李艷玲，趙建平

（鄭州牧業(yè)工程高等專科學(xué)校藥物工程系，河南 鄭州 450011）

近年來(lái)，纖維素酶在各個(gè)領(lǐng)域應(yīng)用極為廣泛，例如化工、食品及提取天然產(chǎn)物等。然而纖維素酶對(duì)中獸藥藥效方面的影響尚處于初步研究階段，且主要應(yīng)用于單味藥的研究，在成方的研究方面尚存在空白。本課題把纖維素酶應(yīng)用于茵陳蒿散，觀察纖維素酶對(duì)茵陳蒿散利膽作用的影響，并對(duì)酶的用量及加酶方式進(jìn)行了考察。

1 材料

注射器、細(xì)塑料插管、結(jié)扎線、手術(shù)剪、眼科鑷、止血鉗、手術(shù)刀、刻度試管、試管架、燒杯、紗布、天平、粗手套。

藥品：20%烏拉坦溶液，生理鹽水。樣品Ⅱ：1g／mL茵陳蒿＋梔子水煎液；樣品Ⅲ：1g／mL茵陳蒿＋大黃水煎液；樣品Ⅳ：1g／mL大黃＋梔子水煎液。

動(dòng)物：家兔20只。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同加酶方法對(duì)茵陳蒿散利膽作用的影響

2.1.1 樣品的制備 樣品Ⅰ：稱茵陳蒿散，加蒸餾水，攪勻；樣品Ⅱ：稱茵陳蒿散，加4倍量預(yù)溫45℃的生理鹽水，取酶0.2%，加少量溫水溶解后，逐漸加入樣品中，攪勻，放入45℃恒溫培養(yǎng)箱中，于4.0 h后取樣，干燥。加蒸餾水?dāng)噭?。樣品Ⅲ：稱茵陳蒿散，取酶0.2%，加少量溫水溶解后，逐漸加入樣品中，加蒸餾水，攪勻。

2.1.2 方法 取家兔20只，隨機(jī)分為4組，每組5只，編號(hào)、稱記體重，按10mL／kg體重灌胃給藥，空白組灌胃生理鹽水，每天2次，連續(xù)給藥3d，第4天第1次給藥后，腹腔注射烏拉坦溶液5 mL／kg體重，使之麻醉。將家兔背固定于手術(shù)板上，腹部正中剪毛后作一2cm切口，從幽門(mén)向下找出十二指腸及白色的十二指腸乳頭部。在乳頭部對(duì)面十二指腸壁上剪一開(kāi)口，將膽汁引流管插入總膽管內(nèi)，用刻度試管承接滴入的膽汁。待膽汁流出恒定后，每0.5h記錄1次膽汁分泌量，記錄2h。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同加酶方法對(duì)茵陳蒿散利膽作用的影響

表1顯示，茵陳蒿散可以使家兔的膽汁流量增加，和空白組相比，P＜0.05，有顯著性差異；體外加酶組和空白組相比，在30min、60min時(shí)有顯著差異，P＜0.05；在90min、120min均有極顯著性差異，P＜0.01，說(shuō)明加酶后，茵陳蒿散的利膽作用增強(qiáng)；體內(nèi)加酶組和空白組相比、和不加酶組相比均有極顯著性差異，P＜0.01，且體內(nèi)加酶組和體外加酶組相比也有顯著性差異，P＜0.05，說(shuō)明體內(nèi)加酶的茵陳蒿散利膽作用要明顯優(yōu)于體外加酶的茵陳蒿散。

2.2 酶的用量對(duì)茵陳蒿散利膽作用的影響

樣品的制備：樣品Ⅰ：稱過(guò)80目篩的茵陳蒿散，加生理鹽水?dāng)噭?，使?jié)舛葹?.25g／mL。取酶0.1%，加少量溫水溶解后，逐漸加入樣品中，攪勻。樣品Ⅱ：稱過(guò)80目篩的茵陳蒿散，加生理鹽水?dāng)噭?，使?jié)舛葹?.25g／mL。取酶0.15%，加少量溫水溶解后，逐漸加入樣品中，攪勻。樣品Ⅲ：稱過(guò)80目篩的茵陳蒿散，加生理鹽水?dāng)噭颍節(jié)舛葹?.25g／mL。取酶0.2%，加少量溫水溶解后，逐漸加入樣品中，攪勻。樣品Ⅳ：稱過(guò)80目篩的茵陳蒿散，加生理鹽水?dāng)噭?，使?jié)舛葹?.25g／mL。取酶0.25%，加少量溫水溶解后，逐漸加入樣品中，攪勻。樣品Ⅴ：稱過(guò)80目篩的茵陳蒿散，加生理鹽水?dāng)噭?，使?jié)舛葹?.25g／mL。取酶0.3%，加少量溫水溶解后，逐漸加入樣品中，攪勻。

