朱麗均 陳亞萍 梅小會(huì)

（復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海 200240）

稽留流產(chǎn)是流產(chǎn)的一種特殊形式，流產(chǎn)中該病的發(fā)生率可達(dá)15%～20%［1］。近年研究顯示，稽留流產(chǎn) 的 發(fā) 病 可 能 與 免 疫［2］、內(nèi) 分 泌［3］、遺 傳［4］、環(huán)境［5］、感染［6］、氧化應(yīng)激［7］等因素有關(guān)，但是其確切的病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確。線粒體是一種極其敏感的細(xì)胞器，它也是細(xì)胞氧反應(yīng)產(chǎn)物的主要來源之一。本課題旨在探討稽留流產(chǎn)患者絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化及其可能原因。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月—2011年12月在我院婦科住院的確診為稽留流產(chǎn)的患者20例為研究組。選取同期經(jīng)B超證實(shí)為胚胎存活在門診要求行人工流產(chǎn)的早孕婦女20例作為對(duì)照組。2組婦女在年齡、停經(jīng)時(shí)間及孕次方面，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 研究組和對(duì)照組患者一般資料比較（）

表1 研究組和對(duì)照組患者一般資料比較（）

組別 n 平均年齡（歲）平均孕次（次）平均停經(jīng)時(shí)間（d）研究組 2029.87±5.072.71±1.3459.07±11.91對(duì)照組 2026.66±5.332.51±1.2155.74±6.90

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn) 研究組：孕齡不超過12周，稽留流產(chǎn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照第7版婦產(chǎn)科教材。對(duì)照組：（1）孕齡不超過12周；（2）術(shù)前B超檢查示孕囊形態(tài)及胚胎原始心管搏動(dòng)正常。

兩組婦女既往均無妊娠并發(fā)癥、內(nèi)外科合并癥、感染、自然流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、先兆流產(chǎn)等病史及服藥史。

1.3 標(biāo)本的采集與處理 無菌條件下，采用負(fù)壓抽吸方法吸出絨毛組織，負(fù)壓400～500 mmHg。絨毛組織吸出后取一部分新鮮組織進(jìn)行還原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）和抗超氧陰離子自由基（fight superoxide radical，F(xiàn)SR）檢測(cè)，另一部分組織保存于2.5%戊二醛液固定液中，用于電鏡觀察。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 胚胎組織勻漿制備 將胚胎組織中加入9倍體積的0.9%氯化鈉溶液，倒入放置于冰塊中的玻璃勻漿管內(nèi)，充分磨碎，使組織勻漿化，然后將勻漿以2000r／min離心5min，其上清液即為10%組織勻漿，用以進(jìn)行組織GSH和FSR測(cè)定。

1.4.2 各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行。所用試劑由南京建成生物工程研究所提供。儀器用美國的Varian Cary－Eclipse 500熒光分光光度計(jì)。并按所給公式計(jì)算結(jié)果。

1.4.3 胚胎組織病理形態(tài)學(xué)檢查 保存于2.5%戊二醛液固定液中的胚胎組織送至復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院電鏡室進(jìn)行相應(yīng)處理并在透射電鏡下觀察。

2 結(jié) 果

2.1 胚胎組織GSH和FSR變化 研究組和對(duì)照組相比，GSH和FSR水平均顯著性降低（P＜0.05），見表2。

表2 研究組和對(duì)照組GSH、FSR分析（）

表2 研究組和對(duì)照組GSH、FSR分析（）

組別 n GSH含量（mg／gprot）FSR活力單位（U／gprot）研究組 20 0.44±0.22 6.19±4.20對(duì)照組 20 2.54±2.10 19.36±5.88

2.2 胚胎組織病理形態(tài)學(xué)變化 電鏡下可見對(duì)照組胚胎細(xì)胞核膜完整，染色質(zhì)分布均勻；線粒體呈圓或橢圓形，基本無腫脹，膜完整，嵴呈同心圓或縱形排列且密集清晰（圖1）。研究組胚胎細(xì)胞核膜中斷，染色質(zhì)固縮并凝結(jié)成塊；線粒體排列紊亂，結(jié)構(gòu)模糊，線粒體水腫變性，嵴明顯疏松溶解，部分呈空泡樣變（圖2）。

圖1 對(duì)照組胚胎細(xì)胞線粒體呈圓或橢圓形，基本無腫脹，膜完整，嵴呈同心圓或縱形排列，密集清晰（×37000）

圖2 研究組胚胎細(xì)胞線粒體排列紊亂，結(jié)構(gòu)模糊，線粒體水腫變性，嵴明顯疏松溶解，部分空泡樣變（×37000）

3 討 論

本研究采用化學(xué)分析法檢測(cè)稽留流產(chǎn)患者及正常早孕婦女絨毛組織中GSH和FSR的水平，結(jié)果顯示稽留流產(chǎn)患者絨毛中GSH和FSR的水平均顯著低于正常早孕婦女，提示可能由于稽留流產(chǎn)患者胚胎組織抗氧化能力下降，線粒體生成氧自由基增多，自由基的強(qiáng)氧化作用［8］引起雙層脂質(zhì)膜的穩(wěn)定性下降，DNA單鏈破壞與斷裂，促進(jìn)含硫蛋白質(zhì)的相互交聯(lián)，從而破壞線粒體超微結(jié)構(gòu)。電鏡下發(fā)現(xiàn)，研究組中胚胎細(xì)胞線粒體有不可逆損害，對(duì)照組胚胎細(xì)胞線粒體基本完好，表明氧自由基對(duì)胚胎細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)造成明顯的損傷作用。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，稽留流產(chǎn)患者胚胎細(xì)胞抗氧化能力減弱，線粒體超微結(jié)構(gòu)破壞，提示線粒體與稽留流產(chǎn)之間存在著某些重要關(guān)聯(lián)。有必要進(jìn)一步研究，以了解線粒體在早期胚胎發(fā)育中的作用。

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