guān)系呈正相關(guān)。具體檢測方法：400倍鏡下，在基底動脈的內(nèi)皮細(xì)胞處或者海馬部位CAI區(qū)隨機(jī)取8個視野，采用Motic Images Advanced 3.0圖像分析軟件，得出Bcl-2和Bax陽性細(xì)胞光密度值，兩個指標(biāo)分別取其平均光密度值作為陽性細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)度值。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件來進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析處理。計量資料：采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()，多組間比較采用單因素方差分析，并進(jìn)行組間資料的多重比較。數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布、方差齊者，用LSD檢驗(yàn)方法；而數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布、方差不齊者，用Tamhane檢驗(yàn)方法。計數(shù)資料：采納完全隨機(jī)設(shè)計的多樣本比較的秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。相關(guān)的圖表制作采用Office Word 2003辦公軟件。

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)生物學(xué)評分結(jié)果及分析具體結(jié)果見表1、表2及圖1、圖2，可見SAH后出現(xiàn)飲食量減少及神經(jīng)功能障礙的家兔數(shù)量均隨時間的變化有一個漸進(jìn)性增多，復(fù)又減少的過程。

表1 家兔在各時間點(diǎn)攝食評分中的分布情況(只)

表2 家兔在各時間點(diǎn)神經(jīng)功能評級中的分布情況(只)

圖1 家兔在各時間點(diǎn)進(jìn)食評分中的分布情況(只)

圖2 家兔在各時間點(diǎn)神經(jīng)功能評級中的分布情況(只)

2.2 HE染色結(jié)果

2.2.1 各實(shí)驗(yàn)組的基底動脈在鏡下的表現(xiàn)A組：基底動脈管壁表現(xiàn)為平滑、無增厚，各內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)較完整，內(nèi)層的彈力膜清晰可見，結(jié)構(gòu)亦完整；中膜的平滑肌層較薄，環(huán)繞在血管腔周圍；外膜主要包含成纖維細(xì)胞以及其周邊的疏松結(jié)締組織；在血管外膜和蛛網(wǎng)膜之間僅僅散在分布有少量細(xì)胞。B組：血管管徑縮小，內(nèi)皮細(xì)胞變性、腫脹，染色質(zhì)不均，出現(xiàn)空泡，內(nèi)層彈力板迂曲甚至斷裂，厚薄不均；平滑肌層明顯增厚，平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)增生、結(jié)構(gòu)紊亂；血管外膜與蛛網(wǎng)膜之間可見到多數(shù)炎性細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞等)浸潤。C、D兩組血管表現(xiàn)為不太規(guī)則的輕度收縮，管腔直徑輕度減小，管壁無明顯增厚，內(nèi)層彈力板無明顯皺褶，內(nèi)皮細(xì)胞略有腫脹，在血管外膜與蛛網(wǎng)膜之間可在少部分見到浸潤的炎性細(xì)胞。

2.2.2 腦組織CA1區(qū)鏡下表現(xiàn)A組：神經(jīng)元細(xì)胞呈圓形或者近似圓形，大小較均一，排列整齊有序，胞漿為淡淡紅色，細(xì)胞核為藍(lán)黑色，核大而圓，核仁清晰，染色質(zhì)均勻分布，偶爾可見細(xì)胞凋亡。B組：有大量錐體細(xì)胞凋亡，體積縮小，細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊不清，導(dǎo)致神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，殘存的神經(jīng)元可見噬神經(jīng)細(xì)胞現(xiàn)象。C組和D組亦見細(xì)胞凋亡表現(xiàn)，但在同時間點(diǎn)時要較B組為輕，細(xì)胞排列較B組整齊。說明芬太尼能對SAH后的血管痙攣和繼發(fā)的缺血損傷起到保護(hù)作用，見圖3。

圖3 兔海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)(HE染色×400)

2.2.3 神經(jīng)元密度在統(tǒng)計學(xué)比較上，假手術(shù)A組與手術(shù)三組B、C、D組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，給藥組C組和D組與未給藥組B組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，給藥干預(yù)組中，C組與D組兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，各個實(shí)驗(yàn)組結(jié)果的具體數(shù)據(jù)參見表3。

表3 神經(jīng)元密度()

表3 神經(jīng)元密度()

