于文會，張 潔，陸子音，韓名書，康 欣

（東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，哈爾濱 150030）

中藥外用治療創(chuàng)傷，具有控制局部感染、保護創(chuàng)面、加快創(chuàng)傷愈合和增加創(chuàng)口愈合強度的作用[1]。中藥在治療疾病時，使用復方，很少用單味中藥，這是傳統(tǒng)的用藥方法，臨床效果顯著。為了篩選中藥復方制劑促進創(chuàng)傷愈合的作用，試驗選取血竭、乳香、沒藥等13味中藥，根據(jù)活血化瘀、防腐生肌、消腫止痛、燥濕斂瘡等組成原則，組成三個藥方，根據(jù)其對創(chuàng)傷的愈合率、外周血液及抑菌等指標的影響，篩選出適合臨床應(yīng)用的中藥方劑，為獸醫(yī)臨床外用中藥的開發(fā)和應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中藥

血竭、乳香、沒藥、紫草、冰片、煅石膏等13味藥物（購自哈爾濱藥材公司），象皮生肌膏（由天津達仁堂京萬紅有限公司生產(chǎn)）。

1.1.2 實驗動物

Wistar大鼠60只，體重（250±25）g，購自哈爾濱醫(yī)科大學實驗動物繁殖中心。

1.2 試驗方法

1.2.1 中藥組方及制劑

Ⅰ號藥方：血竭、乳香、紫草、冰片、煅石膏等；Ⅱ號藥方：血竭、乳香、沒藥、大黃、冰片、煅石膏等；Ⅲ號藥方：血竭、乳香、沒藥、黃柏、冰片、煅石膏等。

生肌膏的制備參考創(chuàng)傷膏的加工工藝[2]。滅菌后4℃冰箱保存。

1.2.2 試驗分組及用藥方法

Wistar大鼠（250±25）g 50只，隨機分五組，每組10只，中藥組分為A組、B組、C組，陽性對照組（D）和空白對照組（E）。用乙醚麻醉后，在大鼠背部兩側(cè)剃毛，用自制打孔器造圓形缺損創(chuàng)，缺損創(chuàng)損傷至筋膜深層。傷口直徑2 cm。造模后的大鼠分籠飼養(yǎng)，A組、B組、C組分別在傷口上涂Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏，每天1次；D組在傷口涂象皮生肌膏，每天1次；E組在傷口涂2%碘酊，每天1次。

1.2.3 一般觀察

用藥后1、3、7、14 d，觀察大鼠的傷口愈合情況，并計算傷口的愈合率。

1.2.4 外周血白細胞、血小板的檢測

用藥后各組大鼠斷尾采血50 μL，用全自動血球計數(shù)儀計檢測白細胞數(shù)、血小板的數(shù)量。

1.2.5 血液中透明質(zhì)酸（HA）含量的檢測

用藥后1、3、7、14 d，大鼠眼球采血，分離血清。采用放射免疫分析法，以第二抗體作為分離劑。按照試劑盒說明書操作方法檢測血清中透明質(zhì)酸的含量。

1.2.6 體外抑菌試驗

將Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏、象皮生肌膏分別均勻地涂于直徑為1.0 cm的滅菌的濾紙片上。用無菌鑷子取藥敏紙片貼在接種細菌平板表面。每個平板分別貼上涂有Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏、象皮生肌膏濾紙片，濾紙片每張紙片間距不少于25 mm，紙片中心距平皿邊緣不少于15 mm。在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。以抑菌環(huán)直徑（cm）評定其抗菌作用（根據(jù)K-B瓊脂法，加以改良）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同中草藥組方對大鼠傷口愈合影響

