宋月林，王偉洪，趙滿意，沈 潔，胡炯江

（浙江海洋學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，浙江 舟山 316000）

1 引言

輪蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)豐富不僅含有n3系列多不飽和脂肪酸（n3HUFA），尤其是二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）含量豐富。EPA和DHA在生物發(fā)育過(guò)程中對(duì)維持細(xì)胞正常的生理功能、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、繁殖率與孵化率等有重要作用［1］。此外輪蟲(chóng)一般個(gè)體較小，適宜于經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)品幼苗的口徑，游泳速度慢，容易消化吸收，一直被公認(rèn)是魚蝦蟹等經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)品育苗階段的優(yōu)質(zhì)開(kāi)口餌料。目前經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)品養(yǎng)殖發(fā)展形勢(shì)不斷高漲，輪蟲(chóng)作為該產(chǎn)業(yè)育苗階段理想的開(kāi)口餌料其需求量不斷增大。然而，目前國(guó)內(nèi)輪蟲(chóng)的來(lái)源主要依賴于室外土池培養(yǎng)和水泥池培養(yǎng)。這兩種培養(yǎng)方式存在受自然因素影響較大、產(chǎn)量不穩(wěn)定、周期長(zhǎng)的缺點(diǎn)，所以輪蟲(chóng)高密度快速培養(yǎng)勢(shì)在必行，同時(shí)解決高密度培育輪蟲(chóng)的技術(shù)問(wèn)題迫在眉睫。本文依托于前人的研究結(jié)果加之自己的研究，對(duì)輪蟲(chóng)高密度培養(yǎng)的現(xiàn)狀進(jìn)行有針對(duì)性的綜述，旨在為相關(guān)領(lǐng)域研究提供參考。

2 高密度培養(yǎng)輪蟲(chóng)種類選擇

目前，在海水和半咸水育苗過(guò)程中，廣泛使用的輪蟲(chóng)是褶皺臂尾輪蟲(chóng)（Brachionus plicatilis）和圓形臂尾輪蟲(chóng)（Brachionus rotundi fotmis）；在淡水育苗中，常使用萼花臂尾輪蟲(chóng)（Brachionus calyciflorus）進(jìn)行實(shí)際生產(chǎn)［2］。以下討論主要圍繞這三種展開(kāi)。

2.1 褶皺臂尾輪蟲(chóng)和圓形臂尾輪蟲(chóng)

褶皺臂尾輪蟲(chóng)被甲長(zhǎng)平均240μm，甲均寬170μm，通常稱為“L型”輪蟲(chóng)；圓形臂尾輪蟲(chóng)相對(duì)而言個(gè)體較小，被甲長(zhǎng)平均140μm，甲均寬110μm，稱為“S型”輪蟲(chóng)。前者為冷水、廣鹽性種類，后者相對(duì)屬于高溫種類。兩者均存在孤雌生殖和兩性生殖世代交替的過(guò)程，研究輪蟲(chóng)孤雌生殖的調(diào)控因子對(duì)延長(zhǎng)高密對(duì)培養(yǎng)輪蟲(chóng)是對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期有著重大意義［3］。

2.2 萼花臂尾輪蟲(chóng)

萼花臂尾輪蟲(chóng)是常見(jiàn)的普通大型輪蟲(chóng)種類之一，被甲長(zhǎng)平均400μm，被甲寬平均190μm，分布較為廣泛，可分布在淡水和河口的半咸水環(huán)境中，但抵抗酸性環(huán)境能力較弱，是我國(guó)淡水湖泊池塘的習(xí)見(jiàn)輪蟲(chóng)種類，繁殖力強(qiáng)，時(shí)代周期短，條件適宜易成為養(yǎng)殖池塘的優(yōu)勢(shì)種群。此外，萼花臂尾輪蟲(chóng)活動(dòng)速度緩慢，適宜于水產(chǎn)品動(dòng)物攝食。

3 高密度培養(yǎng)餌料種類選擇與培養(yǎng)方式

輪蟲(chóng)屬于濾食性生物，食性較雜，可攝食光合細(xì)菌、酵母菌、單細(xì)胞微藻、有機(jī)碎屑乃至微顆粒飼料等。自然條件下，只要直徑大小適宜于輪蟲(chóng)口徑的可食物質(zhì)都可作為輪蟲(chóng)的餌料。但是人工培養(yǎng)出的輪蟲(chóng)作為幼苗的開(kāi)口餌料，對(duì)其營(yíng)養(yǎng)成分的含量及輪蟲(chóng)的產(chǎn)量有較高的要求。綜合考慮，目前作為輪蟲(chóng)高密度培養(yǎng)的餌料主要有單細(xì)胞微藻類、酵母類、混合類三大類。