A組B組C組D組6 6 6 6 190.82±6.49 106.27±7.09 136.53±6.32 138.42±9.36 189.02±8.19 92.50±7.96 116.35±11.64 114.25±14.87 191.62±7.8 79.15±5.69 96.03±9.78 98.57±9.84

2.3 免疫組化染色觀察結(jié)果

2.3.1 bcl-2染色結(jié)果的陽性表達(dá)Bcl-2陽性細(xì)胞在鏡下主要表現(xiàn)為胞質(zhì)彌漫性染色且較均勻，胞質(zhì)呈棕黃色。海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞中bcl-2陽性細(xì)胞的表達(dá)：A組內(nèi)表達(dá)得很少，組內(nèi)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；B、C、D組海馬CA1區(qū)bcl-2表達(dá)均有升高，但升高程度不同，與B組相比，C、D組陽性細(xì)胞數(shù)多且較強(qiáng)；三組bcl-2陽性細(xì)胞數(shù)在72 h時均較24 h及7 d時低，但具體最低谷在何時難以反映；C、D組在各個時間點(diǎn)bcl-2陽性細(xì)胞均比B組多(P＜0.05)；而C、D組兩組之間進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見圖4、表4。

圖4 兔海馬CA1區(qū)Bcl-2免疫組化(DAB顯色×400)

表4 家兔海馬CA1區(qū)bcl-2陽性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度均值()

表4 家兔海馬CA1區(qū)bcl-2陽性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度均值()

A組B組C組D組10.86±2.5 22.95±11.14 32.27±6.58 27.85±8.26 11.14±2.18 16.85±6.72 28.14±5.77 23.96±7.68 10.65±2.62 23.98±9.12 30.34±11.18 24.45±6.12

以上結(jié)果顯示：單純的進(jìn)行腦組織外操作而產(chǎn)生的切口損傷對于腦組織內(nèi)bcl-2的表達(dá)沒有明顯的影響，而蛛網(wǎng)膜下腔出血可以增加腦組織中bcl-2的表達(dá)，而加用的藥物芬太尼同樣促使SAH后腦組織內(nèi)bcl-2的表達(dá)升高

2.3.2 bax染色結(jié)果的陽性表達(dá)以及對結(jié)果的分析類似Bcl-2染色的陽性細(xì)胞，、Bax陽性細(xì)胞在鏡下也主要表現(xiàn)為胞質(zhì)彌漫性染色且較均勻，胞質(zhì)顏色為棕黃色。計數(shù)方法同Bcl-2陽性細(xì)胞計數(shù)。從結(jié)果上看，對照組A組，在海馬神經(jīng)元中，bax陽性細(xì)胞表達(dá)有限，組內(nèi)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；手術(shù)組B、C、D組bax在24 h時海馬CA1區(qū)的表達(dá)即很明顯，72 h最高，明顯高于對照組假手術(shù)A組，A組與B、C、D組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；B組同C、D組相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，說明C、D組各時間點(diǎn)海馬bax陽性細(xì)胞數(shù)與B組有差別，見圖5、表5。

圖5 兔海馬CA1區(qū)Bax免疫組化(DAB顯色×400)：

表5 家兔海馬CA1區(qū)bax陽性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度均值()

表5 家兔海馬CA1區(qū)bax陽性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度均值()

A組B組C組D組11.04±2.63 40.32±2.2 27.54±5.11 31.08±8.27 11.09±3.03 60.91±10.04 24.38±5.98 29.96±3.35 11.09±2.89 29.48±2.78 22.15±4.75 25.95±2.84

以上結(jié)果表明：(1)單純的腦外切口損傷對腦神經(jīng)細(xì)胞中的Bax的表達(dá)影響不大；(2)腦組織中Bax可在SAH后表達(dá)增加；(3)Fen干預(yù)可使SAH后神經(jīng)細(xì)胞中Bax的表達(dá)下降。

