程永貴 段窮 孫大勇

近年來隨著廣譜抗菌藥物及免疫抑制劑在臨床的廣泛應(yīng)用及介入治療的不斷增加，使患者罹患真菌感染的比例增加，特別是在中老年患者及應(yīng)用免疫抑制劑的患者，在念珠菌引起的泌尿系統(tǒng)感染在泌尿系統(tǒng)感染的致病菌中已由2001年的的第十位上升到2010年的第五位。我院自2001年1月至2010年12月期間從門診和住院患者急、慢性尿路感染患者中分離到的301株念珠菌，年齡從48歲到92歲，其中女265例(占88%)，男36例(占12%)，用科瑪嘉顯色培養(yǎng)基和法國梅里埃公司的VITEK32自動微生物鑒定儀鑒定到種，并用ROSCO紙片法對常用抗真菌藥物進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，了解我院念珠菌的耐藥情況，為臨床提供參考

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 實(shí)驗(yàn)用菌株來自2001年1月至2010年12月期間吉林省人民醫(yī)院泌尿系感染的患者共檢出301株念珠菌，其中白念珠菌 210株(占69.8%)，光滑念珠菌 55株(占18.2%)，熱帶念珠菌30株(占 10%)，克柔念珠菌3株(占1%)，其他念珠菌3株(占1%)。尿液為晨尿(留取方法為:清洗外陰后，留取中段尿，2 h內(nèi)送檢)［2］。用法國生物梅里埃公司的VITEK32尿卡(UID-3)進(jìn)行培養(yǎng)及計數(shù)，用科瑪嘉顯色培養(yǎng)基鑒定到種，顯示翠綠色為白念珠菌，籃色為熱帶念珠菌，藕合色為光滑念珠菌，粉色為克柔念珠菌，其他顏色用法國梅里埃公司的VITEK32的念珠菌鑒定卡(YBC)細(xì)菌鑒定到種。

1.1.2 抗菌藥物及培養(yǎng)基 抗真菌藥物紙片、真菌培養(yǎng)基(Shadomy)均為丹麥ROSCO公司產(chǎn)品。購自廣洲迪景公司。

1.2 方法

1.2.1 尿路感染的尿液標(biāo)本應(yīng)用法國生物梅里埃公司的VITEK32尿卡(UID-3)進(jìn)行培養(yǎng)及計數(shù)，且細(xì)菌數(shù)＞104cfu/ml為陽性。

1.2.2 菌種鑒定 用科瑪嘉顯色培養(yǎng)基鑒定到種，顯示翠綠色為白念珠菌，籃色為熱帶念珠菌，藕合色為光滑念珠菌，粉色為克柔念珠菌，無色及顏色不清者用法國梅里埃公司的VITEK32的念珠菌鑒定卡(YBC)細(xì)菌鑒定到種。

1.2.3 抗生素敏感試驗(yàn) 采用K-B法。用ROSCO公司生產(chǎn)的藥敏紙片兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶(直徑均為9 mm)，采用其專用念珠菌藥敏培養(yǎng)基(Shadomy)。質(zhì)控菌株為白念珠菌ATCC64550和白念珠菌ATCC64548及光滑念珠菌2238。先將Shadomy培養(yǎng)基叢4℃冰箱中取出放在室溫20 min左右，挑取純化的念珠菌用生理鹽水制成0.5麥?zhǔn)蠞舛染?，再用生理鹽水1∶1稀釋，用拭子取稀釋液涂布于Shadomy瓊脂表面，每次旋轉(zhuǎn)120°，注意不要在培養(yǎng)基表面劃出劃痕，10 min內(nèi)貼上藥敏紙片，放入35℃孵箱中孵育18～24 h，光滑念珠菌延長孵育時間到48 h判讀結(jié)果。

