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        飼料中不同蛋白和鈣對(duì)雞腎臟影響的研究

        2012-06-08 03:16:06晁利剛臧猛高倩
        飼料工業(yè) 2012年21期

        晁利剛 臧猛 高倩

        (河南新正好生物工程有限公司,河南 鄭州 450011)

        雞尿酸鹽沉積癥,是一種由蛋白質(zhì)及嘌呤核苷酸代謝障礙引起的高尿酸血癥、腎功能損害性疾病,是家禽的常見病,不同季節(jié),不同日齡的各種家禽均可發(fā)生。尿酸鹽沉積的原因有:傳染病因素如腎型傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊病、包涵體肝炎等;營養(yǎng)因素如蛋白含量或鈣含量過高,鈣磷比例失衡,維生素缺乏等;管理因素如溫度高、飲水不足,雞舍通風(fēng)不良,空氣中氨氣含量過高等。尿酸鹽沉積癥常引起雞飲水量、采食量下降,血液中尿酸含量升高,關(guān)節(jié)腫大,行動(dòng)遲緩,嚴(yán)重的雞腎臟呈花斑狀,內(nèi)臟、關(guān)節(jié)表面及其它間質(zhì)組織有大量白色尿酸鹽結(jié)晶?;茧u不僅生長緩慢,生產(chǎn)性能降低,而且死亡率有的高達(dá)30%。

        本試驗(yàn)通過人工試驗(yàn)出雞尿酸鹽沉積模型,觀察腎臟臨床病理變化,旨在探究禽尿酸鹽沉積的機(jī)制,為開發(fā)治療尿酸鹽沉積病的新藥提供指導(dǎo),并為其預(yù)防提供試驗(yàn)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

        8日齡AA雞60只,分為健康對(duì)照組(15只)、44%高蛋白組(15只),高鈣組(15只,0.5%鈣飲水)、44%高蛋白高鈣組(15只,0.5%鈣飲水)等4組。

        1.1.2 飼料配制

        魚粉(蛋白含量 60%,product of Peru),飼料(鄭州市紅門飼料有限責(zé)任公司提供),健康組喂普通肉雞飼料,高蛋白組飼喂總蛋白為44.0%的含魚粉飼料,高鈣組飲水0.5%的鈣,高蛋白高鈣組飼喂總蛋白為44.0%的魚粉飼料和鈣含量0.5%的飲水。

        1.1.3 試劑

        鎢酸鈉(成都市科龍化工試劑廠,20081121),碳酸鋰(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司,20090511),檸檬酸鈉 (天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心,20090310),濃磷酸(天津市凱通化學(xué)試劑有限公司,20090612),濃硫酸(天津市凱通化學(xué)試劑有限公司,20070516),乙二醇(天津市凱通化學(xué)試劑有限公司,20081106),碳酸鈣(天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心,20090925),碳酸鈉(天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心,20090416),氯化鈣(天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心,20090628)。

        1.1.4 藥物

        尿酸對(duì)照品(北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司生產(chǎn))。

        1.1.5 儀器

        TU-1810紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任有限公司),TL80-1型離心沉淀機(jī)(江蘇姜堰市天力醫(yī)療機(jī)械有限公司)。

        1.2 方法

        1.2.1 體重變化計(jì)算

        先隨機(jī)取20只小雞,稱取每只雞的體重,取平均值,看雞的體重在什么數(shù)值范圍內(nèi)最多,平均值±5.0 g。每組雞為15只,每組雞體重之間的平均值差異不能超過0.5 g。

        1.2.2 水重、料重的計(jì)算

        雞自由飲水和采食,記錄24 h的總飲水量和總采食量,計(jì)算每只雞每天平均的飲水量和采食量。

        1.2.3 死亡率的統(tǒng)計(jì)

        記錄小雞在造模試驗(yàn)中,每天死亡的只數(shù),觀察雞死亡的高峰期。

        1.2.4 血液中尿酸鹽含量的測定

        每組雞采血1 ml,放入1 ml含有3.8%的草酸鈉液體里面,混合均勻,12 h內(nèi)測定。4組雞血混合物樣品、尿酸對(duì)照品和空白對(duì)照(蒸餾水)各組取0.5 ml,放入離心管中,加鎢酸試劑4.5 ml,靜止6 min,4000 r/min離心10 min,每離心管取上清液2.5 ml放入試管中,每管加0.5 ml的1 mol/l碳酸鈉溶液,混勻后,放置10 min,加入0.5 ml磷鎢酸應(yīng)用液,混勻后室溫放置20 min,用分光光度計(jì)在波長660 nm,以空白對(duì)照調(diào)零,記錄各管的吸光度(λ),血清尿酸(μmol/l)=(測定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×300×2。

