龍 宇， 劉 琪

(1.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽421001;2.衡陽市中醫(yī)院藥劑科，湖南衡陽421001)

婦健安合劑是在中醫(yī)臨床驗(yàn)方和現(xiàn)代藥理學(xué)研究基礎(chǔ)上，由白芍、黨參、敗醬草、萹蓄等8味中藥組成，具有健脾疏肝、祛濕止帶的功效.臨床主要用于治療腎虛、濕熱帶下，效果顯著.根據(jù)傳統(tǒng)用藥，為群藥用水共煎.為客觀地評(píng)價(jià)本制劑的提取工藝，我們以提取物浸膏得率以及君藥芍藥的有效成分芍藥苷作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)該方進(jìn)行水提取工藝考察.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Aglient 1100型高效液相色譜儀，Aglient 1100色譜工作站，VWD紫外檢測(cè)器;光學(xué)讀數(shù)分析天平(型號(hào):TG328A);RE52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);乙腈(色譜純，Tiada試劑廠);水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純.

1.2 試藥

芍藥苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):110736-200423).

2 方法與結(jié)果

2.1 芍藥苷含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件

色譜柱:PhenomenexC18-ODS色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-水(18∶82);檢測(cè)波長:230 nm;流速:1.0 mL·min－1;柱溫:30℃;靈敏度:2AUFS.理論塔板數(shù)以芍藥苷計(jì)不低于3 500.照高效液相色譜法(《中國藥典》附錄ⅥD)測(cè)定.

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備

取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定為10.4 mg，置25 mL容量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再吸取1 mL稀釋液至10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得 41.6 μg·L－1的對(duì)照品液.

2.1.3 供試品溶液的制備與測(cè)定

精密量取提取液5 mL，置25 mL容量瓶中，加入甲醇適量超聲處理(200 W，40 kHz)10 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取適量溶液離心5 min，取上清液濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液.

芍藥苷對(duì)照品、缺白芍空白樣品與供試品色譜圖見圖1.供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的位置上有一相同的色譜峰，而陰性對(duì)照液未見干擾.結(jié)果表明該檢測(cè)方法準(zhǔn)確可行.

圖1 HPLC色譜圖Fig.1 RP-HPLC chromatogram of Fu Jian'an Mixture

2.2 浸膏得率的測(cè)定

精密量取提取液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上濃縮至稠膏狀，于105℃干燥至恒重，計(jì)算浸膏得率.

2.3 提取工藝的優(yōu)選

2.3.1 提取溶媒的考察

取白芍、黨參、敗醬草、萹蓄等藥材，按處方比例加水及不同濃度的乙醇浸泡1.0 h，加熱回流提取三次，加溶媒為藥材的10倍量，提取時(shí)間為1.5 h.依次收集各種溶媒下提取液，準(zhǔn)確記錄提取液體積.按“2.1.3”項(xiàng)下制備供試品溶液并進(jìn)行測(cè)定.結(jié)果見表1.芍藥苷浸出量(mg)=提取液中芍藥苷含量(mg·mL－1)×提取液體積(mL).

表1 不同提取溶媒實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Experimental result of different extraction solvent

由表1可知，不同濃度乙醇作為溶媒進(jìn)行提取，芍藥苷浸出量均較水提取時(shí)高.但是作為醫(yī)院制劑生產(chǎn)，水提取成本低且工藝簡單，因此選用水作為提取溶媒.

2.3.2 提取次數(shù)的考察

取白芍、黨參、敗醬草、萹蓄等藥材，按處方比例加水浸泡1.0 h，加熱回流提取三次，加水量分別為藥材的 10倍、8倍、8倍量，提取時(shí)間分別為1.5 h、1.0 h、0.5 h，分別收集各次提取液，準(zhǔn)確量取體積，備用.從上述三份提取液中各取適量，分別按上述方法測(cè)定浸膏得率與芍藥苷的含量.結(jié)果見表2.

表2 水提次數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Experimental result of water extraction times

由表2可知，第三次提取液中，芍藥苷浸出量與浸膏得率均比較低(分別占三次總浸出量的5.90%與11.97%).因此，白芍、黨參、敗醬草、萹蓄等藥材以水提2次為宜.

2.3.3 正交試驗(yàn)優(yōu)選提取工藝條件

1)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì).在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定主要影響因素，即浸泡時(shí)間，加水量，回流時(shí)間，各設(shè)三個(gè)水平，選用L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，因素水平安排見表3.

表3 水提工藝優(yōu)選因素水平表Tab.3 The water extracting technology for optimal factor level table

2)實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理.采用SPASS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，將上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見表4～表6.

表4 水提工藝優(yōu)選正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果Tab.4 Extraction process optimization orthogonal design table and results

表5 浸膏得率方差分析表Tab.5 Extract yield table of variance analysis

表6 芍藥苷浸出量方差分析表Tab.6 Paeoniflorin leaching volume table of variance analysis

由表5可知，各因素對(duì)浸膏得率均無顯著影響.由表6可知，B因素對(duì)芍藥苷浸出量有顯著的影響，A、C兩因素對(duì)芍藥苷浸出量無顯著的影響，根據(jù)制劑大生產(chǎn)的實(shí)際需要，擬定為A1B3C1.由于選擇方案未在正交試驗(yàn)表中，需進(jìn)行工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn).以A1B3C1重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)(n=3)，浸膏得率為14.78 mg.芍藥苷浸出量為 95.49 mg，與正交試驗(yàn)表中浸膏得率和芍藥苷浸出量最高的第9號(hào)方案A3B3C2相差不大，故確定水提工藝的最優(yōu)條件為A1B3C1，即提取時(shí)加水浸泡0.5 h，提取2次，加水量分別為藥材的10倍、8倍，提取時(shí)間分別為1.0 h、0.5 h.

3 討論

1)測(cè)定波長的選擇.取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成對(duì)照品溶液，置紫外分光光度計(jì)記錄其紫外吸收光譜，結(jié)果顯示，芍藥苷在230 nm波長處有最大吸收，故選擇230作為測(cè)定波長，與中國藥典2010年版一部中白芍[1]的檢測(cè)方法一致.

2)筆者根據(jù)文獻(xiàn)[2～4]采用流動(dòng)相乙腈∶水=14∶86，發(fā)現(xiàn)出峰時(shí)間較長，增大乙腈比例，按照本文中流動(dòng)相乙腈∶水=18∶82，出峰時(shí)間短，峰型很好，且基線平穩(wěn)，陰性無干擾.

3)在供試品的制備中，考慮到提取液直接稀釋未能充分溶解，采用超聲處理.并對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行考察，以5 min，10 min，15 min進(jìn)行對(duì)比，超聲 10 min即能提取完全.

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 吳巧鳳，嚴(yán)云良，樓小紅.白芍中芍藥苷的提取工藝研究[J].中成藥，2006，28(9):1379-1380.

[3] 鮑邢杰，宿樹蘭.對(duì)《中國藥典》2010版Ⅰ部中白芍中芍藥苷含量測(cè)定方法的探討[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23(5):1309-1310.

[4] 滕 宇，李正言，李鐵銘，等.HPLC法測(cè)定抗感片中芍藥苷的含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，10(4):140-141.