李 敏，黃旭東，馬 強(qiáng)，郭亞慧

（內(nèi)蒙古大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010021）

1 干細(xì)胞生物學(xué)

干細(xì)胞（stem cell）是機(jī)體內(nèi)存在的一類特殊細(xì)胞，具有自我更新及多向分化潛能［1］。干細(xì)胞根據(jù)發(fā)生來源可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞兩類。胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cell，ES細(xì)胞）是由胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或原始生殖細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)而篩選出的細(xì)胞，具有發(fā)育全能性，理論上可以誘導(dǎo)分化為機(jī)體中200多種細(xì)胞。成體干細(xì)胞是存在于已經(jīng)分化組織中的未分化細(xì)胞，能夠自我更新并特化形成該類型組織的多能細(xì)胞［2］。

1.1 胚胎干細(xì)胞

胚胎干細(xì)胞是從動物早期發(fā)育的原始未分化細(xì)胞團(tuán)（Inner Cell Mass，ICM）或原始生殖細(xì)胞（Primordial Germ Cell，PGC）分離得到的一種未分化的永久性細(xì)胞系［3］。ES細(xì)胞具有具有以下特性：①ES細(xì)胞具有自我更新的能力：可以通過自我更新來維持其干性；②ES細(xì)胞具有發(fā)育的全能性：任何一個(gè)ES細(xì)胞都具有發(fā)育成一個(gè)完整個(gè)體的潛能。在體外，ES細(xì)胞可誘導(dǎo)分化出包括三個(gè)胚層在內(nèi)的所有分化細(xì)胞，若將ES細(xì)胞注射到嚴(yán)重聯(lián)合性免疫缺陷（SCID）小鼠或同源動物體內(nèi)，可產(chǎn)生出三個(gè)胚層組織構(gòu)成的畸胎瘤；③ES細(xì)胞具有生殖系嵌入特性，具有種系傳遞功能，能與另一個(gè)正常胚胎嵌合，獲得包括生殖系在內(nèi)的動物個(gè)體。而且在體外對ES細(xì)胞進(jìn)行遺傳操作選擇，通常不會改變選擇后的ES細(xì)胞本身的遺傳性能。即理論上經(jīng)遺傳操作后的ES細(xì)胞仍能保持其擴(kuò)增、發(fā)育的全能性。全能性是ES細(xì)胞具有可塑性的基礎(chǔ)，也是ES細(xì)胞優(yōu)于成體干細(xì)胞的地方［4］。

此外，細(xì)胞還可以通過細(xì)胞重編程（cell programming）而獲得。目前認(rèn)為實(shí)現(xiàn)體細(xì)胞重編程的方法：體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移技術(shù)（somatic cell nuclear transfer，SCNT）；細(xì)胞融合技術(shù)（cell fusion）；誘導(dǎo)多能干細(xì)胞技術(shù)（induced pluripotent stem cell，iPS細(xì)胞）。

1.2 成體干細(xì)胞

成體干細(xì)胞（Adult Stem Cell）是指存在于成體已分化組織中的未分化細(xì)胞，這種細(xì)胞具有自我更新和多向分化的潛能，在特定的培養(yǎng)條件下可以形成組成該類型組織的多能干細(xì)胞的統(tǒng)稱。成體干細(xì)胞的來源不僅包括成年的動物，還包括未成年動物組織干細(xì)胞。成體干細(xì)胞具有以下特性：①成體干細(xì)胞具有自我更新的能力：可以通過自我更新來維持其干性；②成體干細(xì)胞具有多向分化的潛能：成體干細(xì)胞不具有ES細(xì)胞的全能性，但是具有多能性，即成體干細(xì)胞在自然條件下傾向于分化成所在組織的各種細(xì)胞，用于維持機(jī)體新陳代謝。但是，在特定外界條件誘導(dǎo)下，一種組織的成體干細(xì)胞可以“橫向分化”成其他組織的功能細(xì)胞，參與組織的損傷修復(fù)。

目前為止發(fā)現(xiàn)的成體干細(xì)胞主要包括造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、肝臟干細(xì)胞、肌肉衛(wèi)星細(xì)胞、皮膚表皮干細(xì)胞、腸上皮干細(xì)胞、視網(wǎng)膜干細(xì)胞、頭發(fā)毛囊干細(xì)胞、胰腺干細(xì)胞等。

