趙曉嵐 龔業(yè)清 李仰琪 李嘉彥

復(fù)發(fā)性生殖器皰疹(recurrent genital herpes，RGH)是生殖器部位皮膚粘膜感染單純皰疹病毒(herpes simplex virus，HSV)引起的性傳播疾病。該病的易復(fù)發(fā)性與患者細(xì)胞免疫功能紊亂有關(guān)［1］，為闡明RGH患者免疫異常的機(jī)制，我們采用流式細(xì)胞數(shù)檢測(cè)RGH患者外周血淋巴細(xì)胞CD80/86及CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞中B7－CD28/CTLA－4(CD152)的表達(dá)，探討T淋巴細(xì)胞活化協(xié)同刺激通路在RGH發(fā)病機(jī)制中的作用。

材料與方法

1.臨床資料

50例RGH患者均符合RGH的診斷標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)為患者組。年齡22～66歲，平均(37.76±12.20)歲;所有患者均未接受免疫抑制劑治療，且排除自身免疫性及其他感染性疾病。正常對(duì)照組20例為健康體檢者，與患者組年齡，性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.試劑及儀器

熒光標(biāo)記單克隆抗體CD80－FITC、CD86－PE、CD4－FITC、CD8－FITC、CD28－PE、CD152－PE，同型對(duì)照鼠抗人IgG1－FITC、IgG1－PE雙色標(biāo)記抗體均購自美國eBioscience公司，流式細(xì)胞儀為美國BD公司出品。

3.方法

(1)標(biāo)本：分別抽取50例RGH患者和20例健康體檢者外周血2ml，15%EDTA抗凝，6h內(nèi)送檢。

(2)直接免疫熒光標(biāo)記：取抗凝全血100μL，加人熒光抗體(CD4－FITC/CD28－PE;CD8－FITC/CD28－PE;CD4－FITC/CD152－PE;CD8－FITC/CD152－PE;CD8y0－FITC/CD86－PE)各20μL。每份血標(biāo)本設(shè)同型對(duì)照，對(duì)照管中加人抗凝血100μL，加人熒光抗體IgG1－FITC、IgG1－PE20Ul.室溫避光孵育30min，溶血，上機(jī)檢測(cè)。

(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)：經(jīng)Fs/ss設(shè)定淋巴細(xì)胞群為A門，依次上機(jī)檢測(cè)標(biāo)本，每份標(biāo)本測(cè)定10000個(gè)以上淋巴細(xì)胞。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：本數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，患病組與對(duì)照組間比較采用SNK－q方差分析法進(jìn)行檢驗(yàn)。

結(jié) 果

1.外周血淋巴細(xì)胞CD80、CD86陽性表達(dá)

RGH患者組與對(duì)照組比較，CD80、CD86的陽性表達(dá)較對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.外周血CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞CD28/CD152的陽性表達(dá)

對(duì)照組CD8+/CD28陽性表達(dá)顯著高于患者組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，患者組的CD4+/CD152、CD8+/CD152的陽性表達(dá)顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 RGH患者外周血淋巴細(xì)胞CD80/86及CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞CD28/CD152的陽性表達(dá)(±s)%

表1 RGH患者外周血淋巴細(xì)胞CD80/86及CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞CD28/CD152的陽性表達(dá)(±s)%

分組 例數(shù) CD80 CD86 CD4+/CD28 CD8+/CD28 CD4+/CD152 CD8+/CD152對(duì)照組 20 3.26±0.11 3.92±0.20 27.89±9.39 13.36±3.0 8 0.34±0.47 0.98±1.52患者組 50 1.01±0.22 1.98±0.83 28.02±5.66 9.78±4.70 7.31±0.77 4.95±1.29

討 論

誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞活化、增殖、分化為效應(yīng)細(xì)胞需要兩種信號(hào)刺激(即雙信號(hào)作用)。第一信號(hào)來自抗原與T細(xì)胞受體的結(jié)合，第二信號(hào)是由抗原呈遞細(xì)胞(APC)上的協(xié)同刺激分子與T淋巴細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合而產(chǎn)生，T淋巴細(xì)胞識(shí)別抗原后才能充分活化表現(xiàn)效應(yīng)功能。APC表面最具代表的協(xié)同刺激分子為B7家族，B7家族基本成員：B7－1(CD80)、B7－2(CD86)結(jié)合到T淋巴細(xì)胞表面的CD28或CD152，產(chǎn)生協(xié)同刺激效應(yīng)發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能［2］。當(dāng)CD80、CD86與CD28結(jié)合，可有效地刺激T淋巴細(xì)胞活化、增殖和分泌許多細(xì)胞因子，尤其是白介素－2上調(diào)［3］。當(dāng)CD80、CD86與CD152結(jié)合，可抑制T淋巴細(xì)胞增殖，提高抗原特異性凋亡，并抑制TH1、TH2細(xì)胞因子產(chǎn)生，起負(fù)調(diào)節(jié)作用［2，4］。

