吳紅松

（菏澤學(xué)院，山東菏澤 274015）

中華鱉（Trionyxsinensis）隸屬于龜鱉目（Testudinata）、鱉科（Trionychidae）、鱉屬（Trionyx），是我國(guó)重要的特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，有較高的食用價(jià)值和藥用價(jià)值。作為變溫動(dòng)物，中華鱉對(duì)外界溫度變化十分敏感，溫度的高低會(huì)直接影響其運(yùn)動(dòng)與攝食。每年10月底至翌年4月初，當(dāng)水溫低于約15℃時(shí)，中華鱉潛入水底泥沙中冬眠，在此期間動(dòng)物不攝食，代謝率降低，僅靠體內(nèi)積累的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)維持較低的代謝過程［1］。體重?fù)p失10%～15% 。

近年來，對(duì)于中華鱉的研究，在免疫功能方面較多［2－4］，在鱉的疾病防治［5］、系統(tǒng)發(fā)育［6］及分子生物學(xué)［7］、組織學(xué)［8］方面也都有報(bào)道，但對(duì)中華鱉冬眠期消化道生理生化方面的研究少見報(bào)道。本文對(duì)中華鱉冬眠期消化酶的活性進(jìn)行了初步探討，旨在豐富其消化道生理生化的研究?jī)?nèi)容并為中華鱉人工飼料研制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2010年1月底，自菏澤黃河養(yǎng)殖場(chǎng)購(gòu)買6只4齡中華鱉，平均體重為672.25g。試驗(yàn)過程中將中華鱉置于2.0m×1.5m×1.5m的飼養(yǎng)箱中飼養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理及測(cè)定 試驗(yàn)用中華鱉在室內(nèi)水族箱中休眠2d后取樣，斷頭殺死，取出胃、肝臟和腸道，測(cè)量胃、肝臟和腸pH。腸道從第1個(gè)回折點(diǎn)以前為前腸，最后1個(gè)回折點(diǎn)以后為后腸，其間為中腸。剔除肝臟和腸道周圍的脂肪和腸系膜等附著物，用去離子水沖洗腸道內(nèi)容物，用濾紙吸干。樣品稱重，加9倍體積的蒸餾水勻漿，4 000r／min離心15min，取上清液作為粗酶液，4℃保存、待測(cè)。在24h內(nèi)測(cè)定完畢。

胃蛋白酶活性的測(cè)定：胃蛋白酶采用福林－酚法測(cè)定。酶活力單位定義為：每毫克組織蛋白37℃每分鐘分解蛋白生成1μg氨基酸定義為1個(gè)胃蛋白酶活力單位。

淀粉酶活性的測(cè)定：淀粉酶采用碘－淀粉比色法測(cè)定。酶活力單位定義為：組織中每毫克蛋白在30℃與底物作用30min，水解10mg淀粉定義為1個(gè)淀粉酶活力單位。

脂肪酶活性的測(cè)定：脂肪酶采用甘油三酯乳化液水解法測(cè)定，酶活力單位定義為：在37℃條件下，每克組織蛋白與底物作用1min，每消耗1μmol底物定義為一個(gè)脂肪酶活力單位。

酶粗提取液中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定：采用考馬斯亮藍(lán)法。

胃蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和蛋白質(zhì)含量的測(cè)定均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒測(cè)定方法進(jìn)行。

1.2.2 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan多重比較分析組間差異顯著性，所得數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 胃蛋白酶

由表1可知，中華鱉胃蛋白酶活性在腸中最高，胃次之，肝臟中最低，且各器官中差異顯著（P＜0.05）。腸中以中腸最高，前腸次之，后腸最低，但沒有顯著差異。蛋白酶在中華鱉不同消化器官中的分布，有利于增強(qiáng)消化、吸收各種蛋白質(zhì)的能力。

2.2 脂肪酶

由表1可知，腸道中脂肪酶的活性較胃、肝臟中高，但差異不顯著。腸中以中腸最高，后腸次之，前腸最低，且著差異顯著（P＜0.05），由此可以推測(cè)中華鱉腸道是消化、吸收脂類物質(zhì)的主要器官。

2.3 淀粉酶

從表1中可知，腸道中淀粉酶的活性較胃、肝臟中高，且差異顯著（P＜0.05）。在腸中以中腸最高，后腸次之，前腸最低，但差異不顯著。可見淀粉酶在腸內(nèi)的消化作用較強(qiáng)，在胃中較弱。

表1 中華鱉不同消化器官中蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）The activities of protease，lipase，amylase in different parts of digestive organs of Trionyx sinensis（±SD） U／min·g

表1 中華鱉不同消化器官中蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）The activities of protease，lipase，amylase in different parts of digestive organs of Trionyx sinensis（±SD） U／min·g

注：＊代表組間差異顯著（P＜0.05）。Note：＊shows significant difference among groups（P＜0.05）.

