安東建 柴 琴 湯 效 譚小浪 王偉明

長(zhǎng)沙市中心醫(yī)院腫瘤科，湖南長(zhǎng)沙 410004

癌癥是中國(guó)成年人死亡的主要原因[1]。目前，手術(shù)、化療、放療等抗癌手段未在療效和生存獲益方面取得突破性進(jìn)展。然而，隨著對(duì)腫瘤發(fā)生機(jī)制的深入了解和現(xiàn)代生物技術(shù)的飛速發(fā)展，自體細(xì)胞免疫治療已成為癌癥治療的第4種重要手段，在腫瘤多學(xué)科綜合治療中起著不可或缺的作用[2]。DC/CIK細(xì)胞是與DC(Dendritic Cell，DC)共培養(yǎng)的 CIK細(xì)胞 (Cytokine Induced Killer cell，CIK)。DC/CIK細(xì)胞治療是目前臨床應(yīng)用較多的自體細(xì)胞免疫療法。作為一種新的治療手段，對(duì)其不良反應(yīng)的研究較少，特別對(duì)腎功能的影響罕有報(bào)道。該文總結(jié)該科2010年1月—2012年5月收集152例接受DC/CIK細(xì)胞治療的癌癥患者的腎功能資料，探討DC/CIK細(xì)胞治療對(duì)腎功能的影響，為臨床安全使用提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診的晚期癌癥152例，男97例,女55例。年齡21～83歲,中位年齡60歲。肺癌63例，肝癌14例，結(jié)腸癌12例，直腸癌8例，乳腺癌9例，胰腺癌5例，卵巢癌5例，鼻咽癌5例，宮頸癌4例，胃癌4例，食管癌3例，腎癌3例，淋巴瘤3例，喉癌2例，惡性黑色素瘤2例，胸腺癌2例，膽囊癌2例，輸卵管癌1例，腹膜間皮瘤1例，腦膠質(zhì)瘤1例，上頜竇癌1例，外耳道癌1例，膀胱癌1例。

1.2 方法

1.2.1 DC/CIK細(xì)胞培養(yǎng)與回輸 抽取患者外周靜脈血100 mL。隨后，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)一步分離單個(gè)核細(xì)胞，用生理鹽水洗滌3次,再將細(xì)胞分別進(jìn)行DC及CIK細(xì)胞的培養(yǎng)。DC細(xì)胞在d 0天用含IL-4、TNF等細(xì)胞因子的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，隔天需半量換液，培養(yǎng)至第9天細(xì)胞成熟，再混入CIK細(xì)胞培養(yǎng)中，共同培養(yǎng)。

CIK細(xì)胞第0 d加入含IFN-γ、抗CD3單抗等的無(wú)血清生長(zhǎng)培養(yǎng)基。24 h后加入含人重組IL-1、人重組IL-2等無(wú)血清生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 每2～3 d更換培養(yǎng)基1次,補(bǔ)加IL-2。培養(yǎng)至第9天時(shí)加入DC細(xì)胞共同培養(yǎng)。第11天時(shí)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌等微生物培養(yǎng)檢測(cè)。第14天時(shí)收集DC/CIK細(xì)胞,將收集培養(yǎng)的細(xì)胞用無(wú)菌生理鹽水洗滌3次,細(xì)胞分成6袋，每袋分別加入5%人血白蛋白配成150 mL含細(xì)胞的懸液進(jìn)行靜脈回輸。每天回輸1次,每次回輸細(xì)胞數(shù)量在1.5～2×109,連輸6次為1個(gè)療程,細(xì)胞總數(shù)在9～12×109之間。每個(gè)病人完成2個(gè)療程。

1.2.2 腎功能檢查 第1個(gè)療程DC/CIK細(xì)胞回輸之前，常規(guī)抽血做腎功能檢查。第2個(gè)療程DC/CIK細(xì)胞回輸之后，再抽血做腎功能檢查。依據(jù)前后2次腎功能檢查結(jié)果，進(jìn)行對(duì)比分析和評(píng)估。腎功能檢查項(xiàng)目為：尿素（正常值1.7～8.3 mmol/L）、肌酐(正常值 44～97 μmol/L）、尿酸(正常值 142～420 μmol/L）。

1.2.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 腎功能檢查結(jié)果按WHO抗癌藥物毒性反應(yīng)分度標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行分級(jí)和評(píng)估。

2 結(jié)果

152 例患者在接受DC/CIK細(xì)胞治療前，腎功能正常。在完成2個(gè)療程的DC/CIK細(xì)胞治療后，有12例出現(xiàn)腎功能異常，發(fā)生率為7.9%，如表1所示。

表1 腎臟毒性反應(yīng)

3 討論

DC細(xì)胞是目前已知的功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞，具有極強(qiáng)的刺激活化初始T淋巴細(xì)胞能力，介導(dǎo)Thl型細(xì)胞免疫，從而發(fā)揮對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用[3-4]。CIK細(xì)胞是將人外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子共同培養(yǎng)一段時(shí)間后獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞[5],具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和非主要組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性殺瘤的特點(diǎn)[6-7]。DC/CIK細(xì)胞是與DC共培養(yǎng)的CIK細(xì)胞，具有增殖速度快、抗腫瘤作用強(qiáng)大、殺瘤譜廣、安全性較高的特性[8-9]。

