李文會(huì)，管越強(qiáng)＊，張耀紅，葛 京，高 倩，徐彩利

（1.河北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北保定 071002；2.保定市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，河北保定 071051）

車輪蟲是一類寄生性纖毛蟲原生動(dòng)物，廣泛寄生于淡海水魚類、甲殼類、貝類和兩棲類的體表、鰓、鰭、輸尿管、膀胱和生殖系統(tǒng)等部位，可不同程度地給宿主造成危害，故對(duì)其研究既具有理論意義，又具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值［1］。它主要寄生在魚類鰓絲上，當(dāng)其大量寄生時(shí)會(huì)影響魚類的正常呼吸，影響魚的健康生長(zhǎng)甚至引起魚類死亡。2009年4月～10月白洋淀水生動(dòng)物寄生蟲區(qū)系調(diào)查表明，白洋淀水生動(dòng)物寄生蟲種類中63%隸屬原生動(dòng)物，其中纖毛蟲中的車輪蟲危害很大，被調(diào)查的所有魚類均有寄生，對(duì)當(dāng)?shù)厮a(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)和水生動(dòng)物物種資源造成不利影響，對(duì)魚苗的危害尤為嚴(yán)重［2］。鑒于對(duì)白洋淀魚類寄生車輪蟲還沒有種類鑒定的相關(guān)報(bào)道，有必要進(jìn)行相關(guān)研究，從而對(duì)病原有正確的認(rèn)識(shí)，才能有效的預(yù)防和控制此類疾病的發(fā)生及發(fā)展。

國(guó)際上小車輪蟲屬已經(jīng)有10種以上的有效記錄種［3］，我國(guó)發(fā)現(xiàn)了6種，分別為周叢小車輪蟲［T.epizootica（Rabbe，1950）Srámek－Husek，1953］，流 行 小 車 輪 蟲 ［T.epizootica（Raabe，1950）Srámek－Husek，1953］，勞牧小車輪蟲［T.lomiXu，Song＆Warren，1999］，纖細(xì)小車輪蟲［T.subtilis（Lom，1959）Lom ＆Haldar，1977］，卡普小車輪蟲［T.carpiDuncan，1 9 7 7］，新 小 車 輪 蟲 ［T.nova，Tang，2005］［4］；國(guó)際上三分蟲屬發(fā)現(xiàn)15種，我國(guó)發(fā)現(xiàn)了2種，分別為鱗三分蟲［T.bulosa（Davis，1947）Lom，1959］和大型三分蟲［T.macrosomaBasson ＆ Van As，1987］。

1 材料與方法

1.1 材料

2009年4月～2010年10月每月中旬從白洋淀采集魚類，參考《河北省魚類》［5］對(duì)魚類進(jìn)行鑒定，并進(jìn)行鏡檢判斷寄生蟲類別，同時(shí)用自制吸管收集車輪蟲為鑒定種類做準(zhǔn)備。

1.2 染色和鑒定方法

采用宋微波［6］提出的新改良的干銀染色法以顯示車輪蟲的附著盤結(jié)構(gòu)；利用吉姆薩染色法［7］顯示車輪蟲細(xì)胞核的形態(tài)結(jié)構(gòu)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)模式為M in－Max（Mean±SD），即最小值－最大值（算術(shù)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）［8］。種類鑒定依據(jù)Lom（1958）的“統(tǒng)一特定方法”和Basson L等［9］的齒體定位描述法進(jìn)行。顯微照片使用奧林巴斯BX－51顯微鏡和Canon EOS 450D數(shù)碼相機(jī)拍攝完成，齒體定位圖采用Corel DRAW 11.0軟件繪制完成［10］。

2 結(jié)果

2.1 小車輪蟲屬

小車輪蟲的分類地位為寡膜綱［Oligohymenophoar de Puytoacretal.，1974］、緣毛目［Perirtiehida Setin，1879］、游走亞目［Mobilina Khal，1933］、車輪蟲 科 ［Trichodinidae Claus，1874］、小 車 輪 蟲 屬［Trichodinella（Raabe，1950）Srame－Husek，1953］。屬的特征：齒體具直的齒鉤；較發(fā)達(dá)的齒錐，齒錐的前方形成明顯突起，并嵌合于前面齒體的齒鉤和齒棘之間的凹槽內(nèi)；齒棘極為短小，形成向后的纖細(xì)彎鉤狀或者缺失；口圍繞度約為180°～270°［8］。本調(diào)查的3個(gè)種類均為淡水魚寄生種類，口圍繞度約為170°～180°。