2 干細(xì)胞應(yīng)用前景

干細(xì)胞的研究是從血液系統(tǒng)開始的。1990年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎得主Gunnar Thomas等人在1967年將正常人的骨髓移植到病人體內(nèi)，可以治療造血功能障礙，從而開始了干細(xì)胞應(yīng)用于血液系統(tǒng)疾病的臨床治療。2007年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎得主Martin Evans等在1981年從小鼠囊胚中分離出胚胎干細(xì)胞。20世紀(jì)70年代末，中國科學(xué)院上海細(xì)胞所開始小鼠胚胎細(xì)胞及其誘導(dǎo)分化的研究，并于1987年建立了我國第一株小鼠ES細(xì)胞系［5］，并用生長因子的基因操作成功地誘導(dǎo)ES細(xì)胞分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞［6］。1998年，美國的Thomson和Shamblott兩個(gè)研究小組又成功地使人類ES細(xì)胞在體外生長和增殖［7］，使科學(xué)家們看到了干細(xì)胞生物工程的曙光：用體外培育的組織細(xì)胞取代病人體內(nèi)壞損的組織細(xì)胞。1999年，美國科學(xué)家Goodell發(fā)現(xiàn)小鼠肌肉組織干細(xì)胞可以橫向分化成血細(xì)胞。隨后，世界各國相繼證實(shí)成體干細(xì)胞，包括人類的干細(xì)胞具有可塑性，這為干細(xì)胞的臨床應(yīng)用開辟了更為廣闊的空間。此外，2007年美日兩個(gè)研究小組幾乎同時(shí)宣布成功地將人體皮膚細(xì)胞改造成了幾乎可以和胚胎干細(xì)胞相媲美的干細(xì)胞——“iPS細(xì)胞”，即誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells，iPS細(xì)胞）。iPS細(xì)胞的誕生為國際干細(xì)胞研究帶來了新的研究思路和方向，其應(yīng)用前景更加的廣闊。

由于ES細(xì)胞具有自我更新和全能性，即ES細(xì)胞能制造機(jī)體需要的全部細(xì)胞的同時(shí)還維持著其自身的干性，使得ES細(xì)胞在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)上具有巨大潛力以及應(yīng)用前景。但是，由于ES細(xì)胞移植后可能會帶來免疫排斥反應(yīng)，且培養(yǎng)獲得需破壞胚胎，其應(yīng)用就受到倫理學(xué)限制。

成體干細(xì)胞，由于其存在于宿主體內(nèi)，可從患者自身獲得。此外，有些細(xì)胞，如MSC具有低免疫原性，故移植后不存在免疫排斥反應(yīng)的限制也沒有倫理學(xué)方面的困擾。使得科學(xué)家們逐漸將研究目標(biāo)轉(zhuǎn)向成體干細(xì)胞，將這種類型的干細(xì)胞作為組織工程的終點(diǎn)研究對象。但是，成體干細(xì)胞只能在體外有限擴(kuò)增，多系分化效力低，通過體外的擴(kuò)增培養(yǎng)雖能夠提高轉(zhuǎn)化效率。然而體外轉(zhuǎn)化是否會引起干細(xì)胞遺傳特性的改變尚不清楚。因此，胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞的研究對生命科學(xué)領(lǐng)域而言，都具有極重要的意義，其研究成果將能互為裨益、相得益彰［8］。

2.1 ES細(xì)胞的應(yīng)用

2.1.1 用于生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物和克隆動物

利用ES細(xì)胞作為載體，體外定向改造ES細(xì)胞，使基因的整合數(shù)目、位點(diǎn)、表達(dá)程度和插入基因的穩(wěn)定性及篩選工作等都在細(xì)胞水平進(jìn)行，從而獲得穩(wěn)定、滿意的轉(zhuǎn)基因ES細(xì)胞系，以生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物。