腎臟的基本功能是排泄體內(nèi)的代謝廢物。隨著人口老化的加劇，腎臟急性損害的發(fā)生逐漸增多[10]。腎小球是腎臟的基本功能單位，具有濾過(guò)血漿形成原尿，輔助排泄代謝產(chǎn)物（例如含氮類廢物尿素、肌酸、肌酐、尿酸、各種胺類等）及維持體液酸堿平衡等作用，腎小球?yàn)V過(guò)功能是否正常對(duì)預(yù)防腎臟疾病至關(guān)重要[11]。

DC/CIK細(xì)胞治療腫瘤有一定療效，臨床應(yīng)用已有多年。然而，對(duì)其毒副作用的研究較少，如何確保臨床安全使用，還應(yīng)開(kāi)展進(jìn)一步的研究工作。該研究發(fā)現(xiàn)，單純使用DC/CIK細(xì)胞治療腫瘤，大約7.9%的患者發(fā)生急性腎功能損害，雖然絕大多數(shù)為I度損害，患者無(wú)明顯的臨床表現(xiàn)，經(jīng)對(duì)癥處理后，本組也無(wú)一例發(fā)生腎功能衰竭。但是，如果不給予高度重視，不能早期發(fā)現(xiàn)，早期處理，仍有可能導(dǎo)致嚴(yán)重后果。本組病例發(fā)生急性腎功能損害的原因比較復(fù)雜，可能與以下因素有關(guān)：①本組病例均為晚期癌癥患者，一般狀況較差，每日進(jìn)食量和飲水相對(duì)較少。②年齡偏大，多數(shù)在60歲以上。③DC/CIK細(xì)胞輸入人體后，短時(shí)間內(nèi)大量殺傷腫瘤細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞釋放大量核酸，導(dǎo)致高尿酸血癥。尿酸沉積于腎小管，引起急性腎功能損害[12]。④部分患者會(huì)出現(xiàn)癌性惡病質(zhì)，其發(fā)生的重要機(jī)制之一就是蛋白質(zhì)代謝異常，主要表現(xiàn)為骨骼肌蛋白消耗增加、瘦組織群下降、內(nèi)臟蛋白消耗，導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成減少而分解增加，血清尿素、血肌酐升高，形成氮質(zhì)血癥，損害腎功能[13-14]。⑤DC/CIK細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)，需加入一定量的白細(xì)胞介素-2。文獻(xiàn)報(bào)道，白細(xì)胞介素-2可引起如少尿、低血壓、血肌酐升高等毒性反應(yīng)[15]。

[1]Jiang He,Dongfeng Gu,Xigui Wu,et al.Major causes of death among men and women in China[J].The New England journal of Medicine,2005,353(11):1123-1134.

[2]Porter DL,Hexner EO,Cooley S,et al.Cellular adoptive immunotherapy after autologous and allogeneic hematopoietic stem cell transplantation[J].Cancer Treat Res,2009,144(2):497-537.

[3]KleindienstP.WietheC，LutzMB，eta1.SimultaneousinductionofCD4Tcell tolerance and CD8 T cell immunity by semimature dendritic cells[J]．J lmmunol，2005（174）:3941-3947．

[4]Dhodapkar MV，Steinman RM．Antigen-bearing immature dendritic cells induce peptide-specific CD8(+)regulatory T cells in vivo in humans[J]．Blood，2002（100）：144-177．

[5]Schmidt-Wolf IG,Lef terova P,Mehta BA,et al.Phenotypic characterization and identification of effect or cells involved in tumor cell recognition of cytokine-induced killer cells[J].Exp Hematol,1993,21(13):1673-1679.

[6]Nagaraj S,Ziske C,Schmidt-Wolf IG.H uman cytokine-induced killer cells have enhanced in vitro cytolytic activity via non-viral interleukin-2 gene transfer[J].Genet Vaccines Ther,2004,2(1):12-16.

[7]Verneris MR,Kornacker V,M ailander V,et al.Resistance of ex vivo expanded CD3+CD56+T cells to Fast-mediated apoptosis[J].Cancer Immunol Immunother,2000（49）:335-3451

[8]Choudhury A，Palma M，Mellstedt H．The future of cancer vaccines for non-small cell lung cancer:Ongoing trials[J].Clin Lung Cancer，2008（9）：37-44．

[9]Tuyaerts S，Van Meirvenne S，Bonehill A，et al．Expression of human GITRL on myeloid dendritic cells enhances their immunostimulatory function but does not abrogate the suppressive effect of CD4+CD25+regulatory T cells[J].J Leuko Bio，2007，82(1):93-105．

[10]Xue J L，Daniels F，Star R A，et al．Incidence and mortality of acute renal failure in medicare beneficiaries，1992 to 2001[J].J Am Soc Nephrol，2006（17）:1135-1142．

[11]Quaggin SE，Kreidberg JA．Development of the renal glomerulus:good neighbors and good fences[J].Development，2008，135(4):609－620．

[12]Montesinos P,Martin G,Perez-Sirbent M.Identificaion of risk factors for tumor lysissyn-drome in patients with acute myeloid leukemia:Development of a prognostic score[J].Blood,2005（106）:1843.

[13]吳國(guó)豪.惡性腫瘤病人惡病質(zhì)發(fā)生機(jī)制及營(yíng)養(yǎng)治療[J].外科理論與實(shí)踐，2012，17（2）：98-101.

[14]金惠銘，王建枝.病理生理學(xué)[M].7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：248-257.

[15]Romo de Vivar Chavez A,de Vera ME,Liang X,et al.The biology of interleukin-2 efficacy in the treatment of patients with renal cell carcinoma[J].Med Oncol,2009,26(1):3-12.