文│潘紅梅 張鳳鳴 張利娟 張亮 王娟（重慶市畜牧科學院）

溫清華 劉勇（西南大學榮昌校區(qū)）

重慶板角山羊，屬優(yōu)良的皮肉兼用型地方品種，具有適應性強、抗病力強，體型大、生長快，產肉多、膻味輕，皮張面積大、質量好等特點。發(fā)展板角山羊養(yǎng)殖業(yè)是庫區(qū)發(fā)展草食牲畜，促進農民增收的重要途徑。但最新的品種資源調查顯示，該品種種群數量正急劇下降，因此，采用生物技術手段，加強選種選配、提純復壯、快速擴繁是當前急需解決的問題。本試驗用加拿大和寧波生產的垂體促卵泡素（FSH）對重慶板角山羊進行超數排卵效果研究。

一、材料與方法

1.試驗材料。試驗動物由重慶市巫溪縣板角山羊保種區(qū)內購回，共22只成年板角母山羊和4只成年板角公山羊，全部舍養(yǎng)，精粗飼料搭配飼喂，體況良好、無疾病，定期驅蟲與注射疫苗。山羊購入后，用氯前列烯醇（PG）進行流產處理，并加強補飼和管理，使其盡快適應新的環(huán)境和飼養(yǎng)管理，膘情達到中等以上。選擇健康、發(fā)育正常、繁殖機能正常、體況較好、膘情中上等的母羊作受試動物。整個試驗于山羊發(fā)情季節(jié)（9～12月）進行。主要試劑包括FSH、FOLLTROPIN-V，加拿大；FSH、PG、促排卵素3號（LRH-A3），寧波第二激素廠；CIDR，澳大利亞EAZIBREED。

2.試驗方法。

（1）試驗羊的發(fā)情周期觀察。超數排卵（以下簡稱超排）處理前，對供體羊群連續(xù)觀察兩個以上完整發(fā)情周期，準確記錄每只羊發(fā)情周期起止日期及周期天數。

（2）超排處理方案。將CIDR植入供體羊陰道內，在發(fā)情的第15天，注射FSH進行超排，連續(xù)4天，上下午各注射1次，共8次。加拿大激素總劑量為8.8毫克（第一天1.45毫克，第二天1.95毫克，第三天2.45毫克，第四天2.95毫克）；寧波激素總劑量為300國際單位（第一天45國際單位，第二天40國際單位，第三天35國際單位，第四天30國際單位）。分別于最后1次注射的同時肌注PG 0.1毫克/頭，并取出CIDR，于第2天開始觀察發(fā)情，發(fā)情后立即配種，同時靜脈注射LRH-A3 100國際單位，12小時后補配1次。配種后第6天手術子宮角沖胚利用，并統(tǒng)計超排結果。之后，再依據上述試驗的結果，采用寧波FSH對不同劑量FSH的超排效果進行研究。

（3）試情及配種。最后一次注射FSH后，用試情公羊檢測供體羊發(fā)情情況，此后，第2天早晨開始給供受體羊每2小時試情一次。母羊接受爬跨為發(fā)情時間，發(fā)情后2～3小時靜脈注射LRH-A3 100國際單位，15～20小時開始配種，配種次數1～2次。

（4）手術及胚胎收集。于配種后的6～7天，將受試羊用846注射液1～1.5毫升肌肉注射全身麻醉后采用手術法進行胚胎采集，由子宮角注入30毫升預熱的沖卵液，在輸卵管傘部一端用集胚杯收集胚胎。供體發(fā)情后50～55小時，通過手術方法，在輸卵管回收受精卵。即于乳腺根部兩乳靜脈之間將皮膚切開，露出并切開腹中線，用兩指將子宮及卵巢拉出體外，檢查黃體數及卵泡數，把沖卵管一端經輸卵管傘部插入，另一端接集卵皿，然后將套管針經富管結合部刺入并注射5毫升沖卵液（DPBS+10%發(fā)情山羊血清）。

（5）胚胎質量評價。根據胚胎形態(tài)特征分為A、B、C、D四個等級。A級胚胎：透明帶體積充實、飽滿，卵裂球緊密，大小色澤充實度均勻一致，沒有缺陷的標準胚胎；B級胚胎：其結構形態(tài)基本符合一級標準，僅個別卵裂球有增大現象；C級胚胎：胚胎結構和卵裂球大小色澤致密度基本正常，僅個別卵裂球凸于細胞團表面；D級胚胎：胚胎大小色澤致密度不正常，卵裂球凸于細胞團表面較多，或者是根本沒有受精的卵母細胞或退化變性胚胎。A、B級胚胎為可移植用胚胎。在體視鏡下用吸卵管將胚胎轉入凹皿，根據形態(tài)分成可移植用與不可移植用胚胎，將可移植用胚胎置入38.9℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中供移植或冷凍保存。

表1 不同FSH劑量對超排效果的影響

3.統(tǒng)計方法。t檢驗對數據進行顯著分析。

二、試驗結果與分析

1.不同來源FSH對板角山羊超排效果的影響。加拿大、寧波生產的FSH超排結果表明，兩組羊的平均黃體數、可用胚胎數差異均不顯著（P＞0.05）。加拿大組和寧波組平均每只羊獲得可用胚胎分別為（11.88±6.83）枚和（12.00±6.77）枚。

2.不同FSH劑量對板角山羊超排效果的影響。

用三種不同的FSH劑量（280國際單位、300國際單位、320國際單位）對板角山羊進行超排處理，結果見表1。

三、討論

1.不同來源FSH對板角山羊超排效果的影響。

關于不同來源的FSH對超排效果的影響，不同的研究者獲得的超排效果差異很大。本研究發(fā)現，加拿大產FSH和寧波產FSH超排效果類似，平均黃體數、回收胚胎總數以及可用胚胎數差異均不顯著（P＞0.05）；一定劑量的國產（寧波）激素可以獲得與進口激素相同的超排效果，但用進口FSH超排時，未排卵泡較少。

從成本的角度來看，進口FSH雖能獲得相對穩(wěn)定的超排效果，但其昂貴的價格令規(guī)模生產者們望而卻步；國產激素的價格優(yōu)勢不言而喻，但其超排效果不穩(wěn)定，常因廠家和批次的不同而有所差異。因此，在進行大規(guī)模的胚胎移植前必須做預試。

2.不同FSH劑量對板角山羊超排效果的影響。

李擁軍等（2008）認為對山羊進行超排處理時，外源FSH可促進卵巢中卵泡的發(fā)育、成熟，但到一定劑量后，超排效果并不隨FSH劑量的增加而增加。如果FSH使用劑量過大，卵巢中發(fā)育的卵泡和排卵數量過多，會導致卵巢體積異常增大和卵子接受障礙，經輸卵管傘接受到的卵子數量卻很有限。同時，多數黃體分泌的孕酮量增大，可能使運行到輸卵管的精子和卵子發(fā)生變性，導致回收的胚胎退化或未受精卵的比例增高。

本試驗參照李擁軍等對超排所用的劑量分組，獲得與李擁軍試驗組II相似的結果，即280國際單位為最佳的超排劑量。因本試驗所用的全部是從未受過FSH處理的山羊，且多數為初產羊，體內的激素水平不穩(wěn)定，對激素敏感性高，加大激素劑量時，雖然能促進卵泡發(fā)育、排卵，但受精率降低。因此，為了能取得更好的超排效果，在生產實踐中，未生產過也沒有接受過超排處理的羊，應該用較低劑量超排，而生產過且接受過超排處理的羊，可以適當增加FSH劑量。