用ES細(xì)胞為細(xì)胞核的供體進(jìn)行核移植后，在短期內(nèi)可獲得大量基因型和表型完全相同的個(gè)體。此法明顯優(yōu)于體細(xì)胞克隆動物，但后者克隆動物的成功率較低，易出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫功能缺陷和突變（法國農(nóng)業(yè)研究院稱90% 克隆牛不能正常生長）。老鼠的胚胎干細(xì)胞中能產(chǎn)生出精、卵細(xì)胞，并能成功受精甚至可以從雌性和雄性細(xì)胞中培育出實(shí)驗(yàn)室卵細(xì)胞，將促進(jìn)生殖和克隆的研究。

2.1.2 用于發(fā)育生物學(xué)研究

哺乳動物早期胚胎的體積很小，又在子宮內(nèi)發(fā)育，要想在體內(nèi)研究細(xì)胞分化及其機(jī)理幾乎是不可能的，而干細(xì)胞特別是ES細(xì)胞具有獨(dú)特的發(fā)育全能性，在特定的體外培養(yǎng)條件和誘導(dǎo)劑的共同作用下經(jīng)過若干前體細(xì)胞階段，可分化為神經(jīng)、肌肉、軟骨、血細(xì)胞、上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等，因此ES細(xì)胞是研究特定類型細(xì)胞分化的模型、探索某些前體細(xì)胞起源和細(xì)胞譜系演變的較為理想的實(shí)驗(yàn)體系。應(yīng)用基因芯片等生物技術(shù)，比較ES細(xì)胞不同發(fā)育階段細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，不僅可確定胚胎發(fā)育及細(xì)胞分化的分子機(jī)制，還可發(fā)現(xiàn)新的基因。借助基因打靶技術(shù)，通過囊胚注射制作嵌合體的途徑，將外源基因引入受體基因庫，可在整體水平上研究高等動物的基因表達(dá)、調(diào)控和生理功能，同時(shí)也會為闡明胚胎發(fā)育中基因表達(dá)的時(shí)空關(guān)系提供手段。

2.1.3 用于新型藥物研究和組織器官的修復(fù)、治療研究

ES細(xì)胞提供了新藥的藥理、毒理及藥物代謝等細(xì)胞水平的研究手段，既減少了藥物實(shí)驗(yàn)所需的動物數(shù)量，又便于找到有效和持久的治療方法。無論采取自體或異體移植來修復(fù)缺損組織和器官，都受到客觀條件的限制，特別是種子細(xì)胞的來源不足。現(xiàn)在，干細(xì)胞工程學(xué)的誕生和發(fā)展，使組織和器官的移植研究進(jìn)入了新的階段，有望解決上述問題。據(jù)報(bào)道，小鼠ES細(xì)胞在特殊條件下分化為骨母細(xì)胞，結(jié)合組織工程技術(shù)，形成有可能被用于骨修復(fù)的骨組織［9］由于尚有一些復(fù)雜的問題有待解決，因此目前著重于從成年或幼年器官或組織的碎片中分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增某一類型的組織干細(xì)胞［10］。ES細(xì)胞作為移植源細(xì)胞和基因治療源細(xì)胞，通過定向分化取代受損的細(xì)胞，其免疫排斥反應(yīng)不大?，F(xiàn)已證明，源于ES細(xì)胞的細(xì)胞已能或可能治療許多相關(guān)疾病，如心肌細(xì)胞治療心臟疾病，白細(xì)胞治療白血病，胰島細(xì)胞治療糖尿病，肝細(xì)胞治療肝炎，軟骨細(xì)胞治療骨關(guān)節(jié)炎，皮膚細(xì)胞治療燒傷和創(chuàng)傷，骨細(xì)胞治療骨質(zhì)疏松癥，神經(jīng)細(xì)胞治療帕金森氏癥等。

2.2 成體干細(xì)胞的應(yīng)用

2.2.1 HSC的應(yīng)用

HSC是體內(nèi)各種血細(xì)胞的唯一來源，成體內(nèi)的HSC主要存在于骨髓中，外周血中也有［11］。目前，HSC已廣泛用于白血病的治療，有數(shù)據(jù)顯示國際上應(yīng)用HSC移植聯(lián)合化療治療急性淋巴細(xì)胞白血病的5年無病生存率約為80%，個(gè)別治療中心可達(dá)90%，而急性非淋巴白血病也可達(dá)40%左右［12］。此外，對放、化療敏感的晚期癌癥患者或常規(guī)治療無效、復(fù)發(fā)或高度惡性的癌癥患者，可先用超大劑量的放、化療最大限度的清除患者體內(nèi)的癌細(xì)胞，然后移植HSC重建被破壞的造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)［11］，這種聯(lián)合治療已經(jīng)成功應(yīng)用于乳腺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等惡性疾病的治療［13］。HSC還應(yīng)用于慢性肝炎等一系列疾病的治療中。