2.1.1 周叢小車輪蟲 ［Trichodinellaepizootica（Rabbe，1950）Sramek－Husek，1953］采集時(shí)間及地點(diǎn)：2010年6月、8月和10月，白洋淀。

宿主：鯽魚 （Carassiusauratus）。

形態(tài)描述（圖1－1，圖2A～圖2C）：一類小型的專性寄生于魚類鰓表的寄生蟲，本調(diào)查只在鯽魚上收集到周叢小車輪蟲?；铙w側(cè)面觀呈頭盔狀，以反口面向前作螺旋狀運(yùn)動(dòng)。干銀染色標(biāo)本顯示其附著盤中央無明顯顆粒物分布，部分標(biāo)本顯示中央著色不深。齒鉤的前后緣平直呈一角度使齒鉤呈上大下小的倒三角狀，一些標(biāo)本表現(xiàn)出有不明顯的后鉤突，齒鉤外切緣一般平直，與緣膜平行；具有發(fā)達(dá)的齒錐，齒錐前突起緊密嵌合于前一齒體的齒體凹槽內(nèi)，齒錐；齒棘細(xì)小，與Y軸垂直，且超過Y軸，向后彎曲呈鉤狀。

干銀染色標(biāo)本測(cè)量：標(biāo)本量為60。蟲體直徑21～30（24.5±4.9）μm，附著盤直徑16～25（20.4±4.2）μm，齒環(huán)直徑8.5～16（11.5±2.2）μm，緣膜寬1～2.5（1.9±0.1）μm，輻線數(shù)4～5條；齒體數(shù)18～24個(gè)，齒體縱長(zhǎng)5.5～6.5（5.7±0.3）μm，齒鉤長(zhǎng)4～5（4.8±0.1）μm，齒錐寬1～2（1.5±0.3）μm；口圍繞度180°。

吉姆薩染色標(biāo)本：大核呈馬蹄型，外徑約18 μm，內(nèi)徑約10μm，大核口徑約6.5μm，小核未見。

2.1.2 纖 細(xì) 小 車 輪 蟲 ［Trichodinellasubtilis（Lom，1959）Lom ＆ Haldar，1977］采集時(shí)間及地點(diǎn)：2010年6月和10月，白洋淀。

宿主：鯽魚（Carassiusauratus）。

形態(tài)描述（圖1－2，圖2D）：一種小型寄生蟲，專性寄生魚類鰓表，借助于附著盤結(jié)構(gòu)在鰓絲上作快速的螺旋運(yùn)動(dòng)攝取食物，在運(yùn)動(dòng)過程中對(duì)鰓絲造成組織損傷。干銀染色標(biāo)本顯示出蟲體中央無明顯顆粒分布，齒鉤較粗大，與Y軸略呈一定角度，外切緣較平直，與緣膜平行，一般具有齒鉤前突和后突起，部分齒鉤后突起不明顯，齒鉤連接和齒錐連接較周叢小車輪蟲粗大；齒錐發(fā)達(dá)，齒錐前突達(dá)到1／2YY＋1軸，齒錐前突起嵌合于前一齒體的齒鉤和齒錐之間的凹槽內(nèi)，無后突起，齒錐頂點(diǎn)鈍圓，略超過Y軸；無齒棘。

干銀染色標(biāo)本測(cè)量：標(biāo)本量為9。蟲體直徑23～28.5（25.7±5.9）μm，附著盤直徑21～23.5（22.2±1.3）μm，齒環(huán)直徑11～13（12.2±1.2）μm，緣膜寬1～2（1.7±0.2）μm，輻線數(shù)4條～5條；齒體數(shù)21個(gè)～25個(gè)，齒體縱長(zhǎng)5～6（5.2±0.4）μm，齒長(zhǎng)2～3（2.8±0.1）μm，齒錐寬1～2（1.5±0.3）μm，口圍繞度170°～180°。

吉姆薩染色標(biāo)本：大核呈馬蹄型，外徑約17 μm，內(nèi)徑約11μm，大核口徑約7μm，小核未見。

2.1.3 卡普小車輪蟲［TrichodinellacarpiDuncan，1977］采集時(shí)間及地點(diǎn)：2010年6月和8月，白洋淀。

宿主：鯽魚（Carassiusauratus）、中華鳑鮍（Rhodeussinensis）。

形態(tài)描述（圖1－3，圖2E～圖2F）：一種小型寄生蟲，活體側(cè)面觀呈氈帽狀，專性寄生于魚類鰓表。干銀染色標(biāo)本顯示出蟲體中央無顆粒分布，齒鉤粗短，所占面積大于1／2YY＋1，具有齒鉤前突和后突起，齒鉤前后緣和外切緣平直，齒鉤連接粗壯，使齒鉤呈較規(guī)則的長(zhǎng)方形；齒錐較發(fā)達(dá)，相互間嵌合不夠緊密，齒錐前突起纖細(xì)，超過Y＋1軸，無齒錐后突，齒錐頂點(diǎn)一般貼于Y軸上或略超過Y軸，棘缺失。

