呂雪梅 邱 毅 王蘇梅 劉錦云 董云玲 魏 斌

山東省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所·山東省優(yōu)生技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南 250002

生殖健康是目前比較熱門的話題，有效的避孕是生殖健康中的重要一部分。避孕方法分為男用避孕措施和女用避孕措施，男用的避孕措施中采用比較多的只有避孕套工具避孕和輸精管結(jié)扎，目前采用比較多的是女用避孕措施約占了85%左右。這些方法雖然在控制人口增長方面起到一定的積極作用，但都存在不同程度的不良反應(yīng)。尤其是不可逆的絕育手術(shù)約占目前現(xiàn)有避孕方法中的50%以上，由于存在一定的不良反應(yīng)和并發(fā)癥，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們逐漸增長的生殖健康需要，人們越來越期待一種新型的避孕節(jié)育方法。所以研究一種既有殺精避孕作用又具有抗性傳播疾病病原體的陰道制劑是十分必要的。課題組于2011年5月—2012年2月根據(jù)中醫(yī)藥的組方理論，研究桔梗與五倍子組方后體外的殺精作用效力，以期研究一種陰道殺精劑避孕，使之具有使用簡便、安全、有效，同時(shí)具有抗微生物及某些性傳播疾病的作用。

1 資料與方法

1.1 藥材制備

中草藥桔梗、五倍子粉碎。分別稱取上述兩種粉碎干藥材各1 000 mg，分別加入0.9%生理鹽水10 mL置于Thermo Cell恒溫金屬浴中（100℃）40～60 min，過濾，制成提取液，并按桔梗：五倍子2∶1的比例混合為實(shí)驗(yàn)藥液，并測定其pH值。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

Thermo Cell恒溫金屬浴，帶恒溫裝置的倒置顯微鏡，恒溫水浴箱，pH計(jì)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，微量加樣槍，取精杯（COOK）。

1.3 精液標(biāo)本

課題組于2011年5月—2012年2月選擇16例年齡23～39歲健康男性志愿者，簽署知情同意書，明確告知注意事項(xiàng)，使之禁欲3～7 d，采用手淫法取精液。精液入選標(biāo)準(zhǔn)：精液量2～5 mL，液化時(shí)間 30 min，pH 值 7.2～7.6，精子計(jì)數(shù)≥60×106/mL，精子活動(dòng)率>70%，其中a+b級(jí)>50%，精子畸形率<25%。其中有6例志愿者精液未達(dá)到入選標(biāo)準(zhǔn)，將之排除。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)方法按照世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的Sander-Cramer方法和標(biāo)準(zhǔn)[1]。將精液0.5 mL分別加入到0.5 mL桔梗五倍子提取液中，立即混勻。使用微量加樣槍迅速移取約10微升混合液于載玻片上，立刻置于倒置顯微鏡，于37℃恒溫下觀察精子的制動(dòng)情況，連續(xù)觀察10個(gè)高倍視野，以精子全部失去活動(dòng)能力為觀察終點(diǎn)。時(shí)間的記錄標(biāo)準(zhǔn)：記錄從精子接觸藥物時(shí)起至全部失活的時(shí)間為殺精子時(shí)間。每個(gè)標(biāo)本，每次實(shí)驗(yàn)反復(fù)進(jìn)行2次。體外殺精子效果分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):瞬間殺精子效力為從精子接觸藥物起至30 s內(nèi)全部失活，較強(qiáng)的殺精子效力為 0.5～3 min，微弱的殺精子效力為3～5 min，＞5 min為無殺精效力。同時(shí)與NS陰性對(duì)照和NP-9陽性對(duì)照組(濃度約為0.75 mg/mL，與臨床中使用體內(nèi)濃度大致相當(dāng))進(jìn)行比較。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SSPS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 桔梗五倍子藥液的pH值

桔梗五倍子藥液的pH值為6.2，為實(shí)驗(yàn)藥液1，與精液1:1混合后的pH值為6.9，調(diào)整桔梗五倍子藥液的pH值至7.4為實(shí)驗(yàn)藥液2，重復(fù)進(jìn)行殺精實(shí)驗(yàn)。

2.2 桔梗五倍子藥液對(duì)精子的體外殺滅效力結(jié)果

桔梗五倍子藥液殺精時(shí)間與NP-9殺精時(shí)間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），并且桔梗五倍子藥液殺精時(shí)間＜30 s，說明桔梗五倍子藥液具有瞬間殺精效果。調(diào)整pH值前后桔梗五倍子藥液殺精效果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），調(diào)整pH值后桔梗五倍子藥液殺精時(shí)間也＜30 s，說明調(diào)整PH值前后桔梗五倍子藥液殺精效果無顯著差異。調(diào)整pH值后桔梗五倍子藥液殺精時(shí)間與NP-9比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明殺精時(shí)間亦＜30 s，說明調(diào)整pH值后桔梗五倍子藥液仍具有殺精效果，生理鹽水組無殺精作用。見表1。

