徐正華 沈金德 徐 窕 沈娟麗

(1.上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院,上海 201403;2.桐鄉(xiāng)市中泰蟲草專業(yè)合作社,浙江 桐鄉(xiāng) 314500)

蛹蟲草 (Cordyceps militaris(Fr.)Link)又名北冬蟲夏草,為麥角菌目、麥角菌科真菌,是我國醫(yī)藥學(xué)寶庫中一類珍稀藥用菌,經(jīng)醫(yī)藥科學(xué)工作者多年研究與實踐證明,蛹蟲草所含蟲草素、蟲草多糖、蟲草酸、SOD酶等生理活性物質(zhì)和營養(yǎng)成分的含量都高于或接近冬蟲夏草,現(xiàn)已被國家衛(wèi)生部批準(zhǔn)為新資源食品。

大麥蟲隸屬鞘翅目,被譽為 “蛋白質(zhì)寶庫之首”,營養(yǎng)豐富。以大麥蟲幼蟲為寄主的蛹蟲草子實體是真正的活體蟲草,其外觀與冬蟲夏草極為相似,包括昆蟲幼蟲和生長于幼蟲頭部的1～2根、長度大于2 cm的活體蟲草子實體。蛹蟲草培養(yǎng)過程包括蟲草菌侵染活體昆蟲幼蟲、菌絲在活體昆蟲幼蟲體內(nèi)生長、幼蟲僵化和頭部長出蟲草子實體等環(huán)節(jié),所得蟲草的營養(yǎng)成分與野生冬蟲夏草基本一致。桐鄉(xiāng)市中泰蟲草專業(yè)合作社經(jīng)過多年研究,成功獲得人工大麥蟲蟲草。迄今,用昆蟲幼蟲來培養(yǎng)蟲草是一個普遍性的難題。因為幼蟲蟲體雜菌多,難以控制,一般蛹蟲草菌極難感染昆蟲幼蟲。為了探索蛹蟲草菌感染昆蟲幼蟲的有效途徑,我們通過大量大麥蟲幼蟲培育蛹蟲草子實體試驗,總結(jié)獲得蛹蟲草菌感染大麥蟲幼蟲的較好方法。

1 材料與配方

1.1 供試材料 供試菌株為蛹蟲草菌株,由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院蟲草課題組提供。大麥蟲幼蟲由南通市周氏生物科技公司提供。

1.2 固體培養(yǎng)基配方 1000 mL培養(yǎng)基中,蔗糖15 g,土豆 200 g,磷酸二氫鉀 2 g,維生素B10.01 g,硫酸鎂1.5 g,蛋白胨8 g,瓊脂20 g。土豆去皮后稱重,切小條,燒開后煮30 min,過濾。1000 mL無菌水與以上材料混合后燒開分裝三角瓶,高壓滅菌30 min,倒入平皿。

1.3 液體培養(yǎng)基配方 1000 mL培養(yǎng)基中,蔗糖30 g,土豆200 g,磷酸二氫鉀3 g,維生素B10.01 g,硫酸鎂1.5 g,蛋白胨10 g。土豆去皮后稱重,切小條,燒開后煮30 min,過濾。1000 mL無菌水與以上材料混合后燒開分裝三角瓶,高壓滅菌30 min后備用。

1.4 大麥蟲幼蟲飼料配方 80%麥麩,15%玉米粉,5%蟲草菌液和復(fù)合維生素B。其中每千克蟲草菌液當(dāng)中加入10片復(fù)合維生素B。

2 試驗方法

2.1 菌種分離 分別取新鮮蛹蟲草菌株、子座部分及子囊孢子進行反復(fù)分離。在培養(yǎng)皿上得到一級母種蟲草菌。

2.2 母種培養(yǎng) 將母種接種到液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)成菌懸液。在恒溫床上培養(yǎng) 4～5天,溫度20 ℃,轉(zhuǎn)速130 r/min。

