孫 彤 陳凱紅 裴 豪 胡敏濤

1.無錫市第五人民醫(yī)院傳染科 (江蘇無錫，214005) 2.無錫市第五人民醫(yī)院檢驗科

我們研究了康艾注射液對代償期乙型肝炎肝硬化患者血清白細胞介素 (IL)-10、IL-12、IL-18、干擾素-γ (IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的影響，以探討康艾注射液對患者免疫功能的調(diào)節(jié)作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2008年3月至2011年10月在無錫第五人民醫(yī)院傳染科住院的乙型肝炎肝硬化代償期患者60例，病例診斷符合2000年9月西安中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的診斷標準［1］。隨機分成兩組，各30例。康艾組男22例，女8例，年齡32～63(45.10±7.81)歲。對照組男21例，女9例，年齡30～62(44.87±7.72)歲。健康人組20例為2008年5月至2011年10月于本院體檢科體檢的健康人群，年齡27～61(44.90±9.54)歲。

1.2 治療方法 對照組患者口服拉米夫定 (0.1g/次，1次/d)及阿德福韋酯膠囊 (10mg/次，1次/d)，兩種藥物均應(yīng)用24周以上。另選用甘草酸制劑、還原型谷胱甘肽，苦黃注射液等。治療組患者在上述治療基礎(chǔ)上，加用康艾注射液40ml加入10%葡萄糖注射液中靜脈點滴，1次/d，療程兩周。

表1 兩組患者治療前后血清5項指標結(jié)果比較(±s，pg/ml)

表1 兩組患者治療前后血清5項指標結(jié)果比較(±s，pg/ml)

與上治療時間段比較，#P＜0.05，##P＜0.01;兩組不同時段比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與健康對照組比較，△△P＜0.01

組別 TNF-α IFN-γIL-10 IL-12 IL-18艾康組(n=30)治療前 55.81±11.67△△ 60.01±12.47△△ 42.09±10.73△△ 121.57±26.49△△ 261.403 ±20.31△△治療1 周時 68.09 ±19.65△△## 78.10 ±12.48△△## 36.02 ±9.78△△# 163.87 ±38.44△△## 273.63 ±22.10△△##治療兩周時 46.36 ±12.26 88.91 ±11.41 30.26 ±8.81 183.59 ±42.21△△ 324.22 ±19.23△△對照組(n=30)治療前 56.86±11.83△△ 60.47±12.72△△ 43.12 ±15.45 123.72±19.92△△ 220.01 ±12.23△△治療1 周時 78.23 ±15.05△△##＊＊ 70.46 ±11.87△△##＊＊ 40.13 ±13.92△△ 142.08 ±23.03△△##＊＊ 257.98 ±13.59△△##＊＊治療兩周時 54.54 ±12.81△△##* 77.40 ±13.90△△#＊＊ 36.16 ±9.51△△＊ 159.59 ±14.09##＊＊ 310.84 ±34.27##*健康人組(n=20) 36.47 ±12.45 41.71 ±14.91 18.30 ±6.71 74.89 ±20.27 121.48 ±29.12

1.3 觀察指標 所有受試者均于治療前、治療1周及治療兩周時采集外周靜脈血10 ml，盡快分離血清并分裝，-70℃冰箱儲存?zhèn)錂z。細胞因子測定采用雙抗體夾心ELISA法，用全自動酶標分析儀讀取450nm A值，并根據(jù)標準曲線計算TNF-α、IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-18濃度 (pg/ml)，具體步驟按說明書嚴格操作。HBV-M采用時間分辨熒光定量分析法，試劑盒購自上?？迫A公司。HBV DNA定量檢測采用TAG-MAN熒光定量PCR法，試劑盒購自上?？迫A公司。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS 15.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料用±s表示，采用F檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組患者治療前后血清5項指標檢測結(jié)果見表1。

兩組患者 TNF-α、IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-18的水平于治療前比較均無顯著性意義 (P＞0.05)，且均明顯高于健康對照組 (P＜0.01);治療后兩組患者TNF-α的水平于治療1周時達到峰后下降，治療1周與治療前、治療兩周與治療1周時比較，均差異有顯著性意義 (P＜0.05);康艾組治療兩周時TNF-α的水平降至低于治療前的水平 (P＜0.05);對照組治療后TNF-α水平稍低于治療前，但前后比較無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05);組間比較，康艾組治療1周及兩周時的TNF-α水平均低于對照組 (P＜0.05);兩組患者IL-10水平治療后持續(xù)下降，康艾組治療前、中、后比較，差異均有顯著性意義 (P＜0.05);對照組IL-10僅治療后與治療前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05);組間對比，治療兩周時康艾組IL-10水平低于對照組 (P＜0.05)。兩組患者 IFN-γ、IL-12、IL-18水平均于治療后迅速上升，兩組治療前、中、后三者之間比較差異均有顯著性意義 (P＜0.05);組間對比則康艾組治療1周及治療兩周時的水平均明顯高于對照組 (P＜0.05)。