3 討論

桔梗五倍子提取液對(duì)人精有體外殺精的作用，雖然調(diào)整pH值后桔梗五倍子藥液殺精時(shí)間與NP-9比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明殺精時(shí)間亦＜30 s，表明調(diào)整pH值后桔梗五倍子藥液仍具有瞬間殺精效果，這可能與實(shí)驗(yàn)標(biāo)本偏少有一定的關(guān)系，在以后的研究中應(yīng)加大標(biāo)本量，做進(jìn)一步研究。陰道殺精子劑避孕具有廣泛的發(fā)展和使用前景，由于其使用簡便、安全、有效，同時(shí)也具有抗微生物及某些性傳播疾病的作用，其市場潛力也期待被開發(fā)。世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署等國際組織已將由婦女主動(dòng)使用的殺微生物避孕制劑作為全球優(yōu)先發(fā)展項(xiàng)目。20世紀(jì)90年代國內(nèi)開始了早期的體外殺精的使用和相關(guān)研究，早期主要是使用進(jìn)口藥，如壬苯醇醚（NP-9）、孟苯醇醚、辛苯醇醚、十二醇單月桂酸酯等，后來國內(nèi)又有較多品種上市，由于藥物的主要成分是西藥，在臨床使用中發(fā)現(xiàn)，這些藥物往往會(huì)對(duì)陰道粘膜具有刺激性，并經(jīng)過人體吸收后，容易對(duì)肝臟產(chǎn)生一定的損害。所以長期以來，這些體外殺精子藥物均未成為避孕的首選措施。由于其使用的不良反應(yīng)和并發(fā)癥，使得這些體外殺精藥物在臨床上也未能廣泛的應(yīng)用。加之目前性傳播疾病發(fā)病率不斷上升，有關(guān)性傳播疾病發(fā)病率預(yù)防措施的研究越來越引起各國學(xué)者的關(guān)注[2]。但是，近年來對(duì)壬苯醇醚的對(duì)照研究已經(jīng)表明，此藥不僅不能預(yù)防主要性傳染疾病和艾滋病毒感染，且長期使用反而還會(huì)提高經(jīng)由性交所致傳染疾病的風(fēng)險(xiǎn)[3-4]，所以臨床需要一種既能體外殺精又能有抗微生物及某些性傳播疾病的作用的陰道制劑。

該研究采用傳統(tǒng)的中藥桔梗和五倍子。桔梗味苦、辛，性微溫，入肺經(jīng)，功效祛痰止咳，有宣肺排膿功效。其嫩莖葉和根均可供食用。盛產(chǎn)于中國東北部地區(qū)，是朝鮮族的特色菜。五倍子味酸、澀，性寒，歸肺、大腸、腎經(jīng)，功效斂肺止汗、澀腸固精、解毒止血。同時(shí)體外試驗(yàn)也表明：五倍子煎劑對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、乙型溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、痢疾桿菌、炭疽桿菌、大腸桿菌、白喉?xiàng)U菌、傷寒和副傷寒桿菌等均有明顯的抑菌和殺菌作用。經(jīng)用乙醚提出其鞣酸后的五倍子液仍有抑菌作用無明顯的毒副作用。目前桔梗和五倍子的體外殺精效果都有相關(guān)的報(bào)道[5-6]，但桔梗無明顯的抑菌和殺菌作用，五倍子具有一定的殺精及抑菌作用，單獨(dú)作為體外殺精制劑存在一定的不足。桔梗五倍子組方后未見相關(guān)研究。該研究發(fā)現(xiàn)組方后，殺精效果明顯，抑菌作用有待進(jìn)一步研究，在以后的研究中會(huì)進(jìn)一步探索。純中藥制劑可以盡可能的減少體外殺精對(duì)女性身體健康的影響，從中醫(yī)藥角度入手開發(fā)或改良的體外避孕殺菌劑，有可能是達(dá)到此目的的一個(gè)途徑和方法，可能會(huì)具有較大的市場前景?？傊酃Ｎ灞蹲泳哂畜w外殺精避孕作用且毒性輕微，可作為中藥體外殺精子劑進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用，以期為避孕節(jié)育提供新的藥具。

表1 實(shí)驗(yàn)藥液殺精時(shí)間及pH值

[1]WHO.人類精液及精子-宮頸黏液相互作用實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊[M].4版,北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:51.

[2]伏曉敏,勵(lì)千里,金愛華.氯已定醋酸鹽的體外殺精效果及抑菌作用的研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2003,20(2):97.

[3]劉宏本.具有殺精子作用的殺微生物藥物研究進(jìn)展[J].上海醫(yī)藥,2003,24(2):79.

[4]RoddyRE,ZekengL,RyanKA,et al.Effectof nonoxynol-9Gelon urogentialgonorrheaand chlamydial infection:Arandomized controltrial[J].JAMA,2002,287(9):1117.

[5]邱毅,王磊光,宋新強(qiáng).中草藥桔梗提取液體外殺精子實(shí)驗(yàn)研究[J].中國計(jì)劃生育學(xué)雜志,2008,17(4):222-224.

[6]彭建平,張杰,羅鵬程.五倍子鞣酸的體外殺精和抑菌作用研究[J].中國藥房,2007,18(30):2337-2339.