康建黨，劉 浩，盧鵬偉，李建勛

（1.河南省健康偉業(yè)醫(yī)藥科技有限公司，河南 鄭州 450000；2.河南省醫(yī)藥技師學(xué)院，河南 開封 475003）

氨茶堿氯化鈉注射液主要治療支氣管哮喘、喘息型支氣管炎、阻塞性肺氣腫等，用于緩解喘息癥狀，也可用于急性心功能不全和心源性哮喘，并且具有支氣管擴張作用和利尿作用［1-2］。該品為化學(xué)藥品，已在新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)33冊收載。原標(biāo)準(zhǔn)中采用分光光度法測定其中無水茶堿的含量。參考相關(guān)的文獻(xiàn)［3-5］，我們采用了HPLC法對該品種進(jìn)行了無水茶堿的含量測定，結(jié)果方法可靠、重現(xiàn)性好、簡單易行。

1 儀器與試藥

美國 Waters 515型高效液相色譜儀、Waters－486檢測器；上海天美UV－2300型紫外分光光度計；92SM－202A型電子天平（Precisa公司）。

茶堿對照品（中國藥品生物制品檢定研究院批號：100121－201104），供含量測定用；乙腈為色譜純；水為純化水；其他試劑為分析純；氨茶堿氯化鈉注射液（四川奇力制藥有限公司，批號：20100901、20100902、20100903）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：美國 Waters C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈－體積分?jǐn)?shù)為0.1%磷酸水溶液（20∶80）；流速為1.0mL／min；檢測波長275nm；進(jìn)樣量20μL；柱溫30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥恒重的茶堿對照品適量，置棕色量瓶中，加流動相制成每1mL含100μg的溶液，搖勻，即得茶堿對照品儲備液。吸取25mL置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取本品1mL，置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾，作為供試品溶液。

2.2.3 空白溶液的制備 按處方比例配成不含氨茶堿的陰性對照樣品；按照供試品溶液的制備方法，制成不含茶堿的空白溶液。

2.3 空白干擾實驗

按照“2.1”項下的色譜條件，吸取對照品溶液、供試品溶液、空白溶液各20μL，分別注入液相色譜儀進(jìn)行測定。結(jié)果，在供試品色譜圖與對照品色譜圖相應(yīng)的位置上，有相同保留時間的色譜峰，而空白溶液在此保留時間無干擾。見圖1。

圖1 氨茶堿氯化鈉注射液HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品儲備液0.5、1、2、3、4mL分別置10mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，各進(jìn)樣20μL，按“2.1”項下的色譜條件測定峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析，得回歸方程為Y ＝9.87×102 X －3.27（r＝0.9999），茶 堿 檢 測 濃 度 的 線 性 范 圍 為 5.1～40.9mg／L。

2.5 精密度實驗

取同一份對照品溶液20μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，其RSD＝0.26%。

2.6 穩(wěn)定性實驗

在試驗條件下，取同一份供試品溶液分別在室溫放置 0、2、4、6、8h 后各進(jìn)樣 1 次，其 RSD ＝0.58%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實驗

取同一批號氯茶堿氯化鈉注射液（20100901）6份，按供試品溶液制備方法制備，測定，結(jié)果無水茶堿的平均含量為77.9%，RSD ＝0.63%。

2.8 回收率實驗

取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%氯化鈉溶液，加無水茶堿對照品適量，分別制成每100mL含0.20、0.25、0.30g樣品各2份，按“2.1”項下的色譜條件測定，見表1。平均回收率為99.06%（n＝6），RSD 為0.28%。

表1 回收率實驗結(jié)果

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，按“2.2.2”項下方法制備樣品溶液，依“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，并計算含量。3批樣品中無水茶堿的含量分別為79.1%、78.2%、78.9%。

3 討論

在實驗中，經(jīng)過紫外掃描，發(fā)現(xiàn)茶堿在275nm波長處有最大吸收，因此，我們選擇了275nm為檢測波長。我們的研究曾采用流動相為乙腈－水、甲醇－醋酸鈉溶液、甲醇－水進(jìn)行測定，結(jié)果均發(fā)現(xiàn)主峰峰形較差，理論板數(shù)不高。但將流動相改變?yōu)橐译妫w積分?jǐn)?shù)為0.1%磷酸水溶液后，分別以二者比例為20∶80、30∶70、35∶65、40∶60進(jìn)行了試驗。結(jié)果表明，乙腈－體積分?jǐn)?shù)為0.1%磷酸水溶液的比例為20∶80時，主峰出峰時間為7.2min，理論板數(shù)最高，拖尾因子最小。并且精密度實驗、重復(fù)性實驗、穩(wěn)定性實驗、回收率實驗均符合中國藥典2010年版二部有關(guān)規(guī)定，故最終選用乙腈－體積分?jǐn)?shù)為0.1%磷酸水溶液（20∶80）為流動相進(jìn)行氨茶堿氯化鈉注射液中無水茶堿含量的測定。

［1］楊淑霞.氨茶堿聯(lián)用硫酸鎂治療喘憋性肺炎60例［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2011，40（6）：754－755.

［2］賈紅慧，李代英，蔡曉.氨茶堿氯化鈉注射液的支氣管擴張作用和利尿作用［J］.職業(yè)衛(wèi)生與病傷，2002，17（4）：273－274.

［3］吳素玲，黃晗.高效液相色譜法測定血漿茶堿濃度及其應(yīng)用［J］.醫(yī)學(xué)信息，2010，24（8）：277－278.

［4］汪秀月.HPLC法測定氨茶堿片中無水茶堿的含量［J］.海峽藥學(xué)，2010，22（9）：39－41.

［5］李立，丁剛.HPLC法測定茶堿葡萄糖注射液中茶堿的含量［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，35（1）：82－83