2.2 毒副反應(yīng) 兩組患者在治療期間均未出現(xiàn)明顯毒副反應(yīng)。

3 討論

康艾注射液是由人參、黃芪、苦參經(jīng)現(xiàn)代科學(xué)工藝提取有效成份精制而成的新型中藥復(fù)方制劑，具有扶正固本、補中益氣、解毒散結(jié)之功效。人參提取物含有多種皂苷及人參多糖，人參皂苷能增強T細胞及B細胞功能，誘導(dǎo)IL-2、干擾素產(chǎn)生及增強LAK細胞及NK細胞活性［2］。黃芪在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品，為補藥之長，具有“益氣補虛，扶正固本”之功效。黃芪含有多種氨基酸、微量元素 (硒、錳、鋅、鍺)、總黃酮 (TFA)、黃芪多糖及黃芪總苷等多種有效成分［3］，黃芪多糖能提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能，增強T細胞、NK細胞、LAK細胞、IL-2活性［4］?？鄥⑺靥崛∥锏闹饕煞轂檠趸鄥A，氧化苦參堿能穩(wěn)定細胞膜、激活細胞膜腺苷酸環(huán)化酶，誘導(dǎo)產(chǎn)生肝細胞微粒體藥物代謝酶、清除自由基［5］。

IFN-γ被認為是與肝炎病情程度相關(guān)性最好的細胞因子［6］，IFN-γ主要是由Th(輔助性T細胞)1類細胞產(chǎn)生的一種重要的細胞因子，可以抑制病毒復(fù)制，直接增強NK細胞殺傷病毒感染的細胞，促進細胞毒性T淋巴細胞 (CTL)介導(dǎo)的病毒感染細胞的殺傷［7，8］。IL-10是炎癥過程的一種負性調(diào)控因子，屬于Th2細胞因子，內(nèi)源性IL-10能減少肝細胞的炎性反應(yīng)及減少中性粒細胞與肝竇內(nèi)皮細胞粘附，降低局部炎癥因子活性，限制其對肝臟的毒性，減輕肝臟損害，IL-10還可通過調(diào)節(jié)粘附因子的表達，主要是通過降低它們的含量而間接保護肝臟［9］。TNF-α具有多種生物學(xué)效應(yīng)，適量TNF-α可調(diào)整機體的免疫及代謝作用，增強人體對入侵病毒等的抵抗力，對維持機體內(nèi)部環(huán)境的穩(wěn)定狀態(tài)及抵制各種致病因子具有重要意義，而超值濃度的TNF-α可直接殺傷正常肝細胞和HBV感染的肝細胞，TNF-α通過損傷血管內(nèi)皮細胞，促進白細胞與血管內(nèi)皮細胞的吸附，引起肝臟炎癥反應(yīng)與肝細胞及肝臟的損害。TNF-α還可通過激活磷脂酶A產(chǎn)生脂類介質(zhì)使正常肝細胞破壞，加重肝組織損傷［10］。IL-18具有促進Th1等T細胞、NK細胞、B細胞、Mφ等免疫細胞產(chǎn)生IFN-γ，增強淋巴細胞的細胞毒性和NK細胞、NK-T細胞的殺傷活性，增強 CTL、NK等效應(yīng)細胞FasL表達，提高對 Fas陽性靶(肝)細胞的殺傷作用，促進NK細胞分泌穿孔素介導(dǎo)對靶(肝)細胞的殺傷［11］。IL-12在功能上與IL-18相似，亦可誘導(dǎo)Th1等細胞產(chǎn)生IFN-γ［11］，可獨立地作用于 NK和 CTL細胞，倡導(dǎo)細胞毒肝臟炎性反應(yīng)，而且還具有增強IL-18的炎性作用的功能［12］。

本研究結(jié)果顯示：康艾組IFN-γ、IL-12、IL-18水平均高于對照組，表明康艾組患者之Th1應(yīng)答強于對照組;而Th2特異性細胞因子IL-10于治療后均持續(xù)下降，表明Th2應(yīng)答呈減弱傾向，治療兩周時康艾組水平低于對照組，提示對照組之Th2應(yīng)答強于康艾組。因艾康組Th1應(yīng)答優(yōu)于對照組，而Th2應(yīng)答弱于對照組，有助于艾康組患者病情更早康復(fù)或阻止其病情繼續(xù)加重，此結(jié)果與潘宇［13］的研究相符。

總之，在代償期肝硬化患者中應(yīng)用康艾注射液，可以促進Th1應(yīng)答，促進炎癥消退，使患者盡早康復(fù)或阻止病情進一步加重。

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