石 磊，杜元灝

腦梗死在中風(fēng)病中所占比例最大，從目前針灸病譜研究結(jié)果看，其在神經(jīng)系統(tǒng)針灸病譜中占第一位[1]。腦梗死發(fā)生后，治療的關(guān)鍵在于迅速清除代謝產(chǎn)物、改善腦組織缺血缺氧的狀態(tài)，兩者均依賴梗死區(qū)周圍微血管網(wǎng)的機(jī)能狀態(tài)。“微血管樞紐學(xué)說(shuō)”認(rèn)為[2]：腦梗死急性發(fā)生后，腦表面?zhèn)戎ρ芟到y(tǒng)猶如一個(gè)“閘門”，“閘門”的機(jī)能狀態(tài)決定著缺血細(xì)胞的命運(yùn)?；诖耍狙芯恐貜?qiáng)調(diào)針刺對(duì)腦表面?zhèn)戎ρ芟到y(tǒng)的調(diào)節(jié)作用，前期研究發(fā)現(xiàn)針刺并非像擴(kuò)張血管藥物那樣只是簡(jiǎn)單地?cái)U(kuò)張血管[3-5]，而是能有效地改善微血管的舒縮協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)，協(xié)調(diào)流質(zhì)、流場(chǎng)的動(dòng)態(tài)耦合運(yùn)動(dòng)。研究結(jié)果提示針刺人中改善腦血管的機(jī)能狀態(tài)，促進(jìn)腦表面?zhèn)戎аh(huán)是治療腦梗死的重要途徑和環(huán)節(jié)。

本研究通過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腦梗死后大腦皮質(zhì)血流的變化，探討以下兩個(gè)問題：1）腦梗死急性期大腦皮質(zhì)血流變化規(guī)律。2）電針的干預(yù)效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康雄性Wistar大鼠（北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供），體質(zhì)量180~200g，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型對(duì)照組和電針干預(yù)組14只。

1.2 主要儀器及試劑 激光多普勒血流儀（Moor Instruments，DRT-4）；小動(dòng)物腦立體定位儀；LH202H型韓氏電針儀（中國(guó)北京）；10%水合氯醛溶液。

2 實(shí)驗(yàn)步驟

2.1 模型復(fù)制 采用Longa的腔內(nèi)線栓法阻滯大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈，復(fù)制大腦中動(dòng)脈梗死（MCAO）模型，尼龍線直徑為0.205 mm。大鼠經(jīng)10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔內(nèi)注射麻醉，仰臥于手術(shù)臺(tái)上，頸正中偏左側(cè)切口，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈，結(jié)扎頸外動(dòng)脈，頸總動(dòng)脈近心端和分叉處放置動(dòng)脈夾，在兩動(dòng)脈夾中間扎孔，插入尼龍線拴，長(zhǎng)度18~22 mm，線栓進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈稍遇阻力即停止進(jìn)線，結(jié)扎線拴和頸總動(dòng)脈，放開頸總動(dòng)脈近心端動(dòng)脈夾，縫和皮膚。

2.2 處理方法

2.2.1 激光多普勒探頭定位 大鼠經(jīng)水合氯醛麻醉，俯臥位固定，手術(shù)常規(guī)操作，沿頭皮正中縱向2 cm切口，分離皮下組織，剝離骨膜，暴露冠狀縫及矢狀縫，多普勒激光探頭固定部位為：以冠狀縫與矢狀縫結(jié)合點(diǎn)為原點(diǎn)，冠狀縫向后4 mm，矢狀縫旁開3 mm，定位后用牙科鉆將顱骨磨薄，固定激光多普勒探頭，同時(shí)動(dòng)態(tài)記錄雙側(cè)局部腦血流量（rCBF）。整個(gè)監(jiān)測(cè)過(guò)程中大鼠保持麻醉狀態(tài)，連續(xù)記錄6 h，保持溫度恒定37℃。

