楊麗華，龔道新

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，湖南 長沙 410128；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)研究所，湖南 長沙 410128）

氟鈴脲（hexaflumuron）化學(xué)名稱：1-[3，5-二氯-4-（1，1，2，2-四氟乙氧基） 苯基]-3-（2，6-二氟苯甲?；╇?，分子式為C16H8CL2F6N2O3，是近年來國外開發(fā)的新型昆蟲生長調(diào)節(jié)劑[1]，可有效防治棉花、蔬菜、果樹、林木等多種植物上的害蟲，并對已產(chǎn)生藥物抗性（如有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類殺蟲劑等）的害蟲具有良好的防治效果[2]。但是作為農(nóng)藥，氟鈴脲的使用是否會(huì)危及食品安全，是否會(huì)造成環(huán)境污染仍然是人們關(guān)注的一個(gè)重要問題。目前，日本已規(guī)定氟鈴脲在羽衣甘藍(lán)、卷心菜中的最大殘留限量（MRL值）為0.20mg/kg，韓國規(guī)定氟鈴脲在甘藍(lán)中的MRL值為0.30 mg/kg，而中國，目前尚未規(guī)定氟鈴脲在甘藍(lán)中的MRL值。因此，研究氟鈴脲在甘藍(lán)上的殘留分析方法具有一定的意義。

目前關(guān)于氟鈴脲的報(bào)道主要集中在其藥效、毒理、農(nóng)藥合成和制備以及色譜分析方法等方面[3]，關(guān)于其在甘藍(lán)植株中的殘留分析方法的報(bào)道還較少，筆者在前人工作的基礎(chǔ)上[4-12]，采用高效液相色譜（HPLC）法較為系統(tǒng)地研究并建立了氟鈴脲在甘藍(lán)植株和種植土壤中的殘留分析與檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與材料

HP-1100型HPLC（美國HP公司，帶紫外檢測器及HP化學(xué)工作站），SHY-2AS水浴恒溫振蕩器，HY-Z型調(diào)速多用振蕩器，RE-2000A型旋轉(zhuǎn)濃縮儀，TP-220A電子天平，布氏漏斗，梨形抽濾瓶，玻璃層析柱（長20 cm，直徑1.5 cm），具塞磨口三角瓶等試驗(yàn)室常用玻璃儀器設(shè)備；乙腈、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯化鈉、無水硫酸鈉均為分析純，甲醇為色譜純；Florisil（色譜層析用，60～100 目，650灼燒5 h，冷卻后加2%蒸餾水脫活，保存在130℃的烘箱中，備用）；氟鈴脲標(biāo)準(zhǔn)樣品（純度≥98%）（浙江威爾達(dá)化工有限公司）。

1.2 高效液相色譜條件

色譜柱Welchmaterials ultimateXB-C18柱（4.6 mm×150mm，5μm，美國 Welch公司）；流動(dòng)相為甲醇∶水（73∶27，V/V），柱溫為 30℃，流速為 0.8mL/min，檢測波長為220 nm，進(jìn)樣量為20μL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取氟鈴脲標(biāo)準(zhǔn)品0.051 0 g（純度為98%），用色譜甲醇溶解并定容至100.0 mL，得到濃度為500.0mg/L的氟鈴脲標(biāo)準(zhǔn)母液，于4℃冰箱中保存。

1.4 樣品的提取及凈化

1.4.1 樣品的提取 準(zhǔn)確稱取甘藍(lán)和甘藍(lán)種植土壤樣品各20.0 g，置于250 mL具塞三角瓶中，加入60 mL乙腈（甘藍(lán)樣品需加入適量的無水硫酸鈉，以吸取甘藍(lán)樣品解凍后的水分），在恒溫振蕩器中振蕩提取30min，經(jīng)布氏漏斗減壓抽濾；用乙腈分別洗滌殘?jiān)统闉V瓶2次，每次使用20mL乙腈，合并乙腈提取液并轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中（40℃）蒸發(fā)近干，待弗羅里硅土（Florisil）柱凈化。

