曹文慶，趙峰霞，趙玉哲，張 靜

(河北省人民醫(yī)院普外一科，河北 石家莊 050051)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率均很高。盡管乳腺癌綜合治療不斷進展，但仍有相當一部分患者復(fù)發(fā)。目前Notch信號通路被認為是引起乳腺癌復(fù)發(fā)的重要因素之一［1］。Notch1是Notch信號通路受體之一，在調(diào)控腫瘤細胞的生長、發(fā)育、增殖和凋亡等過程中起重要作用［2］。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是重要的血管生成調(diào)節(jié)因子，其與相應(yīng)受體結(jié)合，啟動腫瘤血管生成，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系［3］。作者應(yīng)用免疫組化(S-P)法檢測VEGF及Notch1蛋白在乳腺癌組織中的表達，分析其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系，并探討兩者與乳腺癌浸潤和轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 60例乳腺癌組織和20例癌旁正常乳腺組織選自我院2010年1月至2010年12月手術(shù)切除經(jīng)病理確診的石蠟標本，具有完整的臨床資料，均為女性，年齡35～70歲，術(shù)前均未行放療、化療或其他抗腫瘤的治療，病理類型均為浸潤性導(dǎo)管癌。

1.2 主要試劑 兔抗人VEGF單克隆抗體購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司;兔抗人Notch1多克隆抗體購于Abcam公司;S-P免疫組化染色試劑盒及DAB顯色試劑盒均購于福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3 檢測方法 石蠟標本切成4 μm切片，采用免疫組化S-P法檢測60例乳腺癌組織、20例癌旁正常乳腺組織中VEGF和Notch1蛋白的表達。用已知陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判定 VEGF和Notch1蛋白陽性信號均位于細胞質(zhì)。染色結(jié)果采用半定量積分法，隨機選擇5個高倍鏡視野觀察，每個視野計數(shù)200個腫瘤細胞。按陽性細胞百分比判斷:≤5%為0分，6% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。按染色強度判斷:無色為0分，淺棕色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞百分比與染色強度的乘積，0～3分為陰性表達，記作“－”;4～12分為陽性表達，記作“+”。閱片采用雙盲法，每張切片均由2名病理醫(yī)生判讀。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0進行統(tǒng)計分析，率的比較采用χ2檢驗或連續(xù)性校正χ2檢驗，相關(guān)性檢驗采用Spearman相關(guān)分析，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 VEGF表達及其與乳腺癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 VEGF在乳腺癌組織中的表達高于癌旁正常乳腺組織(P＜0.05)。VEGF的表達與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、臨床分期有關(guān)(P＜0.05)，而與腫瘤直徑、患者年齡無關(guān)(P均＞0.05)。見表1、2。

2.2 Notch1蛋白的表達及其與乳腺癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 Notch1蛋白在乳腺癌組織中的表達高于癌旁正常乳腺組織(P＜0.05)。Notch1蛋白的表達與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級有關(guān)(P＜0.05)，而與臨床分期、腫瘤直徑、患者年齡無關(guān)(P均＞0.05)。見表 1、2。

2.3 VEGF和Notch1蛋白在乳腺癌組織中表達的相關(guān)性 乳腺癌組織中VEGF表達與Notch1蛋白表達呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.414，P=0.001)。見表 3。

表1 VEGF和Notch1蛋白在乳腺癌組織及癌旁正常乳腺組織中的表達

3 討論

腫瘤的生長與血管生成關(guān)系密切，豐富的血管為腫瘤細胞生長提供了充足的營養(yǎng)物質(zhì)，并為其浸潤和轉(zhuǎn)移提供了必要的物質(zhì)條件。腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移是影響乳腺癌患者預(yù)后的重要指標。VEGF信號通路和Notch信號通路是調(diào)節(jié)胚胎血管發(fā)育和腫瘤血管生成的2個最重要的信號通路，作者推測其可能在乳腺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用。

VEGF作為血管生成最重要的因子，能特異性作用于血管內(nèi)皮，與血管內(nèi)皮細胞相應(yīng)受體結(jié)合，從而刺激血管內(nèi)皮細胞增殖，增強血管通透性，為腫瘤細胞轉(zhuǎn)移提供基質(zhì)。近年來，大量對胃癌、前列腺癌和肝癌等腫瘤組織中VEGF作用的研究均證實了VEGF與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系［3－5］。本文研究結(jié)果顯示:VEGF在乳腺癌組織中的表達高于癌旁正常乳腺組織，提示VEGF在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有重要作用，且VEGF的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、臨床分期有關(guān)。VEGF可能通過促進腫瘤血管生成進而促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。

表2 VEGF及Notch1蛋白的表達與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

表3 VEGF蛋白與Notch1蛋白的相關(guān)性

Notch信號通路廣泛存在于無脊椎動物和哺乳動物中，是保守進化的細胞內(nèi)信號通路，調(diào)節(jié)細胞增殖、分化和控制細胞，在胚胎發(fā)育、腫瘤血管生成中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用［6］。目前，在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)4個Notch受體(Notch1～Notch4)和至少5個Notch配體(Jagged1、Jagged2、DLL1、DLL3和 DLL4)。其中 Notch1最常在腫瘤組織中被檢測到，異常的Notch1在腫瘤細胞的生長、代謝及凋亡等過程中起重要調(diào)控作用［2］。研究［7］發(fā)現(xiàn)Notch1在乳腺癌組織中表達高于癌旁正常乳腺組織，且與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及腫瘤直徑有關(guān)。Wang等［8］研究發(fā)現(xiàn)減少Notch1的表達會降低乳腺癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，提出乳腺癌中以Notch1為靶目標有重要治療價值。本文結(jié)果顯示，Notch1在乳腺癌組織中高表達，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)，提示Notch1可能與促進乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。

Joo等［9］對舌癌的研究發(fā)現(xiàn)，VEGF、Notch1 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關(guān)，且兩者的表達呈正相關(guān)，提示兩者在舌癌的浸潤和轉(zhuǎn)移中起一定作用，可能成為影響舌癌預(yù)后的重要指標。張安華等［10］發(fā)現(xiàn)VEGF、Notch1在胃癌組織中高表達，均與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移有關(guān)，且兩者表達具有明顯正相關(guān)性，推測兩者可能共同調(diào)控腫瘤血管新生，參與胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。本文結(jié)果顯示，VEGF、Notch1在乳腺癌組織中的表達呈正相關(guān)，且均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，提示兩者的表達不僅促進腫瘤的發(fā)生，且在乳腺癌增殖、生長及浸潤、轉(zhuǎn)移中起一定的作用，為乳腺癌的綜合治療提供了新的理論依據(jù)。

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