安 波 檀碧波 李 勇 范立僑 趙 群 張志棟 趙雪峰 賈 楠 王 冬

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，河北 石家莊 050011)

目前研究證實(shí)環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)已成為胃癌生物治療的重要靶目標(biāo)，逆轉(zhuǎn)COX-2表達(dá)可有效逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性、提高化療藥物效果〔1〕，說明COX-2與胃癌細(xì)胞的多藥耐藥性(Multidrug resistance，MDR)關(guān)系密切。前期研究已證實(shí)，老年人消化道腫瘤有其特征〔2〕，應(yīng)根據(jù)其特點(diǎn)進(jìn)行治療;其他前期研究也發(fā)現(xiàn)腫瘤進(jìn)展過程中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的COX-2和MDR因子存在與原發(fā)灶不同的異質(zhì)性表達(dá)〔3，4〕，而關(guān)于COX-2在老年胃癌患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中表達(dá)特征及其與MDR因子的關(guān)系尚未見報(bào)道。因此，本研究檢測了老年胃癌患者原發(fā)灶、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶COX-2、MDR因子中P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST-π)、拓?fù)洚悩?gòu)酶(TopoⅡα)的表達(dá)，并對其關(guān)系進(jìn)行了比較。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇2007年10月至2009年9月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外科住院手術(shù)并經(jīng)病理證實(shí)的老年胃癌患者33例(≥60歲)，其中男 22例，女 11例，年齡 60～80〔平均(65.2±4.5)〕歲。取同期住院手術(shù)并經(jīng)病理證實(shí)的低齡消化道腫瘤患者32例(＜60歲)作為對照組。所有病例術(shù)前均未接受放化療。每例腫瘤組織標(biāo)本均經(jīng)中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，經(jīng)蘇木素-伊紅(H-E)染色病理診斷。

1.2 方法 免疫組化染色測定 COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα的表達(dá)。鼠抗人COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα單克隆抗體及免疫組化試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)公司(美國ZYMED公司產(chǎn)品)，采用生物素-鏈霉親和素酶聯(lián)免疫吸附法(SP法)對腫瘤進(jìn)行上述指標(biāo)免疫組化染色，染色步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。結(jié)果判斷由兩位病理醫(yī)師雙盲法對切片進(jìn)行觀察，每張切片隨機(jī)取5個(gè)(×400)高倍視野，每視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα 以細(xì)胞膜及(或)胞質(zhì)呈棕黃色著染為染色陽性。按腫瘤細(xì)胞著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞率分別計(jì)分。著色強(qiáng)度計(jì)分:無著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。腫瘤細(xì)胞陽性細(xì)胞率計(jì)分標(biāo)準(zhǔn):陽性細(xì)胞≤5%為0分，6% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，≥76%為4分;兩種計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)所得分值的乘積為0或1表示陰性(－)，2～3為弱陽性(+)，4～7陽性()，≥8強(qiáng)陽性()。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS8.0統(tǒng)計(jì)軟件，等級資料使用Wilcoxon配對秩和檢驗(yàn)、雙變量相關(guān)分析并計(jì)算Spearman等級相關(guān)系數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 老年胃癌患者原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)COX-2和MDR因子的表達(dá)情況 檢測的4種蛋白質(zhì)中，P-gp在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)強(qiáng)于原發(fā)灶(S=88，P＜0.01)，而TopoⅡα在轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)則明顯降低(S=－65，P＜0.05);COX-2、GST-π在原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)強(qiáng)度無明顯差異(均P＞0.05)。TopoⅡα表達(dá)在原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶間存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.4993，P＜0.01);其他三種蛋白在老年患者兩種組織中的表達(dá)則未見相關(guān)性(均P＞0.05)。見表1。

2.2 COX-2與三種MDR因子表達(dá)的關(guān)系 老年患者原發(fā)灶組織中COX-2與TopoⅡα呈負(fù)相關(guān)(r=－0.5889，P＜0.01)，P-gp與TopoⅡα呈正相關(guān)(r=0.3820，P＜0.05);其他因子之間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)關(guān)系(均P＞0.05)。轉(zhuǎn)移灶各因子表達(dá)未發(fā)現(xiàn)相關(guān)關(guān)系(均P＞0.05)。

2.3 老年胃癌患者與對照組COX-2、MDR因子在原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)的比較 原發(fā)灶中，老年組COX-2、P-gp和GST-π表達(dá)高于對照組(均P＜0.05);轉(zhuǎn)移灶中老年組COX-2、P-gp表達(dá)強(qiáng)于對照組(均P＜0.05)。其他因子表達(dá)比較未見明顯差異(均P＞0.05)。見表2。

表2 老年胃癌患者與對照組COX-2、MDR因子的表達(dá)情況(n)