干銀染色標(biāo)本測(cè)量：標(biāo)本量為18。蟲體直徑20～25（22.4±2.9）μm，附著盤直徑15～23（18.4±5.9）μm，齒環(huán)直徑9～12.5（10.8±1.0）μm，緣膜寬1～2.5（1.9±0.2）μm，輻線數(shù)4～5條；齒體數(shù)17～25個(gè)，齒體縱長(zhǎng)4～6（4.2±0.3）μm，齒長(zhǎng)1.5～2.5 （2.2 ± 0.6）μm，齒 錐 寬 1 ～2（1.5±0.3）μm；口圍繞度170°～180°。

吉姆薩染色標(biāo)本：大核呈U型，外徑約16μm，內(nèi)徑約10μm，大核口徑約6.5μm，小核未見。

2.2 三分蟲屬

三分蟲屬（TripartiellaLom，1959）的分類地位：與小車輪蟲同屬于車輪蟲科（Trichodinidae Claus，1874）。屬的特征：齒體的齒鉤通常斜向后方；齒錐纖細(xì)，齒鉤的基部與齒錐共同形成前方的突出，并嵌合于前面齒體的凹口；齒棘細(xì)且直；齒體間結(jié)合緊密；口圍繞度180°～290°［8］。

2.2.1 鱗 三 分 蟲 ［Tripartiellabulosa（Davis，1947）Lom，1959］采集時(shí)間及地點(diǎn)：2010年6月、8月和10月，白洋淀。

宿 主：鯽 魚 （Carassiusauratus）、麥 穗 魚（Pseudorasboraparva）、圓尾斗魚（Macropodus ocellatus）

形態(tài)描述（圖1－4，圖2G～圖2H）：一種小型、魚類鰓表專性寄生蟲。活體側(cè)面觀氈帽狀且形狀不太規(guī)則，身體有部分扭曲，反口面觀橢圓形或圓形。干銀染色標(biāo)本顯示出蟲體中央無顆粒分布，但是蟲體中央部分著色不是完全的黑色。齒鉤較粗，前后緣及外切緣比較圓滑，略呈倒三角狀，略見后突起，齒鉤前緣一般位于1／2YY＋1處，齒鉤連接纖細(xì)；齒錐發(fā)達(dá)，齒錐前突起超過Y＋1軸，嵌合于前一齒體的齒鉤和齒棘形成的凹槽內(nèi)，齒錐頂點(diǎn)貼于Y軸上；齒棘短小可見。

干銀染色標(biāo)本測(cè)量：標(biāo)本量為30。蟲體直徑17.5～27（22.0±6.7）μm，附著盤直徑14～22（17.7±5.8）μm，齒環(huán)直徑7～10（8.8±1.3）μm，緣膜寬1～2.5μm，輻線數(shù)4～5條；齒體數(shù)19～21個(gè)，齒體縱長(zhǎng)4～6（5.2±0.3）μm，齒長(zhǎng)3～5（3.2±0.6）μm，齒錐寬1～2（1.6±0.3）μm，齒棘長(zhǎng)0.5～1（0.7±0.1）μm；口圍繞度約190°。

吉姆薩染色標(biāo)本：無。

2.2.2 大型三分蟲［TripartiellamacrosomaBasson ＆ Van As，1987］采集時(shí)間及地點(diǎn)：2010年6月、8月和10月，白洋淀。

宿 主： 鯽 魚 （Carassiusauratus）、 鰷（Hemiculterleucisculus）。

形態(tài)描述（圖1－5，圖2I～圖2J）：一種小型、魚類鰓表專性寄生蟲。干銀染色標(biāo)本顯示出蟲體中央無明顯顆粒分布，齒鉤細(xì)長(zhǎng)如棒狀，具有明顯的前突和后突起，齒鉤前突超過Y＋1軸；齒錐不發(fā)達(dá)，具有前突起，前突起頂點(diǎn)鈍圓，齒錐頂點(diǎn)一般位于1／2YY＋1處，具有齒棘，齒棘短直。貼近于Y＋1軸，且與Y＋1軸平行。