1.4.2 樣品的凈化 弗羅里硅土層析柱從下至上依次裝填有少許脫脂棉、2 cm厚無水硫酸鈉、5 g弗羅里硅土、2 cm厚無水硫酸鈉，在裝柱的過程中要敲緊敲實(shí)，在弗羅里硅土凈化柱裝好后，用乙酸乙酯作淋洗液。先用20mL淋洗液預(yù)淋，再將上述提取濃縮液無損移入弗羅里硅土凈化柱中，用50 mL乙酸乙酯分次洗脫，收集全部洗脫液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至近干，然后用色譜甲醇定容至5.0 mL，過0.45μm濾膜，待HPLC檢測。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品的提取與凈化方法

試驗(yàn)比較了乙腈、二氯甲烷和甲醇提取甘藍(lán)及甘藍(lán)種植土壤中氟鈴脲的效果，結(jié)果表明：3種提取溶劑的提取回收率均超過85%，但乙腈作為提取劑，回收率更穩(wěn)定且與樣品中的雜質(zhì)分離更完全，說明使用乙腈作提取劑是比較合適的。

在柱層析凈化中，比較了乙酸乙酯、丙酮和乙酸乙酯的混合液（1∶1，V/V）和丙酮3種淋洗液對氟鈴脲洗脫的影響，結(jié)果表明：前兩種淋洗液都能較好地將氟鈴脲洗脫下來，回收率較高且能使氟鈴脲與雜質(zhì)較好地分離，而丙酮作為淋洗液，雖能將氟鈴脲洗脫下來，回收率也較高，但氟鈴脲與雜質(zhì)分離不好，故不考慮用丙酮作為洗脫液；乙酸乙酯比丙酮和乙酸乙酯的混合液（1∶1，V/V）在操作過程更簡便，綜合考慮選擇乙酸乙酯作淋洗液是較為適宜的。

2.2 HPLC檢測條件的選擇

設(shè)計(jì)水和甲醇以不同比例混合作為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，研究其對氟鈴脲的峰形，與雜質(zhì)峰的分離度及分離時(shí)間等因素的影響，試驗(yàn)結(jié)果顯示：甲醇∶水=73∶27（V/V）時(shí)分離效果最好。同時(shí)還對流動(dòng)相的流速和柱溫等條件進(jìn)行了優(yōu)化，選定了流動(dòng)相的流速為0.8mL/min，柱溫為30℃。

氟鈴脲在190～210 nm波長范圍內(nèi)有最大吸收峰，其中最大吸收波長為205 nm，但氟鈴脲在250～260 nm范圍內(nèi)，有次吸收峰，并且甲醇對小于210 nm的紫外光隨波長減少吸光度增大，所以205 nm不宜作為檢測波長。在試驗(yàn)過程中分別選擇了210 nm、215 nm和220 nm作為測定波長，結(jié)果表明：220 nm處氟鈴脲的測定靈敏度高，也比較穩(wěn)定，并且在進(jìn)行實(shí)際樣品測定時(shí)分離較完全，故選擇220 nm作為測定波長。在選定的色譜條件下，氟鈴脲的保留時(shí)間為13.80 min，標(biāo)樣、甘藍(lán)植株和種植土壤樣品色譜圖見圖1～5。

圖1 氟鈴脲標(biāo)樣色譜分析

圖2 氟鈴脲在甘藍(lán)種植土壤中空白樣品色譜分析

圖3 氟鈴脲在甘藍(lán)種植土壤中添加樣品色譜分析

圖4 氟鈴脲在甘藍(lán)植株中空白樣品色譜分析

2.3 方法的線性相關(guān)性

利用氟鈴脲母液配制成質(zhì)量濃度分別為0.02、0.05、0.10、0.50、1.00mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，并在選定的HPLC檢測條件下對標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行濃度測定（x，mg/L），所對應(yīng)色譜峰的峰面積（y）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析得到氟鈴脲的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的回歸方程為：y=102.7 x+0.490 9，相關(guān)系數(shù)為0.999 6。這表明氟鈴脲的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液與其相對應(yīng)的色譜峰面積在所選定的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，可以用來進(jìn)行含氟玲脲樣品的定量分析。