應(yīng)用HSC對許多疾病的治療應(yīng)經(jīng)進(jìn)入了臨床試驗(yàn)階段，在我們最近發(fā)表的一篇文章中［14］，用計(jì)算機(jī)檢索了截止到2011年1月31日，中國臨床試驗(yàn)注冊中心數(shù)據(jù)庫及美國clinicaltrials數(shù)據(jù)庫中注冊的干細(xì)胞用于乳腺癌治療的臨床試驗(yàn)研究。在中國臨床試驗(yàn)注冊中心數(shù)據(jù)庫中輸入檢索詞為“乳腺癌”，共檢索到23例，其中符合標(biāo)準(zhǔn)的僅有1例。在美國clinicaltrials數(shù)據(jù)庫中輸入檢索詞為“stem cell＋therapy＋cancer”，共檢索到2551例，其中用干細(xì)胞治療乳腺癌的臨床試驗(yàn)共134例，包括I期臨床試驗(yàn)的73例，II期52例，III期9例。134例臨床試驗(yàn)中使用的干細(xì)胞均為HSC，未見其它類型的干細(xì)胞，所用HSC的來源包括骨髓、外周血和臍血。

2.2.2 MSC的應(yīng)用

MSC是一類來源于中胚層的、具有自我更新及多向分化潛能的干細(xì)胞，在體外能夠分化為多種細(xì)胞，如骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞等［6］。與HSC的研究相比，MSC的研究起步較晚，但發(fā)展很快。研究發(fā)現(xiàn)MSC可以定向歸巢到病變組織并在病變組織中存活和增殖。在體外對MSC進(jìn)行基因修飾后注入體內(nèi)，能夠歸巢到病變組織而殺死病變組織的細(xì)胞，這一特點(diǎn)使MSC成為了細(xì)胞治療的極好的載體［15，16］。

除此，MSC對難治性移植物抗宿主?。℅raft Versus Host Disease，GVHD）具有很大應(yīng)用價(jià)值，MSC具有免疫調(diào)節(jié)作用，能抑制GVHD［17］；MSC可用于自身免疫疾病的治療，MSC分化的軟骨細(xì)胞具有與MSC共同的特性，MSC可以通過表達(dá)成骨及血管生成因子協(xié)同促進(jìn)修復(fù)骨缺損［18］；MSC還可以減輕炎癥反應(yīng)，將轉(zhuǎn)染睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子基因的MSC用于過敏性腦脊髓炎模型鼠后，外周血腫瘤壞死因子－a表達(dá)水平明顯降低，損傷部位炎性細(xì)胞浸潤減少，顯示出良好的治療效果［19］。由于骨髓源性的MSC能夠阻止肝纖維化進(jìn)展，使得MSC可以應(yīng)用于治療肝硬化［20］。MSC可以使新血管生成增加、心肌再生，因此異體人MSC可以應(yīng)用于急性心肌梗死等心腦血管疾?。?1］。MSC移植可使神經(jīng)細(xì)胞再生和神經(jīng)結(jié)構(gòu)重建，恢復(fù)損傷的神經(jīng)功能，使其成為治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病理想的種子細(xì)胞?；熀蟛∪斯撬鐼SC增殖能力、粘附性及分泌白介素及干細(xì)胞生長因子的能力均下降，因此MSC對于輔助化療的病人具有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值［22］。除以上應(yīng)用外，MSC在支持造血干細(xì)胞體外擴(kuò)增及治療面部皺紋等方面亦取得一定效果［23］，MSC治療糖尿病、腎病［24］等疾病的研究正在進(jìn)行中。還可治療克羅恩病、成骨不全、軟骨損傷、脊髓損傷［25］等疾病。

