祖麗皮亞·玉努斯

（新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830046）

在全球長壽地區(qū)之一的新疆，具有獨(dú)特的地理環(huán)境和氣候條件，因而蘊(yùn)育了豐富的維吾爾藥材資源，維吾爾傳統(tǒng)醫(yī)藥至今廣泛流傳。維吾爾人在用天然藥物治病過程中創(chuàng)造了獨(dú)具特色的維吾爾藥制備方法、用藥等理論及臨床經(jīng)驗(yàn)。本文為對(duì)維吾爾藥材制備方法進(jìn)行有關(guān)試驗(yàn)，找出合理的制備方法，以三種常用維吾爾藥材為試驗(yàn)材料對(duì)常見的4種細(xì)菌進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn) 。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、變形桿菌。新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院微生物教研室保存菌種。

1.1.2 儀器與藥品 恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋，冰箱，722型可見紫外分光光度計(jì)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，電子天平，pH值精密試紙，以及其他微生物培養(yǎng)所需常規(guī)器皿等、所用的藥品有牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉等。

1.1.3 維吾爾生藥 地錦草，菝葜根，黃花苜蓿，購自新疆加帕爾阿吉生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 維藥提取液的制備 （1）煎煮法：取上述3種藥材各10g，切細(xì)磨碎，加200mL蒸餾水，煮沸30min，過濾，藥渣再加蒸餾水200 mL，煮沸30 min，過濾，合并兩次濾液，加熱蒸發(fā)濃縮至10mL，使100%原液，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。?）加水研磨法：取上述3種藥材各10g，無菌乳缽中搗碎，按1∶10比例加無菌蒸餾水浸泡過夜，然后3000r／min離心5min，上清液即為100%原液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩＃?）乙醇提取法：取上述3中藥材10g，加60mL體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇浸泡24h，將浸提液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至10mL，即得100%提取液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 菌懸液的制備 無菌條件取一鉑金環(huán)已活化的備用菌種接種在滅菌100mL的液體培養(yǎng)基中，在37℃振蕩培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～18h，再用可見紫外分光光度計(jì)測(cè)OD值，測(cè)定結(jié)果在0.005～0.01范圍內(nèi)可用于抑菌試驗(yàn)，如果菌懸液的OD值超過這個(gè)范圍用2倍和10倍稀釋法稀釋到0.005～0.01范圍，備用。

1.2.3 最底抑菌濃度（MIC）的測(cè)定 采用試管稀釋法進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)。不同方法（煎煮法、加水研磨法）制備的地錦草、菝葜根、黃花苜蓿提取液分別配制成含提取液濃度為50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、1.56%的液體培養(yǎng)基各5mL。

分別取菌懸液100μmL接種于上述液體培養(yǎng)基內(nèi)，做一個(gè)平行試驗(yàn)，一個(gè)對(duì)照試驗(yàn)。在37℃振蕩培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24h，然后與對(duì)照組對(duì)照顏色變化。如顏色變化不明顯，取100μmL于已備好的固體平板培養(yǎng)基中涂布均勻，在37℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。

1.2.4 結(jié)果判定 觀察細(xì)菌生長情況，細(xì)菌不生長的最低維吾爾藥提取液濃度即為該提取液對(duì)該細(xì)菌的最低抑菌濃度（MIC）。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 對(duì)大腸桿菌的抑菌作用 采用煎煮法提取的地錦草，黃花苜蓿、菝葜根提取液對(duì)大腸桿菌的MIC分別為12.5%、12.5%和25%；采用加水研磨法提取的地錦草、黃花苜蓿、菝葜根提取液對(duì)大腸桿菌的 MIC分別為25%、12.5%和6.25%；不同乙醇提取液對(duì)變形桿菌的 MIC分別為12.5%、25%、6.25%。見表1。

表1 不同提取液對(duì)大腸桿菌的抑菌作用

2.2 對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用 采用煎煮法制備的提取液對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC均為12.5%。采用加水研磨法制備的提取液對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC分別為50%、25%、50%，不同乙醇提取液對(duì)變形桿菌的 MIC分別為12.5%、25%、6.25%。見表2。

2.3 對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌作用 采用煎煮法制備的3種提取液對(duì)枯草芽孢桿菌的MIC均為50%；采用加水研磨法制備的原液對(duì)枯草芽孢桿菌沒有抑菌作用，不同乙醇提取液對(duì)變形桿菌的MIC分別為50%、50%、25%。見表3。

2.4 對(duì)變形桿菌的抑菌作用 采用煎煮法制備的3種提取液對(duì)變形桿菌的 MIC分別為25%、25%、50%，采用加水研磨法的提取液對(duì)變形桿菌的MIC均為50%，不同乙醇提取液對(duì)變形桿菌的MIC分別為12.5%、25%、12.5%。見表4。

3 討論

3.1 維吾爾藥的制備過程不同于天然化學(xué)藥物的制備，主要要求提取總有效成分，多數(shù)為粗提物，臨床用藥的主要形式以復(fù)方為主，因此在研究某種維吾爾藥的抑菌作用時(shí)應(yīng)考慮到復(fù)方制劑的抑菌效果。

表2 不同提取液對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌作用

表3 不同提取液對(duì)枯草芽孢桿菌抑菌作用

表4 不同提取液對(duì)變形桿菌的抑菌作用

3.2 維吾爾藥制備的方法中炒、煅、蒸、煮應(yīng)用最多，

3.3 同一種藥材由于不同來源、季節(jié)性變化、使用部位的不同其成分和抑菌作用也有差別，特別是有些活性成分對(duì)光和熱不穩(wěn)定，這給抑菌效果帶來一定的影響。還有同一種提取液，對(duì)不同供試菌抑菌效果也存在著較大的差異，其機(jī)理待進(jìn)一步研究。

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