劉 樅，韓榮春，徐保利，李先寬，王 冰

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600)

短梗五加［Acanthopanax sessilifloms(Rupr.et Maxim.)Seem.］，又名無梗五加，為五加科(Araliaceae)五加屬多年生落葉灌木，其嫩莖俗稱“刺柺棒”，是遼東和吉東山區(qū)人傳統(tǒng)食用數(shù)百年的野蔬珍品。《本草綱目》中對五加載述:“五加無毒，久服延年益老，功難盡述”。［1］本草記載:短梗五加的根皮具有祛風(fēng)濕、補肝腎、強筋骨、活血脈等功效。用于治療風(fēng)寒濕痹、腰膝疼痛、筋骨痿軟、小兒行遲、體虛贏弱等病癥［2］。

民間多把短梗五加干燥根和根莖或莖當作刺五加正品混用，刺五加及短梗五加中含有大量的苷類物質(zhì)，其中刺五加苷B、E和異嗪皮啶為主要的活性成分［3］。刺五加苷B又稱紫丁香苷，具有很強的止血作用，是一種強抗肝毒藥物，其恢復(fù)微粒體酶系統(tǒng)的酶活性及抑制脂質(zhì)過氧化作用可以促進肝毒代謝并改善肝功能使之正?；?。而異嗪皮啶(7－羥基－6，8－二甲氧基香豆素)是藥典中刺五加藥材起鎮(zhèn)靜安神作用的物質(zhì)基礎(chǔ)［4］。刺五加苷E是具有明顯的抗應(yīng)激反應(yīng)的作用。本實驗利用HPLC對刺五加及短梗五加根皮中的3種有效成分進行含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀，VWD檢測器(G1314A)，四元泵(G1311A)(美國 Agilent公司)，色譜柱∶Agilent TC－C18(4.6 mm×150 mm);電子天平(瑞士 Mettler Toledo AG285、AE240);KQ－250型超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑

甲醇為色譜純和分析純，重蒸餾水。

1.3 對照品

刺五加苷B、刺五加苷E及異嗪皮啶(均購自上海源葉生物科技有限公司，批號分別為20110824、20110824及20111024)。

1.4 實驗材料

刺五加根采于遼寧千山中溝向陽山坡，短梗五加根采于遼寧千山北溝背陰山腳。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

色譜柱∶Agilent TC－C18(4.6 mm ×150 mm);流動相:甲醇(A)－水(B)，梯度洗脫:(0～15 min:20A;15～20 min:21A;20～35 min:30A);檢測波長:210 nm;流速:0.8 mL·min－1;柱溫:30 ℃;進樣量:10 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的刺五加苷B、刺五加苷E及異嗪皮啶對照品，制備成刺五加苷B:160 μg·mL－1、刺五加苷 E:204 μg·mL－1、異嗪皮啶:38 μg·mL－1的對照品溶液，備用。

2.3 供試品制備

取刺五加及短梗五加根皮樣品粉末(40目)約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，用甲醇補足失重，搖勻濾過，取續(xù)濾液，即得刺五加苷B、E及異嗪皮啶供試品溶液［5］，進樣量 10 μL，色譜圖見圖 1。

圖1 A:混合標準品;B:刺五加根皮HPLC圖譜;C:短梗五加根皮HPLC圖譜

2.4 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取2、4、6、8、10 μL 刺五加皂苷 B、E及異嗪皮啶標準品溶液，注入液相色譜器儀中，測定色譜峰面積，以進樣量為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得刺五加皂苷B的線性回歸方程為 y=367.24x－15.115，r=0.9995，在 0.3240 ～1.6200 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。刺五加苷E回歸方程為 y=72.127x－3.9780，r=0.9998。在0.4080 ～2.0400 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。異嗪皮啶回歸方程為 y=306.17x－150.97，r=0.9998。在 0.0760 ～0.3800 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?！?/p>

2.5 精密度試驗

分別精密吸取刺五加苷B、刺五加苷E及異嗪皮啶對照品溶液連續(xù)進樣6次，每次10 μL，按前述色譜條件進樣分析，測定色譜峰面積，得RSD值分別為1.1%，1.4%和1.4%。測定結(jié)果表明，本試驗精密度試驗符合規(guī)定。