2.2.3 其他干細(xì)胞的應(yīng)用

神經(jīng)干細(xì)胞及精原干細(xì)胞由于其發(fā)生部位限制了其廣泛應(yīng)用，但其用于治療特定部位引起的組織特異性疾病功效十分顯著，神經(jīng)干細(xì)胞也用于治療腦梗塞、帕金森等神經(jīng)系統(tǒng)及腦組織病變引發(fā)的疾病。精原干細(xì)胞主要用于男性不育方面。

iPS細(xì)胞是通過導(dǎo)入幾個(gè)與多潛能性相關(guān)的因子至體細(xì)胞中而獲得的多能干細(xì)胞，它具有與胚胎干細(xì)胞相似的特點(diǎn)，可以分化為HSC，也可以作為基因運(yùn)載細(xì)胞，同時(shí)由于可以培養(yǎng)來自于患者自體細(xì)胞的iPS細(xì)胞，使用時(shí)不存在免疫排斥問題［26～28］。當(dāng)前，研究者已經(jīng)獲得了無病毒基因組成分的iPS細(xì)胞，去除了可能因病毒隨機(jī)插入而導(dǎo)致的安全隱患［29，30］。因此，盡管目前還沒有iPS細(xì)胞用于疾病治療的研究，推測iPS細(xì)胞也有望應(yīng)用于臨床治療相關(guān)疾病，并且其可能具有與胚胎干細(xì)胞一致的相關(guān)功能，因此有望得到廣泛應(yīng)用。

3 結(jié)語

由于干細(xì)胞具有如此之多的優(yōu)勢，其發(fā)展前景十分廣闊，在臨床應(yīng)用上也具有不可估量的潛力，因此全面的對干細(xì)胞進(jìn)行系統(tǒng)的研究很有必要。目前仍存在一些問題急需解決，如人胚胎干細(xì)胞和胚胎生殖細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)增生而不分化的機(jī)制是什么？抑制干細(xì)胞分化的內(nèi)源性機(jī)制是什么？成人干細(xì)胞在體內(nèi)有無可塑性，可塑性是否所有成人干細(xì)胞都發(fā)生，調(diào)控因素是什么？驅(qū)使干細(xì)胞到損傷部位修復(fù)損傷的因素是什么？干細(xì)胞分化成特定細(xì)胞和組織作為器官移植的依據(jù)和機(jī)制是什么？干細(xì)胞分化的哪個(gè)時(shí)期最適合移植需要，最適合藥物或毒物的篩選，具有最強(qiáng)的攜帶治療藥物的能力，移植后在體內(nèi)的成瘤性等。弄清這些問題的答案是進(jìn)行臨床應(yīng)用的基礎(chǔ)。

［1］Weisman I L，Anderson D J，Gage F.Stem and progenitor cells：origins，phenotypes，lineage commitments，and transdifferentiations［J］.Annu Rev Cell Dev Biol，2001（17）：387～403.

［2］趙春華.干細(xì)胞原理、技術(shù)與臨床 ［M］.北京：化學(xué)化工出版社，2006.

［3］Evans M J，Kaufman M H.Fstablishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos［J］.Nature，1998，292（9）：154～156.

［4］江中良，李 青，王立強(qiáng).哺乳動物胚胎干細(xì)胞的特性及利用［J］.西南民族學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2002，28（1）：65～69.

［5］叢笑倩.小鼠胚胎干細(xì)胞（ES－8501細(xì)胞）建系過程的核型及特性分析［J］.實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào)，1987（20）：237～251.

［6］叢笑倩.外源TGF基因在小鼠ES細(xì)胞中的表達(dá)及其對細(xì)胞分化的影響［J］.實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào)，1995（28）：173～183.

［7］Thomson J A，Itskovitz Eldor J，Shapiro S，et al.Embryonic stem cell line derived from human blastocysts［J］.Science，1998（282）：1145～1147.

［8］楊黃恬.干細(xì)胞：科技領(lǐng)域的熱點(diǎn) ［J］.科學(xué)，2002（5493）：12～14.

［9］Buttery L D K，Bourne S，Xynos J D，et al.Differentiation of osteoblasts and in vitro bone formation from murine embryonic stem cells［J］.Tissue Engineering，2001（7）：89～99.

［10］Fuchs E，Segre J A.Stem cells：a new lease on life［J］.Cell，2000（100）：143～155.