方法同2.1.2，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 酶的用量對(duì)茵陳蒿散利膽作用的影響

當(dāng)加酶量為0.1%，加酶組和空白組相比膽汁流量雖有一定增多，但沒(méi)有顯著差異；當(dāng)加酶量為0.15%時(shí)，加酶組和空白組相比膽汁流量有顯著差異，P＜0.05；當(dāng)加酶量為0.2%、0.25%、0.3%時(shí)，和空白組相比均有極顯著性差異，P＜0.01；但這3組加酶組相比沒(méi)有顯著性差異。

2.3 不同劑量對(duì)茵陳蒿散利膽作用的影響 稱茵陳蒿散，加生理鹽水，攪勻，使?jié)舛葹?.25g／mL，取酶0.2%，加少量溫水溶解后，逐漸加入茵陳蒿散中，分別按10mL／kg體重、6.7mL／kg體重、5mL／kg體重灌胃給藥，不加酶組按10mL／kg體重灌胃給藥，其余方法同2.1.2，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同劑量對(duì)茵陳蒿散利膽作用的影響

從表3可以看出，加酶組的1／2劑量組和空白組相比，雖然可以增加家兔膽汁的流量，但二者相比沒(méi)有顯著差異，而加酶組的2／3劑量組和不加酶組的全劑量組對(duì)家兔膽汁流量的影響相當(dāng)，均能使家兔的膽汁流量增加40%左右。

3 討論

茵陳蒿散始載于 《傷寒論》，由茵陳、梔子、大黃組成，具有清熱利濕、利膽退黃的作用，在獸醫(yī)臨床的應(yīng)用非常廣泛。茵陳蒿散中的3味藥均是植物藥，構(gòu)成植物藥細(xì)胞壁的主要成分是纖維素，而纖維素是由β－D－葡萄糖以1，4－β葡萄糖苷鍵連接，用纖維素酶酶解可以破壞β－D葡萄糖苷鍵，使纖維素降解成還原糖從而破壞植物藥的細(xì)胞壁，有利于對(duì)有效成分的提取。

表1結(jié)果表明，用纖維素酶處理過(guò)的茵陳蒿散的利膽作用均優(yōu)于不加酶者，說(shuō)明纖維素酶可以酶解細(xì)胞壁，促進(jìn)茵陳蒿散中有效成分的溶出，從而增強(qiáng)其利膽作用。對(duì)比兩種不同的加酶方法可以看出，體內(nèi)加酶的方式對(duì)茵陳蒿散的影響要強(qiáng)于體外加酶的方式，說(shuō)明纖維素酶在體內(nèi)發(fā)揮酶解茵陳、梔子、大黃細(xì)胞壁的作用要強(qiáng)于在體外作用，可能和機(jī)體的內(nèi)環(huán)境更有利于纖維素酶活性的發(fā)揮有關(guān)。

表2結(jié)果表明，酶的用量會(huì)影響茵陳蒿散的利膽作用，但并不是酶量越多越好，這主要是因?yàn)樵谝欢l件下，纖維素分子能和酶分子結(jié)合的點(diǎn)數(shù)有限，當(dāng)這些結(jié)合點(diǎn)全部被纖維素酶分子占據(jù)后，再增加纖維素酶的量，起不到酶解的作用。

表3結(jié)果表明，茵陳蒿散加酶組的2／3劑量組和不加酶組的全劑量組對(duì)家兔膽汁流量的影響相當(dāng)，即加活力為2000U／g的纖維素酶0.2%可以節(jié)約1／3藥材。

從本試驗(yàn)結(jié)果可以看出，把一定量的纖維素酶以添加劑的形式隨藥物喂入動(dòng)物體內(nèi)，借助于動(dòng)物消化道內(nèi)環(huán)境和自身能源酶同時(shí)發(fā)揮作用，能大大提高茵陳蒿散的藥理作用，節(jié)約原藥材。

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