2.2.2 模型對(duì)照組處理因素 大鼠麻醉45 min后，首先進(jìn)行局部血流量基值的測(cè)定，再進(jìn)行MCAO模型的復(fù)制，造模后即刻再次測(cè)量局部血流量，并連續(xù)記錄6 h，不施加其他處理因素。

2.2.3 電針干預(yù)組處理因素 大鼠麻醉45 min后，首先測(cè)定局部血流量基值，再進(jìn)行MCAO模型的復(fù)制，造模后即刻再次測(cè)量局部血流量，然后進(jìn)行電針刺激，針刺人中穴，人中穴定位根據(jù)華興邦的動(dòng)物穴位圖譜，用毫針（10×40 mm，華佗牌GB2024-1994）在大鼠鼻中隔下方向上斜刺2 mm，并在該部位下約2 mm處刺入1針作為參考電極，人中穴接電針儀的正極，參考電極接負(fù)極，用15 Hz，1 mA的連續(xù)波刺激，持續(xù)20 min。電針刺激結(jié)束，繼續(xù)測(cè)定局部血流量，連續(xù)記錄6 h，不施加其他處理因素。

2.3 納入排除標(biāo)準(zhǔn) 以大鼠MCAO后即刻局部腦血流量下降至同側(cè)梗死前測(cè)定值的35%以下為成功模型；以下3種情況為造模不成功，一律剔除。1）MCAO后即刻同側(cè)腦皮質(zhì)血流量下降，但高于梗死前測(cè)定值的35%。2）MCAO后即刻對(duì)側(cè)腦血流量出現(xiàn)急劇下降，提示蛛網(wǎng)膜下腔出血。3）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取腦時(shí)見有頸內(nèi)動(dòng)脈分叉部出血的。

2.4 統(tǒng)計(jì)處理 采用SPSS18.0軟件對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，采用重復(fù)測(cè)量的方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見表1，表2。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)大鼠在MCAO前，雙側(cè)腦半球局部血流量處于平穩(wěn)狀態(tài)。MCAO即刻，模型對(duì)照組梗死半球局部腦血流量急劇下降至MCAO前的（25.18±1.87）%，伴隨著腦梗死的發(fā)作，梗死灶對(duì)側(cè)半球局部腦血流量下降至MCAO前血流量值的（86.55±1.46）%，在 MCAO 后 30 min~6 h，隨時(shí)間延續(xù)，模型對(duì)照組大鼠雙側(cè)腦半球局部血流量均有上升趨勢(shì)，但上升幅度較小，各時(shí)相前后對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。電針干預(yù)組梗死半球局部腦血流量在MCAO即刻急劇下降至（23.46±1.24）%，梗死灶對(duì)側(cè)半球局部腦血流量下降至（86.70±2.21）%，電針干預(yù)后，雙側(cè)腦半球局部血流量上升明顯，梗死半球局部腦血流量上升至（46.96±1.61）%并維持在這一水平，在 MCAO 后 30 min 和 1、2、3、4、5、6 h，與模型對(duì)照組各時(shí)相比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，電針干預(yù)使局部腦血流平均升高了20%；梗死灶對(duì)側(cè)半球局部腦血流量在電針刺激后上升至（97.46±3.28）%并維持這一水平，在MCAO后30 min和1 h，與模型對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其余各時(shí)相對(duì)比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但電針干預(yù)組血流量比值平均升高了12%，高于模型對(duì)照組。

表1 MCAO同側(cè)半球局部腦血流量變化(s)%

表1 MCAO同側(cè)半球局部腦血流量變化(s)%

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.001。

組別

表2 MCAO對(duì)側(cè)半球局部腦血流量變化(s)%

表2 MCAO對(duì)側(cè)半球局部腦血流量變化(s)%

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05。

刻 梗死30 min 梗死1 h 梗死2 h 梗死3 h 梗死4 h 梗死5 h 梗死6 h梗死前 梗死即模型對(duì)照組 100 86.55±1.46 85.29±2.12* 85.12±2.37* 88.46±2.90 87.13±4.20 88.06±3.11 86.89±1.98 87.42±3.99電針干預(yù)組 100 86.70±2.21 97.46±3.28* 101.01±4.31* 96.32±3.55 100.62±5.39 95.54±4.79 97.56±5.69 94.48±3.71組別

