吳 畏，陳 雅，楊 征，曾 橋

(中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院藥劑科，重慶 400042)

維A酸軟膏為醫(yī)院自制制劑，可減少皮脂腺分泌，溶解毛囊角質栓，并具有抗炎和促進抗真菌藥物吸收的作用，用于治療各種類型的扁平苔蘚、毛囊角化病、痤瘡以及其他角化異常類皮膚病，療效顯著，應用廣泛[1]。目前，其含量測定大多采用較煩瑣的高效液相色譜法[2－3]，極少數采用薄層掃描法[4]。本試驗建立紫外分光光度法測定維A酸軟膏的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

玻璃點樣毛細管(華西醫(yī)科大學儀器廠);硅膠板GF254(青島海洋化工廠，批號為20100317);ZF－I型三用紫外分析儀(上海顧材電光儀器廠);分度吸量管A級(三慶玻璃儀器廠);單標線棕色容量瓶A級(北京玻璃儀器廠);Sartorius－BS 124 S型電子天平(德國賽多利斯);DU－800型分光光度儀(美國貝克曼)。維A酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為00307－200201);維A酸(東北制藥集團股份有限公司，批號為20101107);液體石蠟藥用級(吉林市吉化江城油脂化工有限責任公司，批號為100904);凡士林藥用級(包頭昆侖石化有限責任公司，批號為090714);0.1%維A酸軟膏(醫(yī)院自制制劑，批號分別為110627，110722，110818);環(huán)己烷(國藥集團化學試劑有限公司，批號為T20080521);乙醚(揚州三和化工有限公司，批號為20080304);丙酮(重慶川東化工有限公司化學試劑廠，批號為20100901);冰醋酸(重慶茂業(yè)化學試劑有限公司，批號為 20100602);甲醇(成都科龍化工試劑廠，批號為20110108)。

2 方法與結果

2.1 制備

取維A酸1 g，加液體石蠟1 mL研磨成極細糊狀，再分次加入凡士林研勻，至1000 g，得淡黃色軟膏。

2.2 鑒別[5]

取本品適量(相當于維A酸1.25 mg)，加25 mL甲醇，微溫，充分攪拌使維A酸溶解，放冷至室溫，傾出甲醇液，置水浴上蒸發(fā)至約剩5 mL，作為供試品溶液。另取維A酸對照品，加甲醇制成每1 mL含0.25 mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷－乙醚－丙酮－冰醋酸(54∶40∶4∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(254 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.3 含量測定

2.3.1 溶液制備

精密稱取維A酸對照品0.0010 g，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解后定容，再精密量取1 mL溶液用甲醇稀釋至25 mL得到質量濃度為4μg/mL的溶液，作為對照品溶液，待用。另取維A酸軟膏樣品適量(相當于維A酸1.25 mg)，加入25 mL甲醇，微溫，充分攪拌使維A酸溶解，放冷至室溫，傾出甲醇溶液，吸取1 mL，置25 mL棕色容量瓶中甲醇定容，作為供試品溶液待用。另照0.1%維A酸軟膏處方比例稱取凡士林1.4577 g，液體石蠟0.0262 g加入10 mL甲醇，微溫溶解后加入甲醇定容至50 mL，冷卻至室溫，過濾后作為空白基質溶液待用。

2.3.2 檢測波長確定

以甲醇作空白，分別將2.3.1項下3種溶液在200～500 nm波長范圍內掃描，光譜圖見圖1?？梢?，對照品溶液和供試品溶液在338 nm波長處有最大吸收，空白基質溶液在此波長處幾乎無吸收，對樣品中維A酸的含量測定基本無干擾，因此將338 nm作為檢測波長。

圖1 紫外吸收光譜圖

2.3.3 方法學考察

標準曲線繪制:精密稱定維A酸對照品0.0010 g，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解定容，再用5 mL移液管準確吸取5 mL溶液，置50 mL棕色容量瓶中用甲醇稀釋至刻度即得到質量濃度為10μg/mL的對照品貯備液。將上述貯備液用同一吸量管(10 mL)分別吸取 1.5，2.5，3.5，4.5，5.5 mL，置 10 mL 棕色容量瓶中，甲醇定容，搖勻即得到質量濃度分別為 1.5，2.5，3.5，4.5，5.5μg/mL的標準溶液。以甲醇作為空白，分別將上述標準溶液由低質量濃度到高質量濃度在338 nm波長處測定吸光度，以338 nm處吸光度(A)與質量濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程 C=6.7033 A+0.0411，r=0.9999(n=5)。結果表明，維 A 酸質量濃度在 1.5 ～5.5μg/mL范圍內與吸光度線性關系良好。

