韓寶林 李立芳 武 陽

肺癌是威脅人類健康最主要的惡性腫瘤之一，病理類型中非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占絕大部分。肺癌的發(fā)生發(fā)展涉及多因素的作用、多步驟的形成和多基因的參與，是綜合作用的結(jié)果。在這個多階段的演進(jìn)過程中，細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控異常起著重要的作用。Bax、Livin和Survivin是3個重要的細(xì)胞凋亡調(diào)控因子。它們在NSCLC組織中存在不同程度的異常表達(dá)，但尚少見有關(guān)聯(lián)合研究三者在NSCLC組織中的表達(dá)及三者之間相互關(guān)系的報道。本研究通過檢測NSCLC組織及正常肺組織中Bax、Livin和Sur?vivin蛋白的表達(dá)情況，探討其相互之間以及與臨床病理因素的關(guān)系，為臨床上NSCLC的診治提供進(jìn)一步的理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)抽取2006年9月—2008年5月NSCLC切除組織石蠟標(biāo)本40例為NSCLC組，經(jīng)有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師復(fù)習(xí)閱片后重新制備切片。所有患者術(shù)前均未行放、化療及其他抗腫瘤治療。其中男36例，女4例，中位年齡62歲（38~81歲），吸煙者30例。中心型14例，周圍型26例；腫瘤直徑≤3 cm者11例，>3 cm者29例；鱗癌29例，腺癌11例；中、高分化癌28例，低分化12例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例。TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期27例，Ⅲ、Ⅳ期13例。正常肺組織石蠟標(biāo)本10例作為對照組。

1.2 方法 采用免疫組化非生物素二步法（PV），光鏡下觀察結(jié)果，用已知陽性組織切片做陽性對照，用PBS替代一抗做空白對照。結(jié)果判定參考Falleni等[1]的半定量計數(shù)方法，根據(jù)腫瘤組織細(xì)胞的染色率和染色強度進(jìn)行判定。選10個高倍視野，計數(shù)至少500個腫瘤細(xì)胞，取其平均值計算陽性細(xì)胞百分率。腫瘤細(xì)胞陽性率≤5%為0分，6%~25%為1分，26%~50%為2分，51%~75%為3分，>75%為4分。根據(jù)染色強度分為4級，0分：無染色；1分：淡黃色；2分：黃色；3分：棕黃色或棕褐色。陽性細(xì)胞率與染色強度得分相乘為每一例積分。規(guī)定0~1分為陰性（-），積分≥2為陽性，其中2~4分為弱陽性（+），5~8分為中度陽性（++），9~12分為強陽性（+++）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件對結(jié)果進(jìn)行分析，計數(shù)資料組間比較采用卡方檢驗，相關(guān)性采用校正卡方檢驗、Spearman等級相關(guān)分析，以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 Bax、Livin和Survivin在2組中的表達(dá) 對照組與NSCLC組中Bax、Livin和Survivin陽性表達(dá)率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

Table 1 The positive expression of Bax,Livin and Survivin in two groups表1 2組Bax、Livin和Survivin的陽性表達(dá)情況 例（%）

2.2 Bax、Livin和Survivin蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系 有無腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不同臨床TNM分期Bax、Livin的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），不同腫瘤病理分化程度Survivin的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）?；颊卟煌男詣e、年齡、吸煙史、腫瘤部位、大小的Bax、Livin和Survivin的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3 Bax、Livin和Survivin在NSCLC組織中的相關(guān)性 NSCLC中Bax和Livin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.429 4，P<0.05），Bax和Survivin的表達(dá)，Livin和Survivin的表達(dá)均無相關(guān)性（rs分別為-0.050 6，0.104 8，均P>0.05）。

Table 2 Comparison of expression of Bax,Livin and Survivin and clinicopathological factors in patients with non-small cell lung cancer表2 Bax、Livin和Survivin蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系 例（%）

3 討論

肺癌的發(fā)生與癌基因突變、細(xì)胞異常增殖和凋亡調(diào)控機(jī)制失常等有關(guān)，機(jī)體細(xì)胞凋亡受一系列因子的正性或負(fù)性調(diào)控，其中較為明確的有Bcl-2家族（如Bax、Bcl-2）、IAP家族（如Livin、Survivin）和Caspases家族（Caspases-3、7、9）等，研究Bax、Livin和Survivin在NSCLC中的表達(dá)對其診治有著重要的意義。