干銀染色標(biāo)本測(cè)量：標(biāo)本量為9。蟲體直徑20.5～27（23.1±4.3）μm，附著盤直徑16～23（19.7±5.3）μm，齒環(huán)直徑8～12（9.6±1.8）μm，緣膜寬1.5～2（1.6±0.1）μm，輻線數(shù)4～5條；齒體數(shù)23個(gè)～26個(gè)；齒體縱長(zhǎng)7.5～9（8.1±0.3）μm，齒長(zhǎng)5～6（5.2±0.7）μm，齒錐寬2～2.5（2.1±0.3）μm，齒錐長(zhǎng)3～4（3.5±0.4）μm；口圍繞度290°。

吉姆薩染色標(biāo)本：無。

圖1 車輪蟲附著盤結(jié)構(gòu)齒體定位圖（齒體定位描述中縱軸有3個(gè)，從左至右分別為Y＋1軸、Y軸、Y－1軸）Fig.1Diagrammatic drawings of the denticles of trichodinids（Three vertical axis in the denticle was showed as Y＋1axis，Y axis and Y－1axis from left to right，respectively）

3 討論

本研究中報(bào)道的周叢小車輪蟲與Tao Y F等［11］報(bào)道的周叢小車輪蟲相比較，齒體數(shù)目基本吻合，其余部位形態(tài)特征也基本吻合，與何根林［12］報(bào)道過的周叢小車輪蟲種群一相比較，除具有不明顯的后鉤突外其他形態(tài)學(xué)特征和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)基本吻合，故確定為周叢小車輪蟲。本研究中報(bào)道的纖細(xì)小車輪蟲與趙元莙等［1］報(bào)道的纖細(xì)小車輪蟲相比較，除部分干銀染色標(biāo)本齒體不見前鉤突外，形態(tài)學(xué)特征和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)基本吻合，故確定此種為纖細(xì)小車輪蟲。本研究中報(bào)道的卡普小車輪蟲與唐發(fā)輝［4］報(bào)道的卡普小車輪蟲相比較，形態(tài)學(xué)特征基本吻合，尤其具有長(zhǎng)方形的齒鉤和完全缺失的齒棘的形態(tài)特征；統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)中除蟲體直徑明顯偏小外，其他內(nèi)部結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)基本吻合，故將其確定為卡普小車輪蟲。中華鳑鮍是卡普小車輪蟲的新宿主記錄。本研究中報(bào)道的磷三分蟲與唐發(fā)輝［4］報(bào)道的相比，除齒體的齒鉤和齒錐形成的角度略小以外，形態(tài)特征和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)基本吻合，故確定該種為鱗三分蟲。麥穗魚和圓尾斗魚是鱗三分蟲的新宿主記錄。本研究中報(bào)道的大型三分蟲與Basson L等［13］報(bào)道的大型三分蟲相比較，標(biāo)本的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)相對(duì)偏大一些，齒體數(shù)目和附著盤形態(tài)特征基本吻合，故確定該種為大型三分蟲。白鰷?zhǔn)谴笮腿窒x的新宿主記錄。

本研究是白洋淀地區(qū)車輪蟲科小車輪蟲屬和三分蟲屬首次細(xì)致的分類描述，也是華北地區(qū)車輪蟲科的首次分類描述。研究結(jié)果將有助于闡明白洋淀魚類寄生車輪蟲區(qū)系組成，同時(shí)也可為我國(guó)其余地區(qū)的相關(guān)研究提供參考。

A，B.周叢小車輪蟲附著盤；C.周叢小車輪蟲口圍繞度；D.纖細(xì)小車輪蟲附著盤；E，F(xiàn).卡普小車輪蟲附著盤；G，H.鱗三分蟲附著盤，H.正在形成新齒體的磷三分蟲附著盤；I，J.大型三分蟲附著盤（比例尺＝10μm）A，B.The adhesive disc of Trichodinella epizootica ；C.The adoral siliary spiral of T.epizootica；D.The adhesive disc of T.subtilis；E，F(xiàn).The adhesive disc of T.carpi；G，H.The adhesive disc of Tripartiella bulosa；H.The adhesive disc of Tripartiella bulosa，in which new denticle was forming；I，J.The adhesive disc of T.macrosoma（Scale bar＝10μm）

圖2 車輪蟲附著盤結(jié)構(gòu)（自干銀染色標(biāo)本）Fig.2Photomicrographs of dry silver impregnated adhesive discs of trichodinids

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