［11］常 灝.HSC的研究進(jìn)展 ［J］.生物學(xué)通報(bào)，2006，41（2）：56～59.

［12］黃小軍.難治／復(fù)發(fā)白血病的造血干細(xì)胞移植 ［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2006（8）：240～242.

［13］Brenner M K.Haematopoietie stem cell transplantation for autoimmune disease：limits and future potential［J］.Best Pract Res Clinl Paematol，2004，17（2）：359～374.

［14］郭亞慧，申小濤，王文朋.干細(xì)胞用于乳腺癌治療的研究進(jìn)展［J］.生物技術(shù)通報(bào)，2011（12）：43～50.

［15］Studeny M，Marini F C，Dembinski J L，et al.Mesenchymal stem cells：potential precursors for tumor stromal and targeted delivery vehicles for anticancer agents［J］.J Nat Cancer Inst，2004，96（21）：1593～1603.

［16］裴雪濤.干細(xì)胞生物學(xué)［M］.北京：科學(xué)出版社，2004.

［17］Macmillan M L，Blazar B R，DeFor T E，et al.Transplantation of exvivo culture－expanded parental haploidentical mesenchymal stem cells to promote engraftment in pediatric recipients of unrelated donor umbilical cord blood：results of a phase I－II clinical trial［J］.Bone Marrow Transplant，2009，43（6）：447～454.

［18］Zheng ZH，LiXY，Ding J.Allogeneic mesenchymal stem cell and mesenchymal stem cell－differentiated chondrocyte suppress the responses of type II collagen－reactive T cells in rheumatoidarthritis［J］.Rheumatology，2008（47）：22～30.

［19］Lu Z Q，Hu X Q，ZhuC S，et al.Bone marrow stromal cells transfected with ciliary neurotrophic factor gene ameliorates the symptoms and inflammation in C57BL／6mice with experimental allergic encephalomyelitis［J］.Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao，2009，29（12）：2355～2361.

［20］Mehdi M，Kamran A，Mandana M B，et al.PhaseⅠtrial of autologous bone marrow mesenchymal stem cell transplantation in patients with decompensated liver cirrhosis［J］.Arch Iranian Med，2007，10（4）：459～466.

［21］Hare J M，Traverse J H，Henry T D，et al.A randomized，double blind，placebo controlled，dose escalation study of in travenous adult human mesenchymal stem cells（prochymal）after acute myocardial in farction ［J］.J Am Coll Cardiol，2009，54（24）：2277～2286.

［22］Cao J，Tan M H，Yang P，et al.Effects of adjuvant chemotherapy on bone marrow mesenchymal stem cells of colorectal cancer patients［J］.Cancer Letters，2008（263）：197～203.

［23］Claudio da Silva C，Baptista LS，Carias RB，et al.Autologous mesenchymal stem cells culture from adipose tissue for treatment of facialrhytids［J］.Rev Col Bras Cir，2009，36（4）：288～291.

［24］Zhou H，Gao Y，Tian H M.Bone marrow mesenchymal stem cell therapy on diabetic nephropathy in rats ［J］.Si chuan Da Xue Xue Bao：Yi Xue Ban，2009，40（6）：1024～1028.

［25］Pal R，Venkataramana N K，Bansal A，et al.Exvivo expanded autologous bone marrow derived mesenchymal stromal cells in human spinal cord in jury／parap leg in a pilot clinical study［J］.Cytotherapy，2009，11（7）：897～911.

［26］Yu J，Vodyanik M A，Smuga Otto K，et al.Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells［J］.Science，2007，318（5858）：1917～1920.

［27］Takahashi K，Tanabe K，Ohnuki M，et al.Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors［J］.Cell，2007，131（5）：861～872.

［28］Hanna J，Wernig M，Markoulaki S，et al.Treatment of sickle cell anemia mouse model with iPS cells generated from autologous skin［J］.Science，2007，318（5858）：1920～1923.

［29］Stadtfeld M，Nagaya M，Utikal J，et a1.Induced pluripotent stem cells generated without viral integration ［J］.Science，2008，322（5903）：945～949.

［30］Okita K，Nakagawa M，Hyenjong H，et a1.Generation of mouse induced pluripotent stem cells without viral vectors［J］.Science，2008，322（5903）：949～953.