馬宏飛，盧生有，韓秋菊，李 薇

(遼寧石油化工大學(xué)環(huán)境與生物工程學(xué)院，遼寧 撫順 113001)

維生素C又稱抗壞血酸，是一種水溶性維生素。能預(yù)防牙齦出血及萎縮、提高人體免疫力，對(duì)壞血病、動(dòng)脈硬化、貧血等有一定療效[1]。

維生素C的測(cè)定方法主要有紫外分光光度法、紅外光譜法、2,6-二氯靛酚滴定法、高效液相色譜法、鉬藍(lán)比色法、原子吸收法、碘量法、電位滴定法、熒光光度法、毛細(xì)管電泳法、流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法[2～12]等。其中原子吸收法、高效液相色譜法和熒光光度法儀器相對(duì)昂貴；碘量法和電位滴定法操作步驟較繁瑣，而且受其它還原性物質(zhì)、樣品色素顏色和測(cè)定時(shí)間的影響；紫外分光光度法是根據(jù)維生素C對(duì)紫外產(chǎn)生吸收和對(duì)堿不穩(wěn)定的特性，于243.4 nm處測(cè)定樣品液與堿處理樣品液兩者吸光度之差，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，即可計(jì)算樣品中維生素C的含量。

作者在此采用紫外分光光度法測(cè)定5種常見果蔬中維生素C的含量，結(jié)果令人滿意。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

青椒、橙子、黃瓜、蘋果、西紅柿，市售。

抗壞血酸、HCl、NaOH均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

UV1102型紫外可見分光光度計(jì)，上海天美科學(xué)儀器有限公司；TB-214型電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取0.050 g抗壞血酸，加10 mL 10%HCl溶解，用蒸餾水定容至500 mL，混勻，即得100 μg·mL-1維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 吸收曲線的繪制

移取10 mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液于50 mL比色管中，稀釋至刻度，混勻。用1 cm石英比色皿，以蒸餾水為參比，在200～300 nm波長范圍內(nèi)用紫外可見分光光度計(jì)自動(dòng)掃描。繪制吸光度與波長關(guān)系曲線，以最大吸收波長作為測(cè)定波長。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別準(zhǔn)確移取100 μg·mL-1維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL于50 mL容量瓶中，定容至刻度。以水為參比，在最大吸收波長處測(cè)定吸光度，以維生素C濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 果蔬樣品的處理

將青椒、西紅柿、黃瓜洗凈晾干，橙子和蘋果取肉，分別稱取10.00 g于研缽中，各加入1% HCl 10 mL，勻漿，轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中，稀釋至刻度，混勻。移至離心管中離心10 min，取上清液即為待測(cè)果蔬提取液。

1.2.5 果蔬樣品吸光度的測(cè)定

1.2.5.1 待測(cè)果蔬提取液

取1.0 mL待測(cè)果蔬提取液，放入盛有2 mL 10% HCl的50 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。以蒸餾水為空白，在最大吸收波長處測(cè)定其吸光度。

1.2.5.2 堿處理果蔬提取液

依次吸取1.0 mL待測(cè)果蔬提取液、10 mL蒸餾水和4 mL 1 mol·L-1NaOH溶液放入50 mL容量瓶中，搖勻；靜置20 min后加入4 mL 10% HCl，混勻，并定容至刻度。以蒸餾水為空白，在最大吸收波長處測(cè)定其吸光度。

1.2.5.3 吸光度確定

待測(cè)果蔬提取液與堿處理果蔬提取液的吸光度之差即為果蔬樣品吸光度。

1.2.6 維生素C含量的計(jì)算

測(cè)得果蔬樣品的吸光度后，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，即可計(jì)算出果蔬中維生素C的含量[mg·(100g)-1]。

式中：c為依標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得到的維生素C濃度，μg·mL-1；V1為測(cè)吸光度時(shí)吸取樣品溶液的體積，mL；V總為吸取樣品定容總體積，mL；V待測(cè)總為待測(cè)樣品總體積，mL；W總為果蔬質(zhì)量，g；100為100 g果蔬。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收曲線(圖1)

圖1 維生素C溶液的吸收曲線

由圖1可知，在波長200～300 nm范圍內(nèi)，維生素C有一最大吸收峰，最大吸收波長為243.4 nm。故本實(shí)驗(yàn)選擇243.4 nm作為測(cè)定波長。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2)

圖2 維生素C溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖2可知，在1.0～12.0 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，維生素C濃度與吸光度符合朗伯-比爾定律，呈良好的線性關(guān)系。所得線性回歸方程為A=0.0528c-0.0568，相關(guān)系數(shù)R2=0.9996。

2.3 靜置時(shí)間的選擇

由于維生素C在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定、易分解，從而影響吸光度的測(cè)定。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，果蔬提取液加堿后的靜置時(shí)間與提取量有關(guān)。以青椒為例(最大取樣量1.0 mL)，加入堿液后，考察室溫下靜置時(shí)間與吸光度之間的關(guān)系，結(jié)果見圖3。

圖3 堿處理青椒提取液靜置時(shí)間與吸光度關(guān)系

由圖3可知，在室溫靜置15～40 min，吸光度最小且穩(wěn)定。故選擇靜置時(shí)間為20 min。

2.4 維生素C的含量測(cè)定(圖4)

圖4 果蔬中維生素C的含量

由圖4可知，果蔬中維生素C的含量[mg·(100 g)-1]分別為：青椒117.1、橙子69.3、黃瓜20.5、蘋果14.9、西紅柿18.4。5種果蔬中維生素C的含量大小依次為青椒>橙子>黃瓜>西紅柿>蘋果。

3 結(jié)論

利用維生素C在紫外光區(qū)有明顯的吸收和對(duì)堿不穩(wěn)定的特性，建立了果蔬中維生素C含量的測(cè)定方法。在1.0～12.0 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，維生素C濃度與紫外吸光度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：A=0.0528c-0.0568，相關(guān)系數(shù)R2=0.9996。5種常見果蔬中維生素C的含量[mg·(100 g)-1]分別為：青椒117.1、橙子69.3、黃瓜20.5、蘋果14.9、西紅柿18.4。該方法簡(jiǎn)單易行、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，可快速測(cè)定果蔬中維生素C的含量，結(jié)果令人滿意。

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