高朋杰 王瑋 解用江 王洪霞 王麗杰

一氧化氮(NO)是機體內(nèi)重要的信使分子和效應(yīng)分子，參與細胞信息的傳遞、介導(dǎo)細胞免疫和炎癥毒性作用［1］。慢性牙周炎的病理改變是牙槽骨的破壞和吸收［2］。其發(fā)生機制主要是長期慢性炎癥導(dǎo)致的血管調(diào)節(jié)功能失控，使局部血流動力學(xué)發(fā)生改變，導(dǎo)致局部牙槽骨組織血流量下降，造成局部骨代謝的失調(diào)［3］。而NO在此過程中發(fā)揮重要作用。吸煙是牙周炎的高危因素，可通過多種途徑對牙周組織產(chǎn)生影響［4］。在此檢測吸煙合并慢性牙周炎患者基礎(chǔ)治療前后齦溝液內(nèi)NO含量的改變，結(jié)合牙周炎臨床癥狀的改善來探討吸煙與牙周炎的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與材料 Whatman3#濾紙條(2mm 10mm，3 m);NO免疫熒光試劑盒(biovision，美國);BP211 d萬分之一電子天平(德國Sartorius公司);D-37520離心機(美國Thermo公司);時間分辨熒光讀數(shù)儀(Wallac Victor2，美國)。

1.2 實驗方法

1.2.1 病例選擇 在大慶油田總醫(yī)院口腔內(nèi)科門診選取20位以《牙周病學(xué)》(3版人民出版社)標(biāo)準(zhǔn)確診患有廣泛性慢性牙周炎患者，全口牙中有附著喪失和骨吸收。所有患者均無其他全身代謝性疾病，近3個月內(nèi)沒有服用過任何抗生素或激素類藥物，半年內(nèi)未接受過牙周治療。婦女無妊娠。將20例患者隨機分為吸煙組和不吸煙組。吸煙標(biāo)準(zhǔn)為每天吸煙10支以上或吸煙時間三年以上。所有患者均知情同意。

1.2.2 基礎(chǔ)治療前后牙周臨床指標(biāo)的檢測 使用牙周探針對各組牙周炎進行牙周檢查，每名患者選取雙側(cè)上下前后牙各一顆，記錄牙周探診深度(PD)、附著喪失(AL)，探診出血(BOP)等。所有患者第一次就診先進行口腔衛(wèi)生宣教后施以必要咬合調(diào)整、齦上潔治術(shù)，牙面進行拋光。一周后復(fù)診進行齦下刮治術(shù)、根面平整術(shù)。所有臨床檢查均由同一位醫(yī)生完成。治療過程中避免外源性高濃度亞硝酸鹽的給入。吸煙者始終保持吸煙習(xí)慣。牙周基礎(chǔ)治療后4周復(fù)診，再次檢查上述 PD、AL、BOP 等指標(biāo)。

1.2.3 齦溝液樣本的采集 在基礎(chǔ)治療前每名患者仍選取上述雙側(cè)上下前后牙，清水漱口，吹干牙面，棉卷隔濕，用4條Whatman3#濾紙條分別插入取樣每牙的頰腭(舌側(cè))、近中、遠中牙周袋內(nèi)，留置60 s后取出。將每顆牙的4條濾紙條作為1個樣本，密封在液氮中保存待測試。牙周基礎(chǔ)治療后4周按同樣方法采集齦溝液樣品保存。

1.2.4 NO含量的檢測 將裝濾紙條的冷凍液從液氮中取出放入4℃冰箱中解凍，在每一個試管中加入300 μl三蒸水將4條濾紙條完全浸沒，3000r/min 10min離心后將濾紙條丟去，保留上清液于4℃冰箱。采用NO免疫熒光檢測試劑盒，按說明書進行操作，按所給公式換算出每個樣本中硝酸鹽和亞硝酸鹽濃度，得出NO的濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析，實驗組與對照組計量資料的差異采用單因素方差分析或兩獨立樣本t檢驗?；A(chǔ)治療前后臨床指標(biāo)的差異采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。齦溝液NO含量計量資料差異采取兩樣本比較的t檢驗，檢驗標(biāo)準(zhǔn)a=0.01.