圖5 氟鈴脲在甘藍(lán)植株中添加樣品色譜分析

2.4 添加回收率試驗(yàn)

在甘藍(lán)植株和種植土壤的空白對照樣品中分別添加氟鈴脲的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使樣品中氟鈴脲的濃度分別達(dá)到0.05、0.20、1.00mg/kg，每個(gè)濃度處理重復(fù)5次，按上述所選定的方法及檢測條件進(jìn)行樣品的分析與檢測，結(jié)果見表1，結(jié)果顯示：氟鈴脲在甘藍(lán)植株和種植土壤樣品中的添加回收率在78.84%～90.72%之間，平均回收率為82.73%～85.56%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.25%～4.65%，氟鈴脲的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均在農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則允許的范圍內(nèi)；在選定的分析與檢測條件下，氟鈴脲的最小檢出量為4.0×10-10g，氟鈴脲在甘藍(lán)植株和種植土壤中的最低檢出濃度均為5.0×10-3mg/kg。

表1 氟鈴脲在甘藍(lán)植株和種植土壤中的添加回收率

3 結(jié)論

該檢測方法采用乙腈對甘藍(lán)植株和種植土壤樣品中的氟鈴脲進(jìn)行提取，用Florisil柱凈化，HPLC分析。應(yīng)用該方法對甲維·氟鈴脲11%水分散粒劑在甘藍(lán)上殘留試驗(yàn)進(jìn)行了研究，獲得了較滿意的結(jié)果，證明該方法具有操作簡單、分離效果好、線性范圍寬、回收率高、精密度好和分析效率高等特點(diǎn)，能滿足該農(nóng)藥殘留檢測的要求。

[1] 郭正元，楊仁斌，徐 珍，等.5%氟鈴脲乳油在棉田生態(tài)系統(tǒng)中的安全使用評價(jià)[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2007，26（6）：2329-2333.

[2] 盛 宇，徐 軍，劉新剛，等.分散固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速檢測棉花和土壤中氟鈴脲的殘留 [J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，12（3）：294-298.

[3] 徐 珍.氟鈴脲在菜園環(huán)境中的持久性及對幾種土壤生物學(xué)指標(biāo)的影響研究[D].長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文，2007.

[4] 王雪娟，魏金旺.氟鈴脲的液相色譜分析研究[J].農(nóng)藥，1999，9（38）：14.

[5] 何紅梅，吳俐勤，章 虎，等.蔬菜中苯甲酰脲類藥物殘留的測定方法研究[J].分析化學(xué)，2006，10（34）：1379-1383.

[6] 韓紅新，吳莉宇，徐 志，等.液質(zhì)聯(lián)用（ESI）檢測蔬菜中4種農(nóng)藥殘留[J].農(nóng)藥，2008，3（47）：198-200.

[7] 李 敏，秦金平，徐春祥.蔬菜中氟鈴脲·氟苯脲·氟蟲脲和氟啶脲的高效液相色譜分析 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（1）：204-205.

[8] 曾 鑫，柏連陽.農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)研究進(jìn)展和發(fā)展方向[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（26）：16465-16467.

[9] Alexis Peppuy，Alain Robert.Efficacy of Hexayumuron against the Fungus-Gr-owing Termite Pseudacanthotermesspiniger（Sjo.stedt）（Isoptera，Macroterm-itinae）[J].Pesticide Science，1998，54（1）：22-26.

[10] 王同濤，張瑞生，劉自友，等.氟鈴脲50%水分散粒劑的研制[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2009，30（3）：16-18.

[11] Fisher M H.Reeent Progress in Avermectin research[J].ACS Symposium Series American Chemical Society，1993，524:169.

[12] 羅 楊，龔道新，李小嬌，等.殺撲磷在柑橘和土壤中的消解動(dòng)態(tài)及殘留安全性評價(jià)[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，（9）：98-100，104.