精密度試驗:精密量取同一對照品貯備液(10μg/mL)2.0 mL，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，在338 nm波長處測定吸光度。結果RSD 為 0.37%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗:稱取0.1%維A酸軟膏約0.12 g，置25 mL燒杯中，加入10 mL甲醇，微溫溶解，濾紙過濾，重復溶解過濾過程2次，合并濾液于50 mL棕色容量瓶中，甲醇定容后室溫放置，在338 nm波長處，分別于 0，1，2，3，4 h 時測定吸光度。結果的 RSD 為0.73%(n=5)，表明供試品溶液在4 h內穩(wěn)定。

加樣回收試驗:按照0.1%維A酸軟膏處方比例，精密稱取維A酸原料0.9 mg和軟膏基質(凡士林 0.4577 g、液體石蠟0.0262 g)，模擬處方于25 mL燒杯中配制成軟膏樣品。向樣品中加入10 mL甲醇，微溫溶解后用濾紙過濾，重復上述操作2次，濾液合并于50 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至50 mL，搖勻即得到維A酸質量濃度為18μg/mL的供試品溶液。精密量取1，2，3 mL供試品溶液各3份，置10 mL棕色容量瓶中，甲醇定容后在338 nm波長處測定吸光度，將吸光度代入回歸方程計算含量。結果見表1。

表1 維A酸軟膏加樣回收試驗結果(n=9)

2.3.4 樣品含量測定

取 3 個批次的樣品，精密稱定樣品 0.1501，0.1504，0.1503 g，分成3組，分別置25 mL燒杯中，加入10 mL甲醇，微溫溶解，濾紙過濾，重復上述操作，合并濾液，置50 mL棕色容量瓶中，甲醇定容，在338 nm波長處測定吸光度，結果含量分別為標示量的98.52%，99.02% ，98.12%。

3 討論

采用紫外分光光度法測定維A酸軟膏的含量，操作簡便、快速，結果準確可靠、重復性好，所用儀器普及。與高效液相色譜法相比，雖不及其選擇性和準確性高，但操作簡便、快速，不需特殊試劑，具有省時、省力、經濟實效等優(yōu)點，適用于醫(yī)院制劑的快速檢驗。

維A酸結構為全反式維A酸，有5個共軛雙鍵，易氧化或者光解，因此在整個操作過程取樣要快，且應該嚴格避光。維A酸對光不穩(wěn)定，在不避光條件下，1 h含量下降13%，若置棕色瓶中則為3.5%，置棕色瓶中且外罩黑布時6 h內穩(wěn)定[6－7]。本試驗中經考察也發(fā)現(xiàn)，維A酸軟膏的甲醇溶液置棕色瓶中室溫下放置，4 h內吸光度值基本無變化，不影響其測定。

維A酸在甲醇、氯仿中微溶，在水中幾乎不溶，在異丙醇中溶解較好。因此在配制供試品溶液時，可以先用異丙醇溶解后再用甲醇稀釋至定量，或用甲醇溶解時加用超聲波加速溶解。

[1]魯建云，秦桂芝，李 鎖，等.異維A酸紅霉素凝膠治療痤瘡的療效觀察[J].中國藥房，2011，22(2):155－157.

[2]程輝躍.高效液相色譜法同時測定維A酸霜中兩組分的含量[J].中國藥房，2004，15(5):306－307.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:893.

[4]姜義娜，于香安，于 麗.薄層掃描法測定復方軟膏中維A酸的含量[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2003，23(2):84－86.

[5]中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部.中國人民解放軍醫(yī)療機構制劑規(guī)范(2002年版)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社，2002:166.

[6]盛俊泰，譚會潔，魏開芳.HPLC法測定維A酸乳膏中維A酸及異維A酸的含量[J].食品與藥品，2005，7(7A):55－57.

[7]李會輕，龐 靖.醋酸去炎舒松維甲酸乳膏的質量標準研究[J].中國藥業(yè)，2007，16(22):28－29.