由表1可見，創(chuàng)傷后的3d，各組之間愈合率差異不顯著；但在7d、14d，Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏、象皮膏與未給中藥（空白對照）組相比，創(chuàng)傷愈合率均有顯著增加，Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏與未給中藥（空白對照）組相比，差異顯著（P＜0.05）；Ⅲ號藥膏、象皮膏與未給中藥（空白對照）組相比，差異極顯著（P＜0.01）。表明在創(chuàng)傷愈合率方面，Ⅲ號藥膏、象皮膏優(yōu)于Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏。

表1 不同組在3、7、14 d創(chuàng)面愈合率比較Table 1 Wound healing rate in different groups （%）

2.2 不同中草藥組方對大鼠外周血液白細胞的影響

由表2可見，實驗1 d，各組之間白細胞數(shù)量差異不顯著（P＞0.05）。3～14d，大鼠外周血白細胞，Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏、象皮膏與不給中藥（空白對照）組相比，均差異顯著（P＞0.05）或差異極顯著（P＜0.01）。表明Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏及象皮膏均能誘導外周血白細胞增加，有利于創(chuàng)口的炎性凈化。

2.3 不同中草藥組方對大鼠外周血液血小板的影響

由表3可見，在試驗1 d，各中藥組的大鼠外周血小板數(shù)與未給中藥（空白對照）組相比，血小板數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。但在試驗3～14 d， Ⅲ號藥膏、象皮膏優(yōu)于Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏。表明Ⅲ號藥膏和象皮膏更利于創(chuàng)傷愈合過程的止血。

表 2 外周血液白細胞數(shù)量的動態(tài)變化（n=5）（X±S）細胞數(shù)（×109個·mL-1）Table 2 Dynamic changes of white blood cell count in the peripheral blood

表 3 外周血液血小板數(shù)量的動態(tài)變化（n=5）（X±S）細胞數(shù)（×1012個·mL-1）Table 3 Dynamic changes of blood platelet count in the peripheral blood

2.4 不同中草藥組方對血清中透明質(zhì)酸含量影響

由表4可以看出，試驗1 d，各中藥組的大鼠血液透明質(zhì)酸含量與未給中藥（空白對照）組相比，血小板數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。但用藥后3～14 d，透明質(zhì)酸含量變化是：Ⅲ號藥膏、象皮膏優(yōu)于Ⅱ號藥膏；Ⅱ號藥膏優(yōu)于Ⅰ號藥膏。表明Ⅲ號藥膏和象皮生肌膏更有利于創(chuàng)傷發(fā)生后肉芽組織的增生。

2.5 不同中藥組方的抑菌效果

從表5抑菌結(jié)果看，Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏、象皮生肌膏對常見的化膿菌大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、綠膿桿菌均有不同的抑菌效果，抑菌效果最好的是Ⅲ號藥膏。

表5 不同中藥組方的體外抑菌效果Table 5 Effect on vitrro bacteriostasis experiment of various Chinese medicines complex prescription

3 討論與結(jié)論

創(chuàng)傷愈合是目前獸醫(yī)外科領(lǐng)域研究的熱點、難點，中藥在促進創(chuàng)傷愈合方面有獨特效果。方中的紫草、當歸、白芷蒲、公英、三七等中藥在一些促進創(chuàng)傷愈合的方中出現(xiàn)[3-4]。通過試驗，Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏與象皮生肌膏在創(chuàng)面治療過程中，均具有保持創(chuàng)面濕潤、肉芽組織出現(xiàn)的早、生長快等現(xiàn)象；14 d創(chuàng)面完全愈合，留下疤痕的僅小，傷口愈合的周圍有新毛長出。三組藥方中均有血竭，血竭能顯著促進成纖維細胞的增殖，促進創(chuàng)傷愈合[5]。通過三個中藥組方療效比較，效果最好的為Ⅲ號藥膏。

