劉善齋，劉洪瑜，涂曉華，劉永文

（1.國家肉牛牦牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系亳州綜合試驗站，安徽 亳州236800；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，安徽 合肥230036）

供體母牛的超數(shù)排卵（簡稱超排）是牛胚胎移植的主要技術(shù)環(huán)節(jié)之一，超排是獲得有效體內(nèi)胚胎的重要來源［1］。家畜胚胎移植可以充分發(fā)揮優(yōu)良母畜在品種改良和育種中的作用，尤其是對牛羊單胎動物來說，通過超排和胚胎移植技術(shù)（multiple ovulation and embryo transfer，MOET）可以使供體的繁殖后代增加6～7倍，它也是一項代替種畜引進，利用生產(chǎn)性能低下母牛繁殖良種牛的經(jīng)濟安全實用的高效繁殖技術(shù)。于2010年11月～2012年3月在亳州綜合試驗站依托單位（譙城區(qū)智純?nèi)馊辄S牛繁育場），選擇青年和牛母牛作為供體牛進行了超數(shù)排卵、胚胎采集工作；同時選擇育成荷斯坦母牛和西雜母牛作為受體進行了的鮮胚胎移植工作，取得一定的效果?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供體牛和受體牛的選擇 選擇本場飼養(yǎng)的4頭純種青年和牛母牛作為供體牛，年齡在12～18月齡，體重400kg以上，營養(yǎng)中上等；并在本場選擇67頭育成荷斯坦母牛及西雜母牛作為受體牛，年齡1～1.5歲，均采用散欄圈養(yǎng)。選擇自然發(fā)情正常的受體牛。

1.1.2 凍精來源 本站制作和牛凍精和國外凍精。

1.1.3 藥品及器械 孕酮栓（CIDR），由新西蘭進口，供體牛每次超排使用一支；促卵泡素（FSH）是中科院動物所生產(chǎn)，規(guī)格10IU/瓶；獸用前列腺素（PG）由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所研制生產(chǎn)，規(guī)格0.3mg/支；促排卵素（LHRH－A3），由寧波市激素制品有限公司生產(chǎn)，規(guī)格25μg/支；采卵液（PBS），由實驗室配制；PBSS液從國外進口，由美國AB公司生產(chǎn)，規(guī)格50mL/袋；維生素 A、D、E針劑（VADE）由北京維爾德生物科技有限公司生產(chǎn)；胚胎采集器械由日本富士平株式會社進口。

1.2 方法

1.2.1 供體牛超排處理方法與程序 供體牛超排處理使用CIDR十FSH十PG方法［2］，見表1。

1.2.2 供體牛人工輸精技術(shù) 觀察和確定牛的發(fā)情時間，做到適時輸精。一般情況在第9d和第10 d各輸精一次，即第一次配種，在穩(wěn)定發(fā)情后10～12 h，凍精1支/頭，同時肌注促排3號25μg/頭，第二次配種，在第一次配種后12h，凍精1支/頭。對供體牛外陰清潔、消毒，輸精器保持無菌，進行子宮體輸精。

1.2.3 受體牛同期發(fā)情 同期發(fā)情的方法都采用CIDR十PG法，在受體牛陰道內(nèi)放入CIDR的當(dāng)天為0d；到第7d受體牛肌注PG（0.6mg/頭）；到第10d下午取出CIDR；到第11～13d全天觀察發(fā)情情況，以站立接受爬跨不動為發(fā)情標準。對發(fā)情的 牛到第19d進行移植。

表1 供體牛超排處理程序和方法

表2 受體牛同期發(fā)情實施方案

1.2.4 胚胎移植 胚胎從供體牛體內(nèi)取出，在顯微鏡下檢出，放入小平皿中的PBSS液中，胚胎移入PBSS液洗滌10次，鑒定胚胎質(zhì)量A級、B級和C級胚胎為可用胚胎，三段法裝入細管一裝槍。

胚胎移植：保持無菌狀態(tài)下將裝有胚胎的細管裝入移植槍，套上硬外套、軟外套，移植前，在受體牛薦尾結(jié)合部硬鞘膜外腔內(nèi)注射5%的鹽酸利多卡因2～3mL進行局麻，使其保持安靜，便于操作［3］。然后清洗外陰，用無菌紙擦拭，稍干酒精棉消毒，再用高壓消毒過的生理棉片擦拭，用直腸把握法將胚胎輸入具有黃體一側(cè)的子宮角。