3.1 微藻類

單細(xì)胞微藻直徑大小適宜于輪蟲(chóng)的口徑，加之微藻自身所含蛋白質(zhì)、n3HUFA等高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的成分比例大，用單細(xì)胞微藻培養(yǎng)輪蟲(chóng)一直被認(rèn)為是比較經(jīng)典的方式，被餌料生產(chǎn)界和育苗機(jī)構(gòu)廣泛認(rèn)可［1］，常見(jiàn)于一次性輪蟲(chóng)培養(yǎng)方式中或者池塘前期的肥水階段。首先把微藻接種到藻類營(yíng)養(yǎng)液中，微藻種類以富含n3HUFA優(yōu)先，如新月菱形藻、三角褐指藻、球等邊金藻、微綠球藻、小球藻等，結(jié)合對(duì)環(huán)境適應(yīng)能力，以小球藻為最佳。當(dāng)微藻培養(yǎng)到適宜高濃度后，根據(jù)條件接種上文中的優(yōu)質(zhì)輪蟲(chóng)種。用小球藻等微藻培養(yǎng)的輪蟲(chóng)n3HUFA含量豐富已被公認(rèn)，足以滿足魚蝦幼苗早期對(duì)不飽和脂肪酸的需求。

但是在高密度培育輪蟲(chóng)之前，需要培養(yǎng)大量的單細(xì)胞藻類。日本某海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)魚類育苗場(chǎng)，各種水池的總?cè)萘勘葹橛绯亍幂喯x(chóng)培養(yǎng)池∶小球藻培養(yǎng)池大概是1∶0.5～1.8∶1.5～2.1，可見(jiàn)普通方式用小球藻為餌料培養(yǎng)高密度的輪蟲(chóng)需要花費(fèi)大量的設(shè)備和人力。其次，一般直接單純用微藻高密度培養(yǎng)輪蟲(chóng)時(shí)，微藻與輪蟲(chóng)種間競(jìng)爭(zhēng)激烈，例如兩者對(duì)于溶氧消耗關(guān)系和對(duì)輪蟲(chóng)繁殖的影響［4］，常常導(dǎo)致輪蟲(chóng)培養(yǎng)密度不高，實(shí)際生產(chǎn)中一般只能達(dá)到40～60個(gè)／mL。目前，一般選用濃縮小球藻和充純氧氣方式進(jìn)行輪蟲(chóng)的高密度培養(yǎng)，有時(shí)也會(huì)添加一些輔助因子如維生素C等。

3.2 酵母類

自從1927年在日本用面包酵母代替海水小球藻培養(yǎng)輪蟲(chóng)成功后，生產(chǎn)中用酵母菌培養(yǎng)輪蟲(chóng)逐漸增多，且酵母培養(yǎng)輪蟲(chóng)的密度可以很容易達(dá)到400～600個(gè)／mL，甚至可以高達(dá)至幾千個(gè)以上每毫升，相比微藻優(yōu)勢(shì)十分顯著。除此之外，酵母相比微藻還有供應(yīng)穩(wěn)定、儲(chǔ)藏方便、投喂便捷等優(yōu)點(diǎn)，因此節(jié)約了培養(yǎng)微藻所需的大量設(shè)備和人力。但是，用酵母培養(yǎng)輪蟲(chóng)也存在缺點(diǎn)，特別是在用酵母培養(yǎng)的輪蟲(chóng)育真鯛石鯛等魚苗時(shí)，表現(xiàn)得十分突出:仔魚剛開(kāi)始表現(xiàn)攝食少，活動(dòng)減弱，后來(lái)漸漸地死亡。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)仔魚所含n3HUFA匱乏尤其是EDA和DHA，嚴(yán)重影響了組織、神經(jīng)等的發(fā)育。最根本原因是酵母營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)中n3HUFA含量低，導(dǎo)致培養(yǎng)出的輪蟲(chóng)缺乏n3HUFA，從而不能滿足仔魚的營(yíng)養(yǎng)需要［5］。

3.3 酵母與微藻混合類型以及營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化

結(jié)合上文兩種餌料的優(yōu)缺點(diǎn)，目前實(shí)際高密度培養(yǎng)輪蟲(chóng)時(shí)，通常將微藻與酵母根據(jù)培養(yǎng)條件合理搭配，以期達(dá)到優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的效果。但是，從單純用小球藻培養(yǎng)的輪蟲(chóng)與小球藻與酵母混合培養(yǎng)的輪蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)對(duì)比中發(fā)現(xiàn)，后者在不飽和脂肪酸和氨基酸等的組成和含量上明顯偏低。所以，目前無(wú)論用酵母培養(yǎng)輪蟲(chóng)還是用混合類型培養(yǎng)，一般在輪蟲(chóng)使用之前都要經(jīng)過(guò)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的過(guò)程。通常營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的方法有兩類:一是用單細(xì)胞微藻進(jìn)行二次培養(yǎng)，方法與微藻類培養(yǎng)輪蟲(chóng)相仿；另一類是使用營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑。營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑的種類和形式比較多，最早是用魚油和蛋黃與海水混合攪拌得到乳化油，其HUFA含量大約占總脂肪含量的25%，若繼續(xù)進(jìn)行化學(xué)純化得到濃縮油脂的乳化油，HUFA含量能提升到80%左右［6］。