在創(chuàng)傷修復過程中，創(chuàng)傷感染是影響創(chuàng)傷修復的重要因素。體外抑菌試驗，Ⅲ號藥膏對綠膿桿菌抑菌效果最好，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌有抑菌效果；而象皮生肌膏僅對金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。這與連翹對金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌均有顯著抑菌作用有關(guān)[6]，與蒲公英對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌抑菌作用有關(guān)[7]。外周白細胞增多是最常見的炎癥反應(yīng)。外周血白細胞的聚集，能夠促進創(chuàng)傷的炎性凈化。三組藥膏均有不同程度的誘導高白細胞和血小板向外周血集聚的作用。

透明質(zhì)酸在創(chuàng)傷修復中能夠促進組織快速生長重要的細胞外基質(zhì)，透明質(zhì)酸有利于細胞的運動和增殖，具有提高修復組織中Ⅲ型膠原含量的作用，而Ⅲ型膠原含量越高，瘢痕形成越少[8]。透明質(zhì)酸具有高粘彈性，通過調(diào)節(jié)細胞的通透性，降低血管異常高通透性，阻止病原微生物的入侵[9]。肉芽組織基質(zhì)中富含透明質(zhì)酸，這種富含透明質(zhì)酸的基質(zhì)可促進細胞遷移到暫時性受損的基質(zhì)中，促進細胞增殖和肉芽組織基質(zhì)的形成[10]。從空白對照組和各用藥組創(chuàng)面滲液中透明質(zhì)酸含量的動態(tài)變化看，各組均呈先上升繼而下降的趨勢。Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏與象皮生肌膏的透明質(zhì)酸含量繼續(xù)上升且上升明顯，下降緩慢。表明用藥組均能提高透明質(zhì)酸含量并維持較高水平的作用趨勢，能夠有效地促進肉芽組織的增生，調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)，促進創(chuàng)傷愈合。

試驗通過對A組、B組、C組、D組大鼠的外周雪白細胞、血小板、透明質(zhì)酸及體外抑菌試驗進行綜合分析，表明Ⅲ號藥膏對創(chuàng)傷愈合效果最好。

[1] 侯建明,藍進,高益槐.銀耳多糖局部應(yīng)用對大鼠創(chuàng)傷愈合的影響[J].實用醫(yī)藥雜志,2007,24(8):965-967.

[2] 閻偉,劉西斗,閻茹.創(chuàng)傷膏對創(chuàng)面愈合的作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志,2008,14(5):451-453.

[3] 陳朝暉,譚強,謝利,等.復方紫歸膏促進大鼠創(chuàng)面愈合的實驗研究[J].中國美容醫(yī)學,2009,18(12):1778-1780.

[4] 林子洪,許環(huán)親,胡婧曄,等.復方中藥促進家兔皮膚創(chuàng)傷愈合的實驗研究[J].實用醫(yī)學雜志,2007,23(14):2129-2130.

[5] 李丹,郭樹忠,王勝春,等.血竭提取物對人成纖維細胞增殖的影響[J].第四軍醫(yī)大學學報,2006,27(16):1502-1504.

[6] 劉紅,高學軍,車有權(quán),等.臨床型奶牛乳腺炎致病菌分析及藥敏試驗[J].東北農(nóng)業(yè)大學學報,2010,41(2):106-111.

[7] 馮慶彬,張秀英.治療奶牛乳腺炎中藥透皮制劑處方的篩選[J].東北農(nóng)業(yè)大學學報,2008,39(9):75-78.

[8] Chandrakasan G,Rutka J,Stern R.Hyaluronic acid stimulates collagen synthesis and levels of typeⅢcollagen in cultures of human fibroblasts[J].J Cell Biol,1986,103:252.

[9] Wisniewski H G,Hua J C,Poppers D M,et al.TNF/IL-1-inducible protein TSG-6 potentiatesplasmin inhibition by inter-α-inhibitor and exerts a strong anti-inflammatory effectin vivo[J].J Immunol,1996,156:1609.

[10] Toole B P.Hyaluronan in morphogenesis[J].J Intem Med,1997,242:35-40.