廖志鐘

廣東羅浮山國藥股份有限公司，廣東 惠州 516133

婦月康軟膠囊是由當(dāng)歸、川芎、紅花、桃仁等8味中藥組成[1]，本品具有活血化淤、調(diào)經(jīng)止痛等功效，可用于產(chǎn)后惡露不行、少腹疼痛、盆腔炎、慢性附件炎、陰道炎，也可試用上節(jié)育環(huán)后引起的陰道流血、月經(jīng)過多。婦月康軟膠囊是經(jīng)婦月康膠囊改型而來，婦月康膠囊收載入《中藥成方制劑》第15冊，該標(biāo)準(zhǔn)無含量測定項(xiàng)。當(dāng)歸、川芎為本方主藥，且其均含阿魏酸等有效成分[2-3]，故本文在選擇該品質(zhì)量控制的定量指標(biāo)時(shí)，選擇了阿魏酸，并建立了高效液相色譜法測定其含量的控制方法。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜系統(tǒng)（Waters 515泵，Waters 2487雙波長紫外檢測器）。阿魏酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：0773-9809，供含量測定用）；婦月康軟膠囊（廣東羅浮山藥業(yè)有限公司提供，批號：070211）；水為純化水，甲醇為色譜純，醋酸等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇-1%醋酸溶液（32∶68）；檢測波長：320 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇-甲酸（100∶1）的混合溶液制成每毫升含0.02 mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研勻，取2.0 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇-甲酸（100∶1）的混合溶液100 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min（功率220 W，50 Hz），放冷后稱定其重量，用100∶1的甲醇-甲酸混合溶液補(bǔ)足減失的重量，振搖均勻，濾過，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取阿魏酸對照品7.53 mg，置于250 mL的容量瓶中，用甲醇-甲酸（100∶1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.030 08 mg/mL的溶液；精密量取上述溶液10 mL，置于100 mL的容量瓶中，用甲醇-甲酸（100∶1）稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為0.003 008 mg/mL的溶液。分別精密吸取上述兩種溶液 5、10、20 μL，注入液相色譜儀，按《中國藥典》2010 年版附錄高效液相操作方法操作，測得峰面積積分值，并以進(jìn)樣濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果得到阿魏酸回歸方程：Y=11 899 698.421 3 X-24 086.787 1（r=1.000 0，n=6）。 阿魏酸在 0.015～0.600μg 范圍內(nèi)，與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.5 陰性對照試驗(yàn)

照本品處方工藝，取除當(dāng)歸、川芎外的藥材，按本品規(guī)定的制備工藝要求，制成缺當(dāng)歸、川芎的婦月康軟膠囊內(nèi)容物，再按本文規(guī)定的供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜峰，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上（tR=6.15 min）陰性對照無干擾。見圖1。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號的樣品5份，分別按本文所述方法測定含量，結(jié)果測得樣品中阿魏酸的平均含量為0.09 mg/粒，RSD=2.22%。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取阿魏酸對照品溶液10 μL，按本文所述方法重復(fù)進(jìn)樣5次，測得峰面積的RSD=0.038%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，按本文所述方法測定，在0、4、8、12 h 分別進(jìn)樣 10 μL，平均峰面積為 862 703，RSD=0.294 0%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

圖1 阿魏酸對照品、供試品、陰性對照溶液高效液相色譜

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法，精密稱取已知含量的婦月康軟膠囊（含量為 0.090 mg/粒，平均膠囊重為 0.997 8 g）1.0 g，共 5 份，分別精密加入阿魏酸對照品溶液（濃度為0.35 mg/mL）1 mL，按本文規(guī)定的供試品溶液制備方法制備后測定。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率測定結(jié)果

2.10 樣品含量測定

依法測定樣品（批號：070211）5次。結(jié)果見表2。

3 討論

本文經(jīng)對阿魏酸對照品溶液進(jìn)行紫外全波長掃描，結(jié)果阿魏酸在320 nm處有最大吸收，結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)資料，選擇320 nm 作為測定波長[1-2]。 通過對甲醇-0.1%磷酸（30∶70）、乙腈-1%磷酸溶液（25∶75）、甲醇-1%醋酸（32∶68）、乙腈-5%冰醋酸（25∶75）、甲醇-1%醋酸（32∶68）等多種流動相進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)流動相甲醇-1%醋酸（32∶68）系統(tǒng)分離度好，柱效高[4-5]，故選擇其為本文流動相。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[6]，阿魏酸的提取方法有用索氏提取器提取、回流提取和超聲提取，經(jīng)對比，三種方法均能將阿魏酸提取完全，但超聲提取方法簡單，容易操作，重現(xiàn)性好，時(shí)間短，故選擇超聲提取30 min。文獻(xiàn)報(bào)道可采用甲醇、甲醇-甲酸、乙醇為溶媒進(jìn)行提取[7]，因此，供試品溶液的制備比較了甲醇、甲醇-甲酸（100∶1）超聲提取和2%的碳酸鈉溶液超聲提取后用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至酸性后用乙醚振搖提取，結(jié)果顯示，樣品中阿魏酸含量以甲醇-甲酸（100∶1）超聲提取最高，以甲醇超聲提取最低。阿魏酸是弱有機(jī)酸，容易在溶液中產(chǎn)生解離[8-9]，解離常數(shù)和解離平衡容易受到環(huán)境的影響，同時(shí)考慮到實(shí)際中阿魏酸制劑含量測定結(jié)果時(shí)有偏差，本文重點(diǎn)考察了對照品分別用甲醇和甲醇-甲酸 （100∶1）溶解的穩(wěn)定性和樣品的含量，結(jié)果表明直接用甲醇為溶媒制備對照品溶液，穩(wěn)定性較差，樣品含量較低，故采用甲醇-甲酸（100∶1）為溶媒制成對照品溶液。

表2 樣品含量測定結(jié)果

綜上所述，本法簡便、靈敏、準(zhǔn)確，可用于婦月康軟膠囊的質(zhì)量控制。

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