3 討論

COX-2是一種誘導(dǎo)酶，在胃癌組織中表達(dá)增高，與腫瘤的侵襲、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。研究發(fā)現(xiàn)，COX-2與MDR1/P-gp、TopoⅡα等MDR相關(guān)因子關(guān)系密切，可以調(diào)節(jié)其表達(dá)〔5，6〕。進(jìn)展期胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率達(dá)60%～80%，已成為影響預(yù)后的獨(dú)立因素，而腫瘤切除后復(fù)發(fā)的根源是殘留和/或轉(zhuǎn)移灶〔7〕，因此明確胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶COX-2表達(dá)與MDR因子的關(guān)系較原發(fā)灶研究意義更大。與低齡患者相比，老年胃癌患者具有分化程度高、凋亡率較高、預(yù)后較好等特征〔8〕。而迄今關(guān)于老年胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶COX-2和MDR因子表達(dá)特征及相互關(guān)系的研究尚未見報(bào)道。本結(jié)果顯示，老年患者COX-2在原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶間均有較高的陽性表達(dá)率，提示COX-2可作為老年胃癌生物治療的靶目標(biāo);結(jié)果同時(shí)顯示COX-2表達(dá)強(qiáng)度在原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中雖無明顯差異，但并無相關(guān)性，提示老年胃癌細(xì)胞在轉(zhuǎn)移過程中，COX-2已發(fā)生了異質(zhì)性變化。對老年患者M(jìn)DR因子表達(dá)的分析也得出類似結(jié)論。在對COX-2與各種MDR因子的關(guān)系分析中發(fā)現(xiàn)，原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶中COX-2表達(dá)均與TopoⅡα呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，但與P-gp無明顯相關(guān)性，與其他報(bào)道不同〔5，9〕。說明老年胃癌COX-2與各MDR因子的調(diào)控更為復(fù)雜，這種調(diào)控是多因素、網(wǎng)絡(luò)式調(diào)節(jié)共同作用的結(jié)果，故各種因子表現(xiàn)出的相關(guān)性在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中隨大分子異質(zhì)性變化而發(fā)生改變。

P-gp、GST-π、TopoⅡα被視為經(jīng)典MDR相關(guān)因子。由P-gp介導(dǎo)的耐藥途徑通過藥泵作用將包括多種藥物外排而產(chǎn)生MDR〔10〕;GST-π可通過酶結(jié)合方式(解毒作用)將多種化療藥物從體內(nèi)排出而導(dǎo)致MDR〔11〕;TopoⅡα是腫瘤化療的重要靶點(diǎn)，其表達(dá)上調(diào)可提高腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性〔12〕。本研究結(jié)果顯示這些MDR因子在老年胃癌轉(zhuǎn)移過程中出現(xiàn)了異質(zhì)性變化，這種變化使腫瘤的MDR調(diào)控更為復(fù)雜，導(dǎo)致腫瘤的生物治療也因此難以實(shí)現(xiàn)。在對老年胃癌患者進(jìn)行研究時(shí)，應(yīng)充分考慮這種異質(zhì)性變化的影響，了解轉(zhuǎn)移灶中COX-2、MDR因子的表達(dá)特征及變化規(guī)律，從而為逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞的MDR、抑制腫瘤惡性生物學(xué)行為奠定基礎(chǔ)。

1 Liu H，Huang P，Xu X，et al.Anticancer effect of celecoxib via COX-2 dependent and independent mechanisms in human gastric cancers cells〔J〕.Dig Dis Sci，2009;54(7):1418-24.

2 檀碧波，韓 杰，呂炳蓉，等.p53、P-gp、GST-π 和TopoⅡα 在老年消化道腫瘤中的表達(dá)及意義〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2009;29(7):850-2.

3 檀碧波，孫麗君，耿 瑋，等.胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶COX-2和Bcl-2表達(dá)及其與體外化療敏感性的關(guān)系〔J〕.中華普通外科雜志，2009;24(11):930-3.

4 韓 杰，檀碧波，王安峰，等.消化道腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶P-gp、GST-π和凋亡抑制蛋白表達(dá)的特點(diǎn)〔J〕.中華外科雜志，2009;47(2):106-8.

5 Patel VA，Dunn MJ，Sorokin A.Regulation of MDR1(P-glycoprotein)by cyclooxygenase-2〔J〕.J Biol Chem，2002;277(41):38915-20.

6 Segawa E，Sakurai K，Kishimoto H，et al.Expression of cyclooxygenase-2 and DNA topoisomeraseⅡalpha in precancerous and cancerous lesions of the oral mucosa〔J〕.Oral Oncol，2008;44(7):664-71.

7 Chen XL，Su BS，Sun RQ，et al.Relationship between expression and distribution of cyclooxygenase-2 and bcl-2 in human gastric adenocarcinoma〔J〕.World J Gastroenterol，2005;11(8):1228-31.

8 Zheng H，Takahashi H，Murai Y，et al.Pathobiological characteristics of intestinal and diffuse-type gastric carcinoma in Japan:an immunostaining study on the tissue microarray〔J〕.J Clin Pathol，2007;60(3):273-7.

9 檀碧波，李 勇，韓 杰，等.胃、大腸癌COX-2、多藥耐藥相關(guān)因子表達(dá)與體外化療藥敏性的關(guān)系及意義〔J〕.四川大學(xué)學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版，2010;41(1):128-31.

10 Hao Z，Li X，Qiao T，et al.CIAPIN1 confers multidrug resistance by upregulating the expression of MDR-1 and MRP-1 in gastric cancer cells〔J〕.Cancer Biol Ther，2006;5(3):261-6.

11 Wang LS，Chow KC，Wu YC，et al.Inverse expression of dihydrodiol dehydrogenase and glutathione-S-transferase in patients with esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Int J Cancer，2004;111(2):246-51.

12 Salvatore C，Camarda G，Maggi CA，et al.NF-kappaB activation contributes to anthracycline resistance pathway in human ovarian carcinoma cell line A2780〔J〕.Int J Oncol，2005;27(3):799-806.