1.2.4 敏感性判定 用廠家提供的說明書判定，兩性霉素B沒有耐藥值，10～14 mm為中介，≥15 mm為敏感;氟康唑≤11 mm為耐藥，12～19 mm為中介，≥20 mm為敏感;伊曲康唑沒有耐藥值，10～14 mm為中介，≥15 mm為敏感，5-氟胞嘧啶≤22 mm為耐藥，23～29 mm為中介，≥30 mm為敏感。

2 結(jié)果

2.1 念珠菌的種類 檢出301株念珠菌中，白念珠菌210株(占69.8%)，光滑念珠菌55株(占18.2%)，熱帶念珠菌33株(占11%)，其他念珠菌3株(占1%)。與全國的比例差不多。白念珠菌仍是尿路感染最常見的真菌［3］。

2.2 藥敏的檢測 除克柔念珠菌對氟康唑天然耐藥及光滑念珠菌對氟康唑?yàn)闈舛纫蕾囆?S-DD)外，其余念珠菌對常用抗真菌藥物均有很好的敏感性。詳見表1。

表1 臨床常見抗真菌藥物對念珠菌的敏感性(%)

3 討論

念珠菌廣泛存在于自然界，也存在于正常人口腔，上呼吸道，腸道及陰道，一般在正常機(jī)體中數(shù)量少，不引起疾病。為條件致病性真菌。［4］，只有在機(jī)體抵抗力下降和(或)念珠菌過度生長時，才可能成為致病菌。念珠菌尿感染產(chǎn)生的因素有:①應(yīng)用抗生素治療引起正常菌叢失調(diào)，尤其是長期大量應(yīng)用廣譜抗生素時。②激素、免疫抑制藥的使用以及腫瘤患者行放射治療和(或)化療，使機(jī)體的防御功能減弱。③留置導(dǎo)尿管，尿路畸形等尿路局部抵抗力下降。④慢性嚴(yán)重疾病致使體質(zhì)極度虛弱。⑤糖尿病患者，抗念珠菌的功能降低，當(dāng)血糖＞8.34 mmol/L(150 mg/dl)時，念珠菌生長率提高。⑥尿pH:念珠菌生長的適宜pH是5.1～6.4，正常尿液呈酸性，有利于念珠菌生長。據(jù)報道8%的院內(nèi)尿路感染由腸球菌引起，居第5位［5］。其發(fā)生多與留置導(dǎo)尿管、其他器械操作和尿路結(jié)構(gòu)異常有關(guān)。一般表現(xiàn)為膀胱炎、腎盂腎炎，少數(shù)表現(xiàn)為腎周圍膿腫等［6］。

由于念珠菌中不同菌對抗真菌藥物的耐藥性差異很大，因此臨床分離的念珠菌屬應(yīng)鑒定到種。

雖然氟康唑在臨床已經(jīng)應(yīng)用了很長時間，用量大，但對主要的念珠菌仍保持了很高的有效性，仍可作為治療念珠菌引起的尿路感染的一線用藥［1］

［1］ 段窮，王曉紅，魏崴.吉林省人民醫(yī)院常用的3種抗真菌藥物敏感性研究.吉林醫(yī)學(xué)，2009，30(21):2668-2669.

［2］ 李景云，馬越，張力，等.臨床52家醫(yī)院常見分離菌株的藥物敏感性監(jiān)測.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，29(5):452-453.

［3］ Shepard BD，Gilmore MS.Antibiotic-resistant enteroocci:the mechanisms and dynamics of drug introduction and resistance.Microbes Infect，2002，4(2):215-224.

［4］ 趙心懋，徐英春，段瓊，等.氟康唑體外抗菌活性及五種體外敏感試驗(yàn).中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2006，29:128.

［5］ 劉小平，李建武，樊尚榮，等.臨床常見念珠菌對5種抗真菌藥物的敏感性.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2005，15(6):671.

［6］ 徐英春，王澎，原英，等.氟康唑和伏立康唑?qū)湍妇咕钚缘难芯?中國抗感染化療雜志，2003，3:277.