閆國(guó)強(qiáng) 陳淑蘭 王旭初 董晶晶

(河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，河北省滄州市黃河西路31號(hào)，061001)

四子種王膠囊是我院中藥制劑室研制的中藥復(fù)方制劑，具有溫陽(yáng)益陰，補(bǔ)腎填精的功效，用于腎陽(yáng)不足，陰精虧少，精冷虛弱，陽(yáng)痿遺精，用于治療男性不育癥，精子數(shù)量少，活動(dòng)力弱，成活率低，獲得了較好的臨床療效。我們?cè)O(shè)計(jì)四子種王膠囊對(duì)幼年大鼠睪丸曲細(xì)精管內(nèi)精子數(shù)量影響的實(shí)驗(yàn)，雌性大鼠妊娠率影響的實(shí)驗(yàn)，以及觀察去勢(shì)大鼠附性腺器官包皮腺、精液囊+前列腺指數(shù)，對(duì)陽(yáng)虛小鼠耐疲勞游泳時(shí)間，低溫存活能力的觀察，以期為四子種王膠囊的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物與試劑 四子種王膠囊(0.5g/粒，2.79g生藥/g干粉，河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院提供，批號(hào)20041119)由淫羊藿、鹿角膠、韭菜子、肉蓯蓉、熟地黃、枸杞子、菟絲子等藥材組成，臨用前將膠囊去殼，內(nèi)容物用純水配成混懸液;五子衍宗丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號(hào)4030099);氫化可的松注射液(山西晉新雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)200202144)。

1.2 儀器 JA3003電子天平，上海天平儀器廠;海爾電冰箱。

1.3 動(dòng)物 SD大鼠，雌雄兼用，體重60～70g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)為SCXK(冀)2003-1-003;昆明種小鼠，雄性，體重18～20g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)為SCXK(冀)2003-1-003;動(dòng)物飼料亦由該中心提供。

2 方法

2.1 幼年雄性大鼠生育能力的影響實(shí)驗(yàn) 將雄性大鼠，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、四子種王膠囊小劑量組(0.45g·kg-1，相當(dāng)于人臨床用量的3.5倍)、四子種王膠囊中劑量組(0.9g·kg-1，相當(dāng)于人臨床用量的7倍)、四子種王膠囊大劑量組(1.8g·kg-1，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)及陽(yáng)性藥五子衍宗丸組(2.8g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)。各組每日灌胃給藥(水)1次，容量為1mL/100g體重，連續(xù)28d，末次給藥后與雌鼠合籠(1∶2)，5d后取出雌鼠，分別觀察交配后雌鼠是否妊娠，以雌鼠妊娠百分率表示雄鼠生育能力，處死雄鼠，取一側(cè)附睪放入5mL生理鹽水中剪碎，研過(guò)80目銅篩。取0.5mL混懸液加入0.5mL精子稀釋液，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)各組大鼠精子數(shù)。

2.2 去勢(shì)雄鼠附性器官重量的影響實(shí)驗(yàn) 將大鼠在乙醚麻醉下，消毒陰囊皮膚，摘除陰囊皮膚，摘除雙側(cè)睪丸，術(shù)后，肌注青霉素G鉀2萬(wàn)U/kg，手術(shù)3d后，將50只去勢(shì)大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為去勢(shì)模型組、四子種王膠囊小劑量組(0.45g·kg-1)，四子種王膠囊中劑量組(0.9g·kg-1)，四子種王膠囊大劑量組(2.8g·kg-1)及陽(yáng)性藥五子衍宗丸組(2.8g·kg-1)。另取10只正常大鼠為空白對(duì)照組。各組大鼠均灌胃給藥(水)，容量為1mL/100g體重，每日1次，連續(xù)28d，末次給藥后2h，處死動(dòng)物，分取包皮腺、前列腺及精液囊，稱其濕重，并計(jì)算包皮腺指數(shù)、精液囊+前列腺指數(shù)［1］。

2.3 陽(yáng)虛小鼠抗疲勞能力 將60只小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、陽(yáng)虛模型組、四子種王膠囊小劑量組(0.6g·kg-1)、四子種王膠囊中劑量(1.2g·kg-1)、四子種王膠囊大劑量組(2.4g·kg-1)及陽(yáng)性藥五子衍宗丸組(3.6g·kg-1)，各組每日灌胃給藥(水)1次，容量為0.2mL/10g體重，連續(xù)給藥7d，同時(shí)肌注氫化可的松0.75mg/只(正常對(duì)照組除外)，末次給藥后1h，進(jìn)行游泳試驗(yàn)，試驗(yàn)時(shí)，分別將小鼠負(fù)重5g，投入水中，記錄小鼠開(kāi)始游泳到沉入水底的時(shí)間，采用t檢驗(yàn)比較各組間差異情況［1］。