2 結(jié)果

2.1 治療前，吸煙組與不吸煙組的各項牙周臨床指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。治療后，不吸煙組的下降幅度明顯高于吸煙組。

表1 吸煙與不吸煙組基礎(chǔ)治療前后牙周指標(biāo)比較()

表1 吸煙與不吸煙組基礎(chǔ)治療前后牙周指標(biāo)比較()

牙周指標(biāo)治療后吸煙組 不吸煙組 P值 吸煙組 不吸煙組 P值治療前＜0.05 AL(mm) 4.1±0.6 3.5±0.6 ＞0.05 3.5±0.9 2.4±0.7 P＜0.05 BOP(mm) 86 93 ＞0.05 53 26 P＜0.05 PD(mm) 4.7±0.5 4.6±0.6 ＞0.05 4.0±0.4 3.6±0.4 P

2.2 牙周基礎(chǔ)治療前后齦溝液NO含量比較。

表2 吸煙組和不吸煙組基礎(chǔ)治療前后NO含量比較(μmol/L，)

表2 吸煙組和不吸煙組基礎(chǔ)治療前后NO含量比較(μmol/L，)

測量時間NO吸煙組 不吸煙組治療前＜0.017.21±2.13 5.33±1.28治療后 5.01±0.6 1.37±0.21 P值 P＜0.01 P

3 討論

正常人口腔內(nèi)產(chǎn)生的NO是由L-精氨酸在一氧化氮合酶的催化下生成L-瓜氨酸時釋放的。一些研究已證實NO對維持口腔內(nèi)正常菌群的平衡以及抗微生物感染有直接影響。同時，適量的NO對牙周組織的健康及功能的正常發(fā)揮起著重要作用［5］。在牙周炎癥狀態(tài)下，血管內(nèi)皮素的含量顯著增高，NO的水平相應(yīng)增高來對抗血管內(nèi)皮素所造成的牙周組織小血管及微血管的強烈收縮，在此防御反應(yīng)過程中，過量產(chǎn)生的NO使擴血管因子與縮血管因子之間的關(guān)系失衡，通過活化多重級聯(lián)信號引發(fā)炎癥級聯(lián)瀑布反應(yīng)，促進炎癥發(fā)展［6］。NO的大量生成也能導(dǎo)致巨噬細胞、中性粒細胞等的自身凋亡，間接造成牙周組織的損傷。以前的動物實驗研究也證實了牙周組織中的NO確實參與了牙周病的整個病理過程，在牙周炎的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用［7］。大量流行病學(xué)調(diào)查資料顯示［8，9］，吸煙可通過多種途徑對牙周產(chǎn)生影響:吸煙可以使牙周組織缺氧;可以引起骨質(zhì)疏松;降低免疫系統(tǒng)功能;還可使口腔內(nèi)處于缺氧狀態(tài)，牙周氧化還原電勢下降，有利于厭氧菌生長［10］。

齦溝液來自并通過牙周組織，疾病時其中成分的變化可較準(zhǔn)確反應(yīng)牙周組織的狀態(tài)。本研究利用特異性強、敏感性高、速度快的免疫熒光法檢測牙周炎基礎(chǔ)治療前后齦溝液NO的含量并進行比較，同時觀察牙周臨床指標(biāo)的變化情況，得出結(jié)論:吸煙與不吸煙患者基礎(chǔ)治療后齦溝液NO含量均下降，但吸煙者下降幅度較小，臨床指標(biāo)改善程度較差。提示基礎(chǔ)治療是牙周炎的常規(guī)治療，對于吸煙合并慢性牙周炎的患者單純采取基礎(chǔ)治療并不能根本解決炎癥問題，戒除吸煙對慢性牙周炎的治療有積極作用。同時提示我們直接取齦溝液樣本測定NO含量而不是采用收集靜脈血的方式測量其NO含量更容易被患者接受，對牙周炎活動期的診斷以及預(yù)防疾病的發(fā)展可能是一項簡單易行的措施。

［1］李波.NO與牙周病周期性發(fā)病關(guān)系的研究.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2006，6(6):27-28.

［2］孟煥新.牙周病學(xué).第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008.

［3］陳世璋.牙周炎病人牙齦組織中ET和NO改變與局部骨吸收的研究.中國骨質(zhì)疏松雜志，1999，5(#):40-43.

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［5］龔斌.一氧化氮在牙周組織中的生物學(xué)作用.口腔材料器械雜志，2002，11(2):80-81.

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