2.6 穩(wěn)定性試驗

供試品配制后分別按 2、4、6、8、10 h 的時間間隔進樣分析，測定峰面積，得刺五加苷B的RSD為1.54%，刺五加苷E的RSD為1.08%，異嗪皮啶的RSD為1.64%。試驗結(jié)果表明，供試液制備后10 h測定，色譜峰面積無明顯變化，在此時間內(nèi)，待測組分化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

分別精密稱取刺五加根皮粉末6份，按2.3項方法制備，精密吸取樣品液10 μL，連續(xù)進樣分析，測定刺五加苷B的RSD為1.2%，刺五加苷E的RSD為1.8%，異嗪皮啶的RSD為0.7%。試驗結(jié)果表明，待測組分重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

采用加樣回收法，分別取已知含量的刺五加根皮樣品6份，各0.125 g，精密稱定，分別精密加入刺五加苷B、E及異嗪皮啶對照品溶液，按2.3項方法制備，按2.1項色譜條件進行測定，測定刺五加苷B的RSD為0.7%，刺五加苷E的RSD為1.3%，異嗪皮啶的RSD為0.6%。

3 含量測定結(jié)果

精密吸取刺五加及短梗五加樣品溶液10 μL，按2.1項色譜條件進樣分析，每一樣品重復(fù)進樣3次，測定色譜峰面積，測定結(jié)果平均值見表1。

表1 刺五加及短梗五加根皮有效成分含量(mg·g－1)

4 結(jié)果與討論

4.1 本試驗優(yōu)化了藥典中等度洗脫的色譜檢測方法，采用甲醇︰水梯度洗脫的方法對刺五加及短梗五加中的刺五加苷B、E及異嗪皮啶進行檢測，其結(jié)果顯示所建立的方法簡單、快捷、準確度高，可用于刺五加及短梗五加中的刺五加苷B、E及異嗪皮啶含量的測定。

4.2 本試驗結(jié)果表明，刺五加根皮樣品中3種指標成分的含量多大于文獻［6－12］中的報道，短梗五加根皮樣品中刺五加苷B和刺五加苷E的含量明顯低于刺五加根皮中這兩種指標成分的含量，而異嗪皮啶的含量則只是略低于刺五加根皮中含量。相關(guān)文獻報道指標成分異嗪皮啶有鎮(zhèn)靜安神的作用，故推測短梗五加根皮在鎮(zhèn)靜安神方面有一定的療效。鑒于國內(nèi)外對短梗五加的研究較少，有關(guān)結(jié)論還有待于近一步深入研究。

［1］曹先蘭，李珠蓮.刺五加國外實驗研究［J］.中草藥，1980，11(6):277－283.

［2］國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草［M］.上海:上海科技出版社，1251.

［3］吳立軍，鄭健，姜寶虹，等.刺五加莖葉化學(xué)成分［J］.藥學(xué)學(xué)報，1999，34(4):294.

［4］張麗萍，陳麗穎，孫棫久，等.刺五加果化學(xué)成分的分析［J］.東北師大自然科學(xué)版，1992，21(1):123－247.

［5］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部［M］.中國醫(yī)藥科技出版社，2010:192.

［6］勞鳳云，李小娜，邢朝斌，等.HPLC法測定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷 E的含量［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，35(12):2280－2281.

［7］張萍.HPLC測定不同產(chǎn)地、不同生長年限刺五加藥材中異嗪皮啶［J］.藥物分析雜志，2010，30(12):2433－2435.

［8］姜文紅，劉靜，仲昭慶，等.HPLC法同時測定刺五加浸膏中3種有效成分的含量［J］.藥物分析雜志，2010，30(6):1145－1147.

［9］吳少杰，邢朝斌，勞鳳云，等.不同產(chǎn)地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色譜測定［J］.時珍國醫(yī)國藥，2010，21(8):1854－1855.

［10］張晶，劉芳芳，薛起，等.HPLC法測定刺五加不同部位刺五加苷 B、E含量［J］.藥物分析雜志.2008，28(12):2018－2020.

［11］張崇喜，王桐玉，田芯，等.不同采收期野生和仿生刺五加根與莖中紫丁香苷和總黃酮含量測定［J］.中成藥，2009，31(1):82－85.

［12］胡廣東，胡新海，宋鐵兵，等.刺五加中刺五加苷E的含量測定［J］.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2009，32(5):19－20.