        1.2.5 雞生理、病理變化

        解剖小雞,觀察小雞的消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)(特別是腎臟的變化)有什么病理變化。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 試驗(yàn)前后雞體重的變化(見表1)

        表1 各組雞試驗(yàn)前后體重變化

        從表1可知:試驗(yàn)前每組雞的平均體重在81.1~81.5 g,平均體重最大相差0.4 g;飼養(yǎng)5 d,每組雞的體重在134.6~204.9 g,平均體重最大相差70.3 g,體重差別明顯,高蛋白組每只雞平均增重68.0 g,高鈣組每只雞平均增重58.8 g,高蛋白高鈣組每只雞平均增重53.5 g,健康對(duì)照組每只雞平均體重增重123.7 g,這些數(shù)據(jù)說明:高蛋白和高鈣影響雞的正常生長發(fā)育,0.5%的鈣比44.0%的高蛋白對(duì)雞的生產(chǎn)性能影響更大,兩者聯(lián)用,進(jìn)一步降低生產(chǎn)性能。從增重率上可以看出來,高蛋白高鈣組增重率最低,不及健康組的一半,其生產(chǎn)性能明顯受到抑制。

        2.2 試驗(yàn)前后雞飲水量和采食量的變化(見表2、表3)

        表2 試驗(yàn)中雞每天平均的飲水量(g)

        從表2可知:給水第1 d,各組每只雞平均飲水量變化不是很大,在56.4~68.3 g;第5 d時(shí),飲水量最少的高鈣組為30.2 g,飲水量最大的高蛋白組為116.8 g,高蛋白組是高鈣組的3.9倍,是高蛋白高鈣組的2.7倍,各組雞平均飲水量差異比較顯著。高蛋白組和健康對(duì)照組的雞平均飲水量從第1 d到第5 d是逐漸增加的,高蛋白組增加了53.7 g,健康對(duì)照組增加了47.6 g;而高鈣組則是逐漸遞減,從第1 d的56.4 g,減到第5 d的30.2 g;高蛋白高鈣組先增加再減少,但總體還是在減少。

        表3 試驗(yàn)中雞每天平均的采食量(g)

        從表3可知:第1 d各組每只雞的平均采食量在32.5~34.3 g,相差不超過 2.0 g,第 5 d 時(shí),高蛋白組每只雞的平均采食量為53.1 g,健康對(duì)照組為46.9 g,而高鈣組為17.3 g,高蛋白高鈣組為16.9 g,高蛋白組的每只雞平均采食量是高蛋白高鈣組的3.1倍多,是高鈣組的近3.1倍。各組每只雞的平均采食量和其飲水量呈同一趨勢,即高蛋白組和健康對(duì)照組的采食量每天逐漸增加,而高鈣組逐漸減少,高蛋白高鈣組還是先增加后減少。

        2.3 雞死亡率的統(tǒng)計(jì)

        模型試驗(yàn)中,每組雞共15只,在5 d的試驗(yàn)中,高蛋白組未見死雞,高鈣組在第4 d、第5 d各死一只,高蛋白高鈣組在第3 d、第4 d各死一只,第5 d死兩只。高鈣組的死亡率為13.33%,高蛋白高鈣組的死亡率為26.67%,與有關(guān)報(bào)道相符合。

        表4 試驗(yàn)中雞的死亡率

        2.4 試驗(yàn)雞血清中尿酸鹽含量的測定

        用磷鎢酸還原法測定血清尿酸的含量,各組雞取1 ml雞血于含有1 ml草酸鈉試管中,經(jīng)過處理,用紫外分光光度計(jì)在660 nm處測定其吸光度,并計(jì)算含量(見表 5),高蛋白尿酸含量為 297.90 μmol/l,較健康對(duì)照組 268.53 μmol/l高 29.37 μmol/l。試驗(yàn)幾組雞中,高蛋白高鈣組血清尿酸含量最高為423.78 μmol/l,是健康對(duì)照組血清尿酸含量的1.6倍。試驗(yàn)各組雞血清尿酸的含量測定結(jié)果與黎曉敏等雞血清尿酸測定結(jié)果比較接近,與李榮譽(yù)等雞血清尿酸測定結(jié)果相比偏低。

        2.5 解剖死雞和健康對(duì)照雞比較病理變化

        試驗(yàn)結(jié)束后,記錄試驗(yàn)數(shù)據(jù)。對(duì)比各組雞的精神狀態(tài),從健康組中解剖一只雞,觀察其腎臟變化,腎臟結(jié)果見圖1,腎臟表面光滑,有光澤,顏色鮮潤,塊狀結(jié)構(gòu)分布明顯,血液顏色鮮紅;從高蛋白高鈣組中,找一個(gè)精神萎靡的雞,解剖并觀察腎臟變化,其結(jié)果見圖2,腎臟表面無光澤、發(fā)干,顏色暗淡,腎臟腫大,塊狀結(jié)構(gòu)分布不明顯,腎臟內(nèi)部結(jié)構(gòu)呈不規(guī)則的花紋狀,血液顏色變深。