近幾年有文獻(xiàn)報(bào)道，在自身免疫性疾病(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡，銀屑病，變態(tài)反應(yīng)性脊髓炎等)、腫瘤、炎癥等疾病和器官移植排斥等方面的研究發(fā)現(xiàn)，B7－CD28/CTLA－4共刺激途徑都起著重要作用，但卻較少有文獻(xiàn)報(bào)道這種共刺激途徑在RGH的發(fā)病機(jī)制中的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，RGH患者組與對(duì)照組比較，CD80、CD86的陽性表達(dá)較對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示HSV的感染及相關(guān)治療誘導(dǎo)活化淋巴細(xì)胞，刺激活化了淋巴細(xì)胞表面CD80和CD86，使CD80、CD86的陽性表達(dá)增加。研究中對(duì)照組CD8+/CD28陽性表達(dá)顯著高于患者組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。表明CD80、CD86與CD28結(jié)合增多，有效地刺激T淋巴細(xì)胞活化、增殖和分泌效應(yīng)的細(xì)胞因子，抗病毒能力逐漸增強(qiáng)。與國內(nèi)吳健等檢測(cè)30例RGH患者外周血CD8+/CD28陽性表達(dá)顯著高于對(duì)照組的結(jié)果一致［4］。但本研究增加了CD8+/CD152的檢測(cè)，兩個(gè)共刺激分子對(duì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮了重要的作用?；颊呓M的CD4+/CD152、CD8+/CD152的陽性表達(dá)顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。表明負(fù)性刺激分子CD152在患者組陽性表達(dá)比對(duì)照組增多，提示CD152與CD80、CD86有高度親和力，并在體內(nèi)抑制CD80、CD86依賴的免疫反應(yīng)，抑制T淋巴細(xì)胞增殖，提高抗原特異性的凋亡，并抑制Thl和Th2細(xì)胞因子的產(chǎn)生，導(dǎo)致了疾病的復(fù)發(fā)［5，6］。國內(nèi)畢超等檢測(cè)了GH患者CD4+、CD8+的表達(dá)［7］，本研究增加了第二信號(hào)的檢測(cè)，對(duì)RGH的發(fā)病機(jī)制有了更深入的探討。

本文研究提示RGH患者存在明顯細(xì)胞免疫功能失調(diào)及免疫抑制現(xiàn)象。因此，在治療RGH患者時(shí)，除了抗病毒治療外，還應(yīng)增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，特別是細(xì)胞免疫功能，如提高B7－CD28的表達(dá)或封閉B7－CTLA－4的相互作用增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞反應(yīng)，針對(duì)這些環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)深入探索可能為防治RGH提供新思路。

1 范妙玲，劉煉慶，李科倫.復(fù)發(fā)性生殖器皰疹細(xì)胞免疫與治療的相關(guān)性研究［J］.國際醫(yī)學(xué)衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2011，9(17)：1051－1052.

2 Alegre ML，F(xiàn)rauwirth KA，Thompson CB.T－cell regulation by CD28 and CTLA－4［J］.Nat Rev Immunol，2001，1(3)：220－228.

3 Harandi AM，Svennerholmb B，Holmgren I，et al.Interleukin－12(IL－12)and IL－18 are important in innate defense against genital herpes simplex virustype2 interferon－mediated Cunn protective immunity［J］.Jvirol，2007，75(14)：6705－6709.

4 吳健，賈國泉，吳瑞斌.復(fù)發(fā)性生殖器皰疹患者外周血T淋巴細(xì)胞和共刺激分子的檢測(cè)［J］.中國皮膚性病學(xué)雜志，2010，24(12)：1113－1114.

5 李萍，邵路平.復(fù)發(fā)性生殖器皰疹患者血清細(xì)胞因子的表達(dá)及機(jī)體細(xì)胞免疫功能的研究［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2010，(15)：106－107.

6 幸彩梅，李振華，吳意.生殖器皰疹患者HSVⅡ抗原CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞檢測(cè)［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué).2009，9(6)：1032－1033.

7 畢超，曹文苓，黃平.生殖器皰疹初發(fā)患者外周血淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果分析［J］.中國微生態(tài)學(xué)雜志，2008，20(1)：69－70.