吳紅松

（菏澤學院，山東菏澤 274015）

中華鱉（Trionyxsinensis）隸屬于龜鱉目（Testudinata）、鱉科（Trionychidae）、鱉屬（Trionyx），是我國重要的特種經濟動物，有較高的食用價值和藥用價值。作為變溫動物，中華鱉對外界溫度變化十分敏感，溫度的高低會直接影響其運動與攝食。每年10月底至翌年4月初，當水溫低于約15℃時，中華鱉潛入水底泥沙中冬眠，在此期間動物不攝食，代謝率降低，僅靠體內積累的營養(yǎng)物質維持較低的代謝過程［1］。體重損失10%～15% 。

近年來，對于中華鱉的研究，在免疫功能方面較多［2－4］，在鱉的疾病防治［5］、系統(tǒng)發(fā)育［6］及分子生物學［7］、組織學［8］方面也都有報道，但對中華鱉冬眠期消化道生理生化方面的研究少見報道。本文對中華鱉冬眠期消化酶的活性進行了初步探討，旨在豐富其消化道生理生化的研究內容并為中華鱉人工飼料研制提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

2010年1月底，自菏澤黃河養(yǎng)殖場購買6只4齡中華鱉，平均體重為672.25g。試驗過程中將中華鱉置于2.0m×1.5m×1.5m的飼養(yǎng)箱中飼養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理及測定 試驗用中華鱉在室內水族箱中休眠2d后取樣，斷頭殺死，取出胃、肝臟和腸道，測量胃、肝臟和腸pH。腸道從第1個回折點以前為前腸，最后1個回折點以后為后腸，其間為中腸。剔除肝臟和腸道周圍的脂肪和腸系膜等附著物，用去離子水沖洗腸道內容物，用濾紙吸干。樣品稱重，加9倍體積的蒸餾水勻漿，4 000r／min離心15min，取上清液作為粗酶液，4℃保存、待測。在24h內測定完畢。

胃蛋白酶活性的測定：胃蛋白酶采用福林－酚法測定。酶活力單位定義為：每毫克組織蛋白37℃每分鐘分解蛋白生成1μg氨基酸定義為1個胃蛋白酶活力單位。

淀粉酶活性的測定：淀粉酶采用碘－淀粉比色法測定。酶活力單位定義為：組織中每毫克蛋白在30℃與底物作用30min，水解10mg淀粉定義為1個淀粉酶活力單位。

脂肪酶活性的測定：脂肪酶采用甘油三酯乳化液水解法測定，酶活力單位定義為：在37℃條件下，每克組織蛋白與底物作用1min，每消耗1μmol底物定義為一個脂肪酶活力單位。

酶粗提取液中蛋白質含量的測定：采用考馬斯亮藍法。

胃蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和蛋白質含量的測定均采用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒，嚴格按照試劑盒測定方法進行。

1.2.2 數據處理 試驗所得數據采用SPSS10.0軟件進行單因素方差分析，用Duncan多重比較分析組間差異顯著性，所得數據用平均值±標準差（±SD）表示，P＜0.05為差異顯著。

2 結果

2.1 胃蛋白酶

由表1可知，中華鱉胃蛋白酶活性在腸中最高，胃次之，肝臟中最低，且各器官中差異顯著（P＜0.05）。腸中以中腸最高，前腸次之，后腸最低，但沒有顯著差異。蛋白酶在中華鱉不同消化器官中的分布，有利于增強消化、吸收各種蛋白質的能力。

2.2 脂肪酶

由表1可知，腸道中脂肪酶的活性較胃、肝臟中高，但差異不顯著。腸中以中腸最高，后腸次之，前腸最低，且著差異顯著（P＜0.05），由此可以推測中華鱉腸道是消化、吸收脂類物質的主要器官。

2.3 淀粉酶

從表1中可知，腸道中淀粉酶的活性較胃、肝臟中高，且差異顯著（P＜0.05）。在腸中以中腸最高，后腸次之，前腸最低，但差異不顯著。可見淀粉酶在腸內的消化作用較強，在胃中較弱。

表1 中華鱉不同消化器官中蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性（平均值±標準誤）The activities of protease，lipase，amylase in different parts of digestive organs of Trionyx sinensis（±SD） U／min·g

表1 中華鱉不同消化器官中蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性（平均值±標準誤）The activities of protease，lipase，amylase in different parts of digestive organs of Trionyx sinensis（±SD） U／min·g

注：＊代表組間差異顯著（P＜0.05）。Note：＊shows significant difference among groups（P＜0.05）.

活性酶Enzyme activity胃Stomach肝臟Liver前腸Foregut中腸Midgut后腸Hindgut胃蛋白酶活性Protease activity 490.353±70.920＊ 296.672±72.356＊ 774.407±99.733 822.075±210.614 691.751±165.902脂肪酶活性Lipase activity 166.409±31.627 184.867±41.910 452.507±33.742＊ 614.923±46.446＊ 481.786±44.379＊淀粉酶活性Amylase activity 0.125±0.022＊ 0.050±0.020＊0.140±0.021 0.178±0.024 0.146±0.033

3 討論

中華鱉脂肪酶活性在休眠期呈現，中腸＞后腸＞前腸＞胃，而非休眠期［6］呈現前腸＞ 中腸＞ 后腸＞胃，這可能因為低溫抑制休眠期中華鱉脂肪酶活性，而前腸酶活性受溫度影響較大。中華鱉蛋白酶活性在休眠期，中腸＞ 前腸＞后腸＞胃，非休眠期蛋白酶活性胃＞前腸＞中腸＞后腸［9］，休眠期淀粉酶中腸＞后腸＞前腸＞胃，而非休眠期幼鱉中淀粉酶活性前腸＞胃＞中腸＞后腸［10］。這可能由于低溫抑制休眠期中華鱉消化酶活性，其中胃中酶活性受溫度影響最大，而前腸次之?？梢?，環(huán)境溫度的改變將影響中華鱉消化酶的活力。天然水域中，中華鱉屬于典型的肉食性動物，其蛋白酶活性明顯高于其他肉食性魚類（如鱖魚、烏鱧）［11］，因而要求人工養(yǎng)殖時飼料有較高的蛋白質含量。中華鱉消化系統(tǒng)中淀粉酶活性的存在，說明中華鱉依然具有消化吸收淀粉的能力。添加淀粉對中華鱉生長的影響值得進一步試驗研究。肝臟是消化酶生成的中心器官，它分泌機能的強弱直接影響中華鱉對食物的消化能力，但消化酶活性低。由試驗中可以看出，中華鱉的胃、肝、腸中含有蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等消化酶。且不同的消化酶在不同的消化部位，其活性不完全相同。

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［11］譚北平.太湖沿岸區(qū)幾種肉食性魚類蛋白酶活性的比較研究［J］.湖北農學院學報，1995，2（3）：97－98.