3 討論

蛛網(wǎng)膜下腔出血后的CVS是多種因素作用的結(jié)果，目前具體的機(jī)制尚不完全明確。最初人們認(rèn)為芬太尼只有鎮(zhèn)痛作用，后來研究表明，芬太尼能夠在組織的缺血再灌注損傷中抑制細(xì)胞的凋亡反應(yīng)，機(jī)制可能如下：(1)通過激動阿片受體。Zhang等[4]在心肌缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)中，通過給大鼠輸注芬太尼類似物雷米芬太尼作為預(yù)處理，減輕了心肌缺血再灌注損傷，他們認(rèn)為其是通過共同的信號傳導(dǎo)通路，來抑制Ca2+通道的開放，減輕細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載，從而使μ、δ、κ 3種阿片受體來實(shí)現(xiàn)細(xì)胞保護(hù)作用。Yamanouchi等[5]研究認(rèn)為，在δ受體被激動后，可以減少枯否細(xì)胞釋放活性氧或者使細(xì)胞對活性氧產(chǎn)生耐受，從而使細(xì)胞獲得膜穩(wěn)定能力，減輕損傷。Zhang等[6]在心肌實(shí)驗(yàn)中證明，雷米芬太尼能夠激活PKC(蛋白激酶)和mitoKATP通道，從而保護(hù)心??；在缺血再灌注損傷中，mitoKATP通道的開放能夠降低細(xì)胞凋亡。(2)通過非阿片受體依賴性途徑：芬太尼能夠抑制電壓敏感性鈣離子通道，從而產(chǎn)生非內(nèi)皮細(xì)胞依賴性血管舒張作用；又可通過刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞，引起一氧化氮和前列環(huán)素釋放從而舒張血管。而且這些作用均與阿片受體無關(guān)[7]。(3)芬太尼能夠抑制脂多糖誘導(dǎo)的人外周血TNF-α的表達(dá)，作用機(jī)制可能為嗎啡和芬太尼抑制了核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB所致[7]。本實(shí)驗(yàn)通過檢測腦組織神經(jīng)元密度，發(fā)現(xiàn)芬太尼干預(yù)組的神經(jīng)元存活數(shù)要明顯高于SAH組，說明芬太尼在蛛網(wǎng)膜下腔出血時可以減輕神經(jīng)細(xì)胞的死亡，通過觀察基底動脈管壁的變化可以發(fā)現(xiàn)芬太尼干預(yù)組較SAH組有所改善，說明芬太尼對緩解SAH后出現(xiàn)的CVS有一定的作用。

細(xì)胞凋亡是指生物體內(nèi)細(xì)胞在特定的內(nèi)源或外源信號誘導(dǎo)下，其死亡途徑被激活，并在有關(guān)基因的調(diào)控下發(fā)生的程序性死亡過程。凋亡的發(fā)生發(fā)展過程由多種調(diào)節(jié)基因參與完成，這些基因的相互作用決定著細(xì)胞凋亡的進(jìn)程。其中尤以一些腫瘤前體基因和原癌基因表現(xiàn)顯著，如p53、Myc、Bcl-2家族中Bcl-2和Bax等。在這個進(jìn)程當(dāng)中，作為凋亡細(xì)胞內(nèi)在的并且是重要的一個始動因素為半胱氨酸蛋白酶類Caspases[8]，而且Bcl-2以及Bax等多個基因可以通過參與到此Caspases途徑，起到間接地影響疾患發(fā)生時細(xì)胞出現(xiàn)的凋亡[9]。在進(jìn)行Bcl-2克隆時，逐漸發(fā)現(xiàn)了Bcl-2家族的其他成員。根據(jù)其作用的不同，Bcl-2家族被分類為促生存家族(Pro-survial family)與促凋亡家族(Pro-apoptotic family)。除Bcl-2外，促生存的成員尚包括Bcl-xL、Bcl-w等，而Bax和Bak則是促凋亡的成員。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)腦組織受損時，Bcl-2可抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡。其表達(dá)的增加，使即使在外界因素刺激后，細(xì)胞亦不啟動凋亡程序，但對非凋亡性死亡無保護(hù)作用[10]。而當(dāng)Bax缺乏時，海馬區(qū)受損的細(xì)胞少[10]，Bax的高表達(dá)導(dǎo)致線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素C大量釋放，從而激活Caspases-3和Caspases-9，進(jìn)而誘導(dǎo)出現(xiàn)凋亡[10]；Bcl-2可與Bax結(jié)合產(chǎn)生二聚體，從而使Bax失去活性，形成保護(hù)，Bax與Bcl-2呈對抗關(guān)系。所以凋亡的出現(xiàn)不但由凋亡抑制基因的表達(dá)程度決定，而且也因?yàn)榇俚蛲龀蓡T的表達(dá)程度而受到影響，最后取決于它們的相對數(shù)量，也就是相對比值(BCL-2/Bax)可能是決定細(xì)胞生死的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)en促進(jìn)了家兔SAH后CVS時Bcl-2蛋白的表達(dá)，抑制了Bax的表達(dá)，從而使Bcl-2/Bax比率升高，細(xì)胞凋亡受到抑制從而產(chǎn)生腦保護(hù)作用。