4 高密度培養(yǎng)輪蟲(chóng)水環(huán)境

4.1 溶氧與通氣

輪蟲(chóng)對(duì)水壞境中溶氧濃度的適應(yīng)范圍較廣。用小球藻培養(yǎng)L型輪蟲(chóng)時(shí)，溶氧在5～7mg／L時(shí)仍能正常繁殖；用油脂酵母培養(yǎng)時(shí)，溶氧在2mg／L時(shí)仍能正常生長(zhǎng)。L型輪蟲(chóng)對(duì)低氧甚至缺氧的耐受力很強(qiáng)，在以氮換氧的海水中，大約6h仍有半數(shù)以上存活，再經(jīng)6h才基本全部死亡。但是用濃縮小球藻為餌料高密度培養(yǎng)輪蟲(chóng)時(shí)，一方面由于輪蟲(chóng)培育密度較高，單位體積的輪蟲(chóng)耗氧較多；另一方面，隨著小球藻、細(xì)菌等增加，單位體積的耗氧進(jìn)一步攀升，導(dǎo)致輪蟲(chóng)培養(yǎng)密度不高?？傊?，溶氧成為用濃縮微藻類培養(yǎng)輪蟲(chóng)高密度的限制因子。此外，對(duì)于充氣方式，以往常用陶瓷做的氣石經(jīng)導(dǎo)管連接氣泵充氣，當(dāng)通氣率增大到一定程度后，容易產(chǎn)生較強(qiáng)的機(jī)械擾動(dòng)力和小而密的氣泡泡沫，嚴(yán)重影響輪蟲(chóng)的正?；顒?dòng)，最終輪蟲(chóng)密度不增反減，最高密度難以超越5000 個(gè)／mL［7］。目前，對(duì)于溶氧的解決，一般是通入純氧氣的方法，這樣可使輪蟲(chóng)密度提高近4倍氧。

4.2 溫度

不同輪蟲(chóng)的種類和品系對(duì)溫度的適應(yīng)范圍差別較大。L型輪蟲(chóng)等大型種在25℃時(shí)繁殖速度最快，26～27℃以上時(shí)繁殖速度減慢甚至停滯，10℃時(shí)還能大量繁殖，培養(yǎng)的適宜溫度范圍一般為15～25℃。S型輪蟲(chóng)等小型種的繁殖速度隨著溫度的升高而加快，30～34℃時(shí)最快，水溫降到15℃以下時(shí)幾乎不繁殖，培養(yǎng)的適宜溫度范圍一般為25～35℃。此外研究表明L型和S型兩種輪蟲(chóng)混合培養(yǎng)時(shí)，水溫在20℃以下時(shí)L型輪蟲(chóng)種占優(yōu)勢(shì)，20℃以上時(shí)S型輪蟲(chóng)種占優(yōu)勢(shì)［3］。在不同溫度下培養(yǎng)萼花臂尾輪蟲(chóng)研究表明，溫度在20～30℃范圍中，隨溫度升高，輪蟲(chóng)的內(nèi)稟增長(zhǎng)率升高，凈生殖率增大，世代周期縮短。通常認(rèn)為萼花臂尾輪蟲(chóng)的適宜培養(yǎng)溫度范圍為28～32℃［1］。

4.3 鹽度與pH值

L型輪蟲(chóng)和S型輪蟲(chóng)均為廣鹽性生物，其最適鹽度范圍隨品系不同而有所差異，但是對(duì)鹽度的突然變化的耐力較低。綜合有關(guān)資料，其生存的鹽幅為1～98g／L，最適鹽度為10～20g／L；生存的pH值為5～10，以7.5～8.5最佳［4］。萼花臂尾輪蟲(chóng)是重要的淡水種，其在pH值為在5.5～10.5時(shí)均能正常生長(zhǎng)，pH值為7.5時(shí)種群生長(zhǎng)最好，pH值為3.5和pH值為11.5分別是該輪蟲(chóng)存活的下限和上限。

［1］成永旭.生物餌料培養(yǎng)學(xué)［M］.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005:115～150.

［2］劉 青.日本高密度培養(yǎng)輪蟲(chóng)現(xiàn)狀與展望［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007（8）:299～305.

［3］賀詩(shī)水.輪蟲(chóng)培養(yǎng)技術(shù)研究進(jìn)展［J］.江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009（6）:120～121.

［4］劉青華，徐恩平，侯麗麗，等.適用于海水魚類育苗的高密度培養(yǎng)輪蟲(chóng)技術(shù)［J］.漁業(yè)現(xiàn)代化，2004（5）:29～31.

［5］王鴻鵠，吳灶和，廖永巖.用酵母高密度培養(yǎng)褶皺臂尾輪蟲(chóng)［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2009（4）:225～228.

［6］陸建學(xué)，夏連軍，周 凱.輪蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代漁業(yè)信息，2007（2）:28～29.

［7］張秋明.褶皺臂尾輪蟲(chóng)高密度培養(yǎng)與應(yīng)用技術(shù)［J］.中國(guó)水產(chǎn)，2006（6）:58～60.