2 結(jié)果與分析

2.1 超排效果與分析

選擇4頭青年純種和牛母牛進行超排，重復(fù)沖胚采卵13頭次，共沖胚122枚、頭均沖胚9.38枚，其中可用胚胎75枚，頭均可用胚5.77枚，見表3。

如表3所示，整個超排結(jié)果得到平均5.77枚/頭次的可用胚胎，可用胚胎率為61.48%。牛的超數(shù)排卵是一個復(fù)雜的生理過程，受很多因數(shù)的影響，包括品種、生物學(xué)特性、年齡、季節(jié)、時間、FSH品牌及劑量、卵巢狀態(tài)、超排方法等等因數(shù)的影響。吳柱月等報道［4］，肉牛（包括西門塔爾牛、短角牛等）的超排結(jié)果，頭均可用胚胎數(shù)，青年牛為5.9～7.2枚之間，經(jīng)產(chǎn)牛為5.8～7.5枚之間，可用胚胎率，青年牛為63.6%，經(jīng)產(chǎn)牛為69.2%。與此相比，本試驗中和牛母牛的超排效果稍低，這是否與品種、激素或 營養(yǎng)等因素有關(guān)，還有待進一步研究。

表3 和牛青年母牛超排效果

2.2 受體牛的同期發(fā)情和胚胎移植妊娠結(jié)果

2011年2～3月在依托單位養(yǎng)殖場，對60頭荷斯坦母牛和24頭西雜母牛進行同期發(fā)情處理，處理結(jié)果見表4。結(jié)果獲得75頭同期發(fā)情，同期發(fā)情率達到89.2%，實際鮮胚移植了67頭受體牛。2個月妊娠檢查有35頭懷孕，移植受胎率為52.23%。效果見表4。

表4 受體牛同期發(fā)情和胚胎移植效果

3 討論

1）供體牛超排和重復(fù)超排效果極不穩(wěn)定，受激素種類、劑量、超排程序、家畜品種、年齡、胎次、機體狀況、遺傳特性、繁殖力、卵巢功能、子宮環(huán)境、季節(jié)、環(huán)境等諸多因素的影響。此外，獲得可用胚胎的數(shù)量尚受采卵操作技術(shù)水平的影響。所以在實踐工作中要減少各種因素的影響，以求達到最好的效果。

2）由于胚胎移植技術(shù)已經(jīng)成為一項成熟的技術(shù)，因此受體牛飼養(yǎng)管理已成為影響移植成功率的主要因素，所以必須對受體牛在胚胎移植前和移植后加強飼養(yǎng)管理［5］。這次荷斯坦牛和雜交牛獲得移植妊娠率的效果相差很大，可能與受體牛品種及營養(yǎng)狀況有關(guān)。

3）本次實驗研究，使用和牛母牛進行超排，利用和牛純種凍精輸精生產(chǎn)胚胎，以及利用受體牛獲得純種和牛二代，在縮短世代間隔和快速擴繁方面與人工授精相比體現(xiàn)出胚胎移植的巨大優(yōu)勢。

4）本次試驗研究，使用75頭受體牛，同期發(fā)情后可移植胚胎頭數(shù)為67頭。如果能夠使用鮮胚和凍胚結(jié)合移植受體牛，使受體牛能得到充分的利用，可以更大發(fā)揮胚胎移植的優(yōu)勢。

4 結(jié)論

和牛母牛可以使用CIDR十FSH十PG方法進行超數(shù)排卵，并采用胎移植技術(shù)提高其利用效率。

［1］李 銘，吳柱月，蔣小剛，等.供體牛重復(fù)超數(shù)排卵效果試驗初報［J］.廣西畜牧獸醫(yī)，2005，（5）214－216.

［2］李 銘，吳柱月，莫柳忠，等.廣西地區(qū)荷斯坦牛超數(shù)排卵效果分析［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2008，（3）：53－56.

［3］梁 坤.如何提高牛超排效果［J］.黑龍江動物繁殖，2002，（4）：14－15.

［4］吳柱月，李 銘，莫柳忠，等.廣西牛胚胎移植技術(shù)研究結(jié)果及分析明［J］.中國畜牧雜志，2009，（增刊）：236－239.

［5］吳柱月，李 銘，莫柳忠，等.廣西西門塔爾青年母牛和荷斯坦母牛超數(shù)排卵及胚胎移植初報［J］.廣西畜牧獸醫(yī)，2003，（4）：149－151.