2.4 陽(yáng)虛小鼠低溫存活能力 將120只小鼠隨機(jī)分為6組，每組20只，分別為正常對(duì)照組、陽(yáng)虛模型組、四子種王膠囊小劑量(0.6g·kg-1)、四子種王膠囊中劑量(1.2g·kg-1)、四子種王膠囊大劑量(2.4g·kg-1)及陽(yáng)性藥五子衍宗丸組(3.6g·kg-1)，各組每日灌胃給藥(水)1次，容量為0.2mL/10g體重，連續(xù)給藥7d，同時(shí)肌注氫化可的松0.75mg/只(正常對(duì)照組除外)，末次給藥后1h，進(jìn)行低溫存活試驗(yàn)，試驗(yàn)時(shí)，將小鼠放入溫度-14℃的冰箱中，2.5h后取出小鼠，記錄各組存活動(dòng)物數(shù)［1］。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)算資料以(ˉx±s)表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包單因素方差分析SNK法(q檢驗(yàn))比較各組間差異情況。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)幼年雄性大鼠生育能力的影響 四子種王膠囊(0.45g·kg-1、0.9g·kg-1、1.8g·kg-1)組精子數(shù)目明顯較空白對(duì)照組大鼠多，雌性大鼠妊娠率明顯高于空白對(duì)照組(P＜0.05)，表明其可提高雄性大鼠生育能力。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 四子種王膠囊對(duì)雄性大鼠生育能力的影響(ˉx±s，n=10)

3.2 對(duì)去勢(shì)雄鼠附性器官重量的影響 四子種王膠囊(0.45g·kg-1、0.9g·kg-1、1.8g·kg-1)組大鼠包皮腺指數(shù)、精液囊+前列腺指數(shù)均明顯高于去勢(shì)模型組(P＜0.01)。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.3 對(duì)陽(yáng)虛小鼠抗疲勞能力的影響 四子種王膠囊(0.6g·kg-1、1.2g·kg-1、2.4g·kg-1)組小鼠游泳時(shí)間均明顯較陽(yáng)虛模型組長(zhǎng)(P＜0.05或P＜0.01)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 四子種王膠囊對(duì)去勢(shì)大鼠重要附性器官的影響(ˉx±s，n=10)

表3 四子種王膠囊對(duì)陽(yáng)虛小鼠游泳時(shí)間的影響(ˉx±s，n=10)

3.4 對(duì)陽(yáng)虛小鼠耐寒能力的影響 四子種王膠囊(0.6g·kg-1、1.2g·kg-1、2.4g·kg-1)組存活動(dòng)物數(shù)明顯較陽(yáng)虛模型組多(P＜0.05或P＜0.01)。見(jiàn)表4。

表4 四子種王膠囊對(duì)陽(yáng)虛小鼠低溫存活能力的影響(ˉx±s，n=10)

4 討論

由于生活方式的改變以及環(huán)境污染的加重，男子不育患者近年來(lái)呈上升的趨勢(shì)，近20年來(lái)人類精子數(shù)量平均每年以2%的速度下降［2］。男性不育中醫(yī)學(xué)稱之為“無(wú)子”“男子艱嗣”或“絕育”?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》記載了男性不育的“精少”“精時(shí)自下”“陰痿”“白淫”等癥，從中醫(yī)辨證分析，男性不育患者大多為腎虛之證。腎藏精，主生殖，腎陽(yáng)為用，腎陰為體，陽(yáng)生則陰長(zhǎng)，腎之元陽(yáng)虧虛則腎精不足，而致不育。四子種王膠囊中淫羊藿溫補(bǔ)腎陽(yáng)，鹿角膠乃血肉有情之品，既溫腎陽(yáng)，又益精血，二者共為君藥;韭菜子、肉蓯蓉溫陽(yáng)補(bǔ)腎，固精;熟地黃、枸杞子滋陰養(yǎng)血，菟絲子陰陽(yáng)并補(bǔ)，共為臣藥;桑寄生、覆盆子、石斛補(bǔ)腎養(yǎng)陰固精而為佐藥;牛膝補(bǔ)肝腎，行血脈，引藥入腎為使藥。諸藥配伍，共達(dá)陽(yáng)生陰長(zhǎng)，陰陽(yáng)互補(bǔ)，互生，此精之所由生也。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明淫羊藿中主要成分為淫羊藿苷，屬黃酮類化合物，具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌和提高雄激素水平的作用［3］;鹿角膠有性激素樣作用，能明顯增強(qiáng)雄鼠交配能力［4］;菟絲子水提物能顯著提高精子懸液SOD活力，降低MDA含量，抑制精子膜脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，對(duì)精子膜結(jié)構(gòu)和功能具有明顯的保護(hù)作用［5］。本實(shí)驗(yàn)證明，四子種王膠囊能使幼年大鼠睪丸曲細(xì)精管內(nèi)精子數(shù)目明顯增多，并使雌性大鼠妊娠率明顯提高;能顯著增加去勢(shì)大鼠附性腺器官包皮腺、精液囊+前列腺指數(shù);明顯延長(zhǎng)陽(yáng)虛小鼠耐疲勞游泳時(shí)間，提高陽(yáng)虛小鼠低溫存活能力，為四子種王膠囊治療精子數(shù)量少、活動(dòng)力弱、成活率低造成的男性不育提供了必要的藥理學(xué)依據(jù)。

［1］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2006:717，719.

［2］江魚(yú).男性不育癥診斷和治療進(jìn)展［J］.中國(guó)男科學(xué)雜志，2000，14(3):53.

［3］章振寶，田生平，楊鏡秋，等.淫羊藿苷與睪酮治療亞急性衰老雄性大鼠的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)男科學(xué)雜志，2006，20(8):13.

［4］聶淑琴，梁愛(ài)華.鹿角膠新老劑型壯陽(yáng)、補(bǔ)血作用的比較研究［J］.中國(guó)中藥雜志，1996，21(10):625.

［5］楊欣，丁彩飛，張永華，等.菟絲子水提物對(duì)人精子膜結(jié)構(gòu)和功能氧化損傷的干預(yù)作用［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2006，41(7):515.