4 結(jié)論

電針干預(yù)可顯著提高M(jìn)CAO模型大鼠局部腦血流量，并且，電針干預(yù)可同步提高梗死灶對(duì)側(cè)半球局部腦血流量，由此可增加梗死區(qū)周圍腦血流灌注。

5 討論

在筆者的前期研究中[3-6]，取大鼠腦組織表面的軟腦膜血管網(wǎng)為樣本，從腦血管平滑肌細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，探討電針干預(yù)對(duì)腦血管舒縮運(yùn)動(dòng)相關(guān)信使分子的影響。研究結(jié)果表明，電針人中穴干預(yù)能夠通過(guò)肌醇磷脂信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)腦血管收縮運(yùn)動(dòng)；并通過(guò)環(huán)核苷酸信號(hào)途徑調(diào)節(jié)腦血管的舒張運(yùn)動(dòng)，通過(guò)對(duì)痙攣、舒張兩方面的調(diào)節(jié)、平衡，使腦表面動(dòng)脈血管機(jī)能狀態(tài)趨向于正?；?，與本研究結(jié)果一致，而相關(guān)的臨床研究同樣證實(shí)了這一干預(yù)作用的后效應(yīng)[7]。

本研究的目的在于探討電針干預(yù)對(duì)腦梗死側(cè)支循環(huán)的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，MCAO后即刻，梗死灶同側(cè)半球局部腦血流顯著下降，與梗死前血流量值相比，腦血流平均下降至24.32%（最小值16.01%，最大值33.79%）。電針治療后，腦血流顯著升高至梗死前血流量的46.96%，平均升高幅度20%（最小11.90%，最高32.95%）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，通過(guò)激光多普勒檢測(cè)MCAO之后，梗死半球局部腦血流量顯著下降，而對(duì)側(cè)腦半球（非梗死側(cè)）局部腦血流量也出現(xiàn)不同程度下降，相關(guān)的研究也證實(shí)了這一現(xiàn)象[8-9]，同樣值得進(jìn)一步深入研究。

[1]杜元灝，李 晶，孫東煒，等.中國(guó)現(xiàn)代針灸病譜的研究[J].中國(guó)針灸，2007，27（5）：373－379.

[2]杜元灝.缺血性中風(fēng)治療焦點(diǎn)的思考[C].天津：中國(guó)針灸學(xué)會(huì)腦病科學(xué)專業(yè)委員會(huì)成立暨第一屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文集，2007：42－46.

[3]孫冬瑋，杜元灝，石 磊，等.電針?biāo)疁涎▽?duì)腦梗塞大鼠腦血管細(xì)胞內(nèi)三磷酸肌醇（IP3）及二酰基甘油含量的影響[J].針刺研究，2008，33（6）：392-396.

[4]李桂平，石 磊，杜元灝，等.腦梗死早期側(cè)支循環(huán)重建及電針干預(yù)效應(yīng)研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011,30（2）:102-104.

[5]李 晶，杜元灝.腦梗死與血管新生[J].天津中醫(yī)藥，2007，24（5）：435－437.

[6]林 雪,杜元灝.電針刺激對(duì)急性腦梗塞大鼠腦血管動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞cAMP的影響[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2007,13（11）:860-862.

[7]賀 軍.針刺治療缺血性腦梗死后遺癥期180例的隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn)[J].天津中醫(yī)藥，2011，28（4）：295－297.

[8]龍 潔.腦血管疾病[M].第5版.北京：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2004：5.

[9]Gold L,Lauritzen M.Neuronal deactivation explains decreased cerebellar blood flow in response to focal cerebral ischemia or suppressed neocortical function[J].Pnas,2002,99(11):7699-7704.