活性酶Enzyme activity胃Stomach肝臟Liver前腸Foregut中腸Midgut后腸Hindgut胃蛋白酶活性Protease activity 490.353±70.920＊ 296.672±72.356＊ 774.407±99.733 822.075±210.614 691.751±165.902脂肪酶活性Lipase activity 166.409±31.627 184.867±41.910 452.507±33.742＊ 614.923±46.446＊ 481.786±44.379＊淀粉酶活性Amylase activity 0.125±0.022＊ 0.050±0.020＊0.140±0.021 0.178±0.024 0.146±0.033

3 討論

中華鱉脂肪酶活性在休眠期呈現(xiàn)，中腸＞后腸＞前腸＞胃，而非休眠期［6］呈現(xiàn)前腸＞ 中腸＞ 后腸＞胃，這可能因?yàn)榈蜏匾种菩菝咂谥腥A鱉脂肪酶活性，而前腸酶活性受溫度影響較大。中華鱉蛋白酶活性在休眠期，中腸＞ 前腸＞后腸＞胃，非休眠期蛋白酶活性胃＞前腸＞中腸＞后腸［9］，休眠期淀粉酶中腸＞后腸＞前腸＞胃，而非休眠期幼鱉中淀粉酶活性前腸＞胃＞中腸＞后腸［10］。這可能由于低溫抑制休眠期中華鱉消化酶活性，其中胃中酶活性受溫度影響最大，而前腸次之?？梢?，環(huán)境溫度的改變將影響中華鱉消化酶的活力。天然水域中，中華鱉屬于典型的肉食性動(dòng)物，其蛋白酶活性明顯高于其他肉食性魚類（如鱖魚、烏鱧）［11］，因而要求人工養(yǎng)殖時(shí)飼料有較高的蛋白質(zhì)含量。中華鱉消化系統(tǒng)中淀粉酶活性的存在，說明中華鱉依然具有消化吸收淀粉的能力。添加淀粉對(duì)中華鱉生長(zhǎng)的影響值得進(jìn)一步試驗(yàn)研究。肝臟是消化酶生成的中心器官，它分泌機(jī)能的強(qiáng)弱直接影響中華鱉對(duì)食物的消化能力，但消化酶活性低。由試驗(yàn)中可以看出，中華鱉的胃、肝、腸中含有蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等消化酶。且不同的消化酶在不同的消化部位，其活性不完全相同。

［1］張廷軍，牛翠娟，孫儒泳.中華鱉幼體能量轉(zhuǎn)換的初步研究［J］.生態(tài)學(xué)報(bào)，1996，16（2）：202－207.

［2］董曉敏，周顯青，王 迎.溫度對(duì)中華大蟾蜍和中華鱉冬眠前離體紅細(xì)胞免疫功能及其大小的影響［J］.動(dòng)物學(xué)雜志，2009，44（3）：l0l－107.

［3］劉 凱，朱麗敏，林啟存，等.低聚異麥芽糖和酵母細(xì)胞壁對(duì)中華鱉免疫功能的影響［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，26（9）：386－390.

［4］溫安祥，周定剛.內(nèi)毒素誘導(dǎo)中華鱉免疫應(yīng)激的研究［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2008，20（6）：657－661.

［5］Li X，Zhang C，F(xiàn)ang W，et al.White－spot disease of Chinese soft－shelled turtles（Trionyxsinensis）caused byPaecilomyces lilacinus［J］.J Zhejiang Univ Sci B，2008，9（7）：578－581.

［6］Xiong L，Nie L，Li X，et a1.Comparison research and phylogenetic implications of mitochondrial control regions in four soft‐shelled turtles ofTrionychia（Reptilia，Testudinata）［J］.The Genetics Society of Korea and Springer，2010，32：291－298.

［7］Gong X，Niu C，Zhang Z.cDNA cloning and tissue expression for L－gulonolactone oxidase gene in soft－shelled turtlePelodiscus sinensisa species with the ability to synthesize ascorbic acid［J］.The Japanese Society of Fisheries Science，2011，77：547－555.

［8］Han X，Zhang L，Bao H，et a1.Ultrastructure of anterior uterus of the oviduct and the stored sperm in female soft－shelled turtle，Trionyxsinensis［J］.Anatom Rec，2008，291：335－351.

［9］龍良啟，白東清，湯保貴，等.中華鱉消化組織蛋白酶的初步研究［J］.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，15（4）：362－364.

［10］龍良啟，白東清，梁擁軍，等.幼鱉胃腸胰組織中主要消化酶活性分布［J］.動(dòng)物學(xué)雜志，1997，32（6）：23－26.

［11］譚北平.太湖沿岸區(qū)幾種肉食性魚類蛋白酶活性的比較研究［J］.湖北農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，1995，2（3）：97－98.