2.3 單一喂養(yǎng)法培養(yǎng)蟲草子實體試驗 當(dāng)大麥蟲幼蟲長至2 cm長時,將 “1.4”節(jié)所述大麥蟲幼蟲飼料配方與5%蟲草菌液混合后開始喂養(yǎng),試驗處理分為3組,每組30條大麥幼蟲。喂養(yǎng)15天后,保持溫度在20～30℃,空氣相對濕度為60%～70%,繼續(xù)飼養(yǎng)至幼蟲呈呆滯狀態(tài);然后放入經(jīng)過消毒的培養(yǎng)瓶中,培養(yǎng)溫度為18～23℃,空氣相對濕度80%～90%,光照強度150～200 lx,每天光照12 h。培養(yǎng)30～40天,子實體長度達3～5 cm,幼蟲僵化率 (即蟲草菌的感染率)為30%,子實體生長率為15%。各處理在相同管理條件下培養(yǎng)、觀察,計算平均感染率與出草率。

2.4 喂養(yǎng)結(jié)合噴淋法培育蟲草子實體試驗 喂養(yǎng)階段的時間和方法與單一喂養(yǎng)法相同。喂養(yǎng)大麥蟲幼蟲15天后,將蟲草菌液噴淋于大麥蟲幼蟲身體上,繼續(xù)飼養(yǎng)至幼蟲呈呆滯狀態(tài)后將其放入經(jīng)過消毒的培養(yǎng)瓶中,出草管理同單一喂養(yǎng)法。采用喂養(yǎng)結(jié)合噴淋法培養(yǎng),幼蟲的僵化率達85%,子實體生長率為75%。各處理在相同管理條件下培養(yǎng)、觀察,計算平均感染率與出草率。

3 結(jié)果與分析

3.1 單一喂養(yǎng)與結(jié)合噴淋喂養(yǎng)所培育的蟲草子實體的生長情況 從 “2.3”和 “2.4”節(jié)不同蟲體培養(yǎng)方法的試驗結(jié)果可知,單一喂養(yǎng)的大麥蟲幼蟲僵化率 (菌體感染率)較低,僅為30%,子實體生長率低至15%;而采用喂養(yǎng)與噴菌液相結(jié)合的方法,幼蟲僵化率為85%,子實體生長率達 75%,子實體長,感染率高,所得蟲草外觀與野生冬蟲夏草相同。此結(jié)果表明,喂養(yǎng)與噴菌液相結(jié)合培育大麥蟲蟲草子實體方法的效果遠(yuǎn)較單一喂養(yǎng)法好。

3.2 大麥蟲幼蟲雌雄小鼠急性經(jīng)口毒性試驗結(jié)果 將15000 mg/kg大麥蟲幼蟲樣品劑量分別注射到10只雌性和雄性兩組小鼠體內(nèi),試驗期間,各組小鼠活動均正常,毛色光澤度好,未見任何中毒體征和死亡現(xiàn)象出現(xiàn);到期處死小鼠,解剖小鼠軀體,肉眼觀察各臟器,未見異常。

樣品對雌雄小鼠急性經(jīng)口毒試驗的最大耐受劑量 (MTD)均大于15000 mg/kg,屬無毒級。以上檢測由上海市疾病預(yù)防控制中心進行,檢定結(jié)果說明大麥蟲的食用安全性高、無毒。

圖1 喂養(yǎng)與噴淋結(jié)合培養(yǎng)的大麥蟲蟲草

4 結(jié)論

培養(yǎng)蛹蟲草子實體所需的大麥蟲幼蟲,可通過人工大量養(yǎng)殖獲得,原料有保障,食用安全。采用喂養(yǎng)與噴菌液相結(jié)合,接種成功率高,達85%,成本低,營養(yǎng)好,外觀與天然冬蟲夏草極為相似,具有較高的開發(fā)價值。

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