Bax是bcl-2家族中重要一員，為凋亡促進(jìn)基因，Bax通過其自身形成Bax同二聚體和（或）與Bcl-2形成Bax-Bcl-2異二聚體，抑制Bcl-2功能，加速細(xì)胞死亡[2]。Bax的異常表達(dá)與NSCLC及其他多種腫瘤相關(guān)，但其在NSCLC中的表達(dá)各家報道結(jié)果并不一致。王鴻程等[3]報道Bax蛋白在肺良性病變和NSCLC中表達(dá)差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。佟旭等[4]則報道Bax在NSCLC組織中低表達(dá)，與其在正常肺組織中的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Wang等[5]也發(fā)現(xiàn)NSCLC組織Bax蛋白的表達(dá)明顯低于正常肺組織。本研究正常肺組織及NSCLC組織中Bax的陽性表達(dá)率高于正常肺組織，與上述文獻(xiàn)結(jié)論一致。Bax在NSCLC中表達(dá)下調(diào)提示其可能在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用，可用于NSCLC的檢測。本組研究還發(fā)現(xiàn)有無腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同臨床TNM分期Bax的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示Bax的表達(dá)對評估NSCLC的預(yù)后也有一定意義，支持Bax表達(dá)的下降，腫瘤細(xì)胞的凋亡抑制作用減弱，侵襲作用增強的觀點。

Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)的作用最強的凋亡抑制因子，它可以通過有絲分裂促進(jìn)細(xì)胞增殖,抑制細(xì)胞凋亡。研究表明，Sur?vivin在NSCLC組織高表達(dá)，而在癌旁組織或正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，提示該基因?qū)SCLC的發(fā)生發(fā)展起重要作用，可用于NSCLC的診斷[6-7]。Survivin在正常組織中低表達(dá)或不表達(dá)的特性也有望使其成為肺癌基因治療的新靶點。Sur?vivin的表達(dá)還對NSCLC預(yù)后的評估也有一定的價值[8-11]。石敏等[10]研究發(fā)現(xiàn)Survivin在Ⅲ~Ⅳ期肺癌組織中表達(dá)率顯著高于其在Ⅰ~Ⅱ期肺癌組織中的表達(dá)。朱叢中等[11]研究發(fā)現(xiàn)Survivin的表達(dá)與組織學(xué)分級、臨床分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究結(jié)果中正常肺組織及NSCLC組織中Survivin的陽性表達(dá)率分別為0和50.00%，中高分化與低分化患者的Survivin表達(dá)率分別為39.29%、75.00%，也提示Survivin具有評估預(yù)后的潛在價值。

Livin是與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的凋亡抑制蛋白家族中一個較新發(fā)現(xiàn)的成員，在多種腫瘤中高表達(dá)，而相應(yīng)的正常組織中卻沒有或者僅有極低水平的表達(dá)[12-13]。本研究中Livin在正常肺組織及NSCLC組織中的表達(dá)率分別為10.00%和65.00%，表明Livin高表達(dá)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，由于其表達(dá)的特異性可用于NSCLC的診斷并有望成為NSCLC治療的新靶點。此外本組研究結(jié)果還提示Livin在NSCLC組織中表達(dá)陽性率隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床TNM分期的進(jìn)展而升高，提示其可能對NSCLC的預(yù)后評估有一定價值。

本組研究中Bax和Livin在NSCLC組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，機(jī)制可能為：Bax和Livin在細(xì)胞凋亡調(diào)控過程中存在某些共同途徑，如Livin可與Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9結(jié)合，而Bax可能通過Caspase-3這個作用點間接對抗Livin的抗凋亡作用；另外是否存在Bax直接作用于Livin抑制其抗凋亡作用的途徑，目前尚少見相關(guān)報道。Survivin與Livin、Bax的表達(dá)均無相關(guān)性，提示它們可能存在不同作用途徑，具體機(jī)制需進(jìn)一步深入研究。Bax和Livin在NSCLC組織中的表達(dá)的負(fù)相關(guān)性為研究者今后開展聯(lián)合檢測用于NSCLC的診斷和評估預(yù)后提供了可能。Bax、Livin和Survivin在NSCLC的診斷和預(yù)后評估中的價值仍有待進(jìn)一步深入研究。

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