因此，F(xiàn)en其抗凋亡作用的部分機(jī)制可能是通過影響B(tài)cl-2、Bax蛋白表達(dá)，從而產(chǎn)生腦保護(hù)作用。另外可能還有其他途徑，尚需進(jìn)一步研究。

[1]薛慎伍.老年性腦血管病治療與預(yù)防[M].北京:人民軍醫(yī)出版社, 2003,6：199.

[2]Matz PG,Fujimura M,Lewen A,et al.Increased cytochrome c-mediated DNA fragmentation and cell death in manganese-superoxide dismutase-deficient mice after exposure to subarachnoid hemolysate [J].Stroke,2001,32(2):506-515.

[3]Choi BJ,Whang KT．Change of hyperexcitability of hippocampus by cyelosporin A and its modulatory action by fentanyl[J].J Korean Med Sci,2002,17(1):96-l02.

[4]Zhang Y,Irwin MG,Wong TM．Remifentanil preconditioning protects against ischemic injury in the intact rat heart[J]．Anesthesiology,2004,101(4):918-923．

[5]Yamanouchi K,Yanaga K,Okudaira S,et al.[D-Ala2,D-Leu5]enkephalin(DADLE)protects liver against ischemia-reperfusion injury in the rat[J].J Surg Res,2003,114(1):72-77．

[6]Zhang Y,Chen ZW,Girwin M,et al.Remifentanil mimics cardioprotective effect of ischemic preconditioning via protein kinase C activation in open chest of rats[J].Acta Pharmacologica Sinica, 2005,26(5):546-550．

[7]Rao Y,Wang YL,Li JG,et al.Effects of morphine and fentanyl on tumor necrosis factor-alpha and interleukin-6 concentrations in human whole blood in vitro[J].Chin Med J(Engl),2004,117(2):303-304．

[8]Zhang H,Li Q,Li Z,et al.The protection of Bcl-2 overexpression on rat cortica neuronal injury caused by analogous ischemia/reperfusion in vitro[J].Neurosci Res,2008,6(2):140-146.

[9]Zhang R,Xue YY,Lu SD,et al.Bcl-2 enhances neurogenesis and inhibits apoptosis of newborn neurons in adult rat brain following a transient middle cerebral artery occlusion[J].Neurobio Dis,2006, 24(2):345-356.

[10]Wei MC,Zong WX,Cheng EH,et a1.Proapoptotic BAX and BAK；a requisite gateway to mitochondrial dysfunction and death[J].Science,2001,292(5517):727-730．

Effect of Fentanyl on cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage.

LIU Yu-ming,MA Jian-rong. Department of Neurosurgery,Xiangya Hospital of Central South University,Changsha 410007,Hunan,CHINA

ObjectiveTo study the effect of Fentanyl on cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage and its mechanism.MethodsSeventy-two healthy adult rabbits were randomly divided into four groups:the control group(group A),SAH group(group B),SAH with fentanyl intravenous(group C)and SAH with fentanyl intramuscular(group D).The rabbits underwent neurobiology score every day.The basar artery was stained by HE,and hippocampus undrewent HE staining and Bcl-2Bax immunohistochemical staining,then the neuron density as well as the expression of Bax and Bcl-2 were detected.ResultsAfter SAH,the expression of Bcl-2 and Bax increased.After intervention with fentanyl,the expression Bcl-2 was increased,while the expression of Bax decreased.,The neurological function score,neuron density and Bax and Bcl-2 expression in group B showed statistically significant differences with those in group C and group D(P＜0.05).ConclusionFentanyl can inhibit neuron apoptosis possibly through enhancing Bcl-2 expression and inhibiting Bax expression.

Cerebral vasospasm;Fentanyl;Rabbit;Brain protection;Bax;Bcl-2

R743

A

1003—6350(2012)09—027—05

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.09.010

2012-01-05)

劉玉明(1977—)，男，湖南省長沙市人，主治醫(yī)師，在讀研究生。