        表5 尿酸含量計(jì)算

        圖1 健康雞腎臟

        圖2 模型雞腎臟(花斑腎)

        3 討論

        3.1 尿酸鹽沉積機(jī)理

        一方面生物沉積,自身免疫反應(yīng),體內(nèi)抗原抗體反應(yīng)沉淀物在腎臟蓄積,如:當(dāng)病原體(如細(xì)菌、病毒、寄生蟲等)侵入雞體后,體內(nèi)的防御系統(tǒng)就產(chǎn)生抵抗這些病原體的物質(zhì),稱之為抗體。在抗體抵抗抗原的過程中,抗體戰(zhàn)勝了入侵的病原體,使疾病得以痊愈;同時(shí)也破壞自身組織,從而引發(fā)疾病,另外,抗原抗體在競爭的過程中形成抗原抗體復(fù)合物,這些已形成的復(fù)合物可在腎臟內(nèi)沉積;另一方面物理沉積,是由腎功能損傷(腎炎等),導(dǎo)致物質(zhì)不能更好的代謝,在腎臟沉積,如:鈣過高或鈣磷比例失調(diào),超出機(jī)體的吸收和排泄能力。大量的鈣鹽就會(huì)從血液中析出,沉積在腎臟,引起腎腫。飼料配制不合理或選擇原料使用不當(dāng),造成鈣、磷比例增大,就會(huì)促進(jìn)血鈣升高,而增加腎臟排泄的負(fù)擔(dān),長時(shí)間下去會(huì)因鈣鹽沉積于輸尿管內(nèi)而引起腎臟發(fā)生病變,如腎結(jié)石和痛風(fēng)病等;再一方面化學(xué)沉積,體內(nèi)代謝的CO2、尿酸等物質(zhì)在腎臟內(nèi)與代謝的鈣、鎂等離子發(fā)生化學(xué)反應(yīng),形成碳酸鹽或尿酸沉淀,如:飼喂高蛋白飼料造成雞尿酸鹽沉積。由于家禽攝入蛋白質(zhì)的代謝終產(chǎn)物是尿酸 (家畜是尿素),若血液中尿酸增多,當(dāng)超出腎臟的排泄限度時(shí),則引起尿酸在體內(nèi)的蓄積;同時(shí),由于尿酸長期和過度地刺激腎小管上皮細(xì)胞,引起黏膜變性,致使腎臟排泄障礙,又加重尿酸鹽在體內(nèi)的沉積。試驗(yàn)選用高蛋白和高鈣飼料進(jìn)行人工試驗(yàn)得出雞尿酸鹽沉積模型,可有上述理論作為依據(jù)。

        3.2 尿酸鹽沉積模型

        試驗(yàn)采用高蛋白和高鈣的飼料,飼喂小雞,造成尿酸鹽沉積。建立的尿酸鹽沉積模型,主要通過小雞的增重率、采食量、飲水量、死亡率、血清尿酸鹽含量測定、腎臟病理變化等指標(biāo)進(jìn)行考察。小雞的增重率是考察尿酸鹽沉積模型的重要指標(biāo)之一,小雞分組前,體重有一定的差異,有的差異甚大,試驗(yàn)去除體重大、小兩端的雞,8日齡的小雞體重平均為81.0 g,以(81.0±5.0)g選雞分組,一方面每組雞整體體重差異不大,另一方面每只雞個(gè)體差異也不大,這樣試驗(yàn)數(shù)據(jù)更科學(xué)。采食量、飲水量主要考察高蛋白、高鈣對(duì)雞生產(chǎn)性能的影響。死亡率和雞臨床病理變化的考察,主要更接近市場上雞發(fā)生的尿酸鹽沉積癥,一方面雞飲水采食量下降,精神萎靡,雞排出糞便尿酸鹽過多,腎臟腫大,呈花斑狀等,另一方面發(fā)生尿酸鹽沉積癥會(huì)導(dǎo)致一定數(shù)量的雞死亡,有報(bào)道稱尿酸鹽沉積癥死亡率可達(dá)40%以上。

        3.3 尿酸鹽沉積模型的建立,對(duì)養(yǎng)禽業(yè)有重大的指導(dǎo)意義,在養(yǎng)雞飼料配制中,注意蛋白和鈣的比例,高蛋白易引起尿酸鹽沉積癥,影響雞的生產(chǎn)性能;高鈣不僅能引起尿酸鹽沉積癥,嚴(yán)重的還能引起雞成批量死亡,即使鈣磷比例適當(dāng),鈣的含量也不能超過1.0%。尿酸鹽沉積模型的建立,為新藥的研究與開發(fā),提供了試驗(yàn)依據(jù)。

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