李 禎，李潤梅

（河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，河北張家口 075000）

氯沙坦與美托洛爾對(duì)高血壓心肌肥厚影響的實(shí)驗(yàn)研究

李 禎，李潤梅

（河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，河北張家口 075000）

目的研究氯沙坦與美托洛爾聯(lián)合對(duì)高血壓心肌肥厚的干預(yù)作用。方法采用結(jié)扎大鼠腹主動(dòng)脈法造模，將Wistar雄性大鼠50只隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組、模型組、氯沙坦組、美托洛爾組、氯沙坦+美托洛爾組，治療5周后測(cè)定血流動(dòng)力學(xué)、左心室肥厚程度、血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）及膠原蛋白含量的變化，同時(shí)檢測(cè)血清中細(xì)胞因子（白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-10、腫瘤壞死因子-α）水平變化。結(jié)果治療5周后，與模型組比較，氯沙坦組、美托洛爾組、氯沙坦+美托洛爾組的收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓較模型組均降低；心臟質(zhì)量/體質(zhì)量與左室質(zhì)量/體質(zhì)量亦有所降低；AngⅡ及膠原蛋白含量明顯降低；白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子-α水平降低；氯沙坦+美托洛爾組效果最明顯。結(jié)論氯沙坦與美托洛爾能干預(yù)心肌肥厚，改善血流動(dòng)力學(xué)，兩者合用具有協(xié)同作用。

心肌疾病，肥厚性；氯沙坦；美托洛爾

高血壓合并左心室肥厚（left ventricular hypertrophy，LVH）是一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，研究表明［1］，高血壓左室肥大者，心血管并發(fā)癥發(fā)生率及病死率可增加3～7倍。血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）作為腎素-血管緊張素系統(tǒng)的主要活性產(chǎn)物，在LVH中具有重要作用［2］。美托洛爾（metoprolol）為心臟選擇性β受體阻滯劑，對(duì)高腎素性高血壓有較好的降壓作用［3］。氯沙坦（losartan）為非肽類血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，具有降低血漿AngⅡ水平、逆轉(zhuǎn)高血壓時(shí)的左心室肥厚作用。本文通過大鼠腹主動(dòng)脈狹窄造模，給予氯沙坦及美托洛爾干預(yù)，觀察血流動(dòng)力學(xué)、左心室肥厚程度、AngⅡ及膠原蛋白含量的變化，同時(shí)進(jìn)一步檢測(cè)了血清中白細(xì)胞介素（interleulcin，IL）-6，IL-10，腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平變化。

1 材料與方法

1.1 材料：氯沙坦鉀（杭州默沙東公司，批號(hào)34-250-2066），美托洛爾（阿斯特拉制藥有限公司，批號(hào)52-100-2058），TNF-α放射免疫試劑盒、IL-6和IL-10檢測(cè)試劑盒（北京正泰生物技術(shù)公司），AngⅡ及膠原蛋白放免測(cè)試盒（解放軍總院科技放免所，批號(hào)050726），MD100-1電子天平（上海醫(yī)用儀器廠），壓力傳感器，RS3400四導(dǎo)生理儀的通用放大器（universal amplifier）（均為美國Gould產(chǎn)品），GAMMA maticⅡ型γ計(jì)數(shù)器（瑞士KONTRON公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型制備：選取健康Wistar雄性大鼠50只，2月齡，體質(zhì)量160～180g。按照結(jié)扎大鼠腹主動(dòng)脈的方法建立心肌肥厚模型。大鼠腹腔內(nèi)注射3%戊巴比妥鈉（30mg/kg）麻醉，待角膜反射消失后仰臥固定于手術(shù)臺(tái)。常規(guī)去毛消毒腹部皮膚，腹部正中切口打開腹腔，于左腎后上方分離腎動(dòng)脈，于起始部上段腹主動(dòng)脈約13mm處，沿血管走行方向放置針尖磨鈍的7號(hào)注射針頭，以絲線將腹主動(dòng)脈連同針頭一起結(jié)扎后迅速抽去針頭，造成腹主動(dòng)脈狹窄。腹腔內(nèi)注入青霉素40萬U，關(guān)閉腹腔，術(shù)后進(jìn)行常規(guī)抗炎治療7d。假手術(shù)組不結(jié)扎腹主動(dòng)脈，其余同手術(shù)組。造模后，模型組大鼠心臟指數(shù)（全心質(zhì)量/體質(zhì)量）比假手術(shù)組明顯增加（P＜0.05），表明大鼠心肌肥厚模型已建立。術(shù)中及術(shù)后6周內(nèi)平均病死率為16%（8只）。

1.2.2 動(dòng)物分組：造模7d后，隨機(jī)分為5組，每組10只，即假手術(shù)組、模型組、氯沙坦組、美托洛爾組、氯沙坦+美托洛爾組。假手術(shù)組、模型組，生理鹽水2mL·kg-1·d-1，灌胃；氯沙坦組，氯沙坦60mg· kg-1·d-1，灌胃；美托洛爾組，美托洛爾20mg· kg-1·d-1，灌胃；氯沙坦+美托洛爾組，氯沙坦、美托洛爾各40mg·kg-1·d-1，灌胃。連續(xù)給藥5周。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)

1.2.3.1 血流動(dòng)力學(xué)：實(shí)驗(yàn)5周后，用2%戊巴比妥鈉（45mg/kg）麻醉狀態(tài)下行頸動(dòng)脈插管，通過壓力傳感器（P23×L）與RS3400四導(dǎo)生理儀的通用放大器（universal amplifier）聯(lián)接，測(cè)定動(dòng)脈血壓，計(jì)算平均動(dòng)脈壓（mean arterial pressure，MAP）。

1.2.3.2 心肌肥厚程度測(cè)定：采用放血法處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，分離心臟組織，稱量心臟質(zhì)量，左室質(zhì)量，計(jì)算心臟質(zhì)量指數(shù)，包括心臟質(zhì)量/體質(zhì)量，左室質(zhì)量/體質(zhì)量。

1.2.3.3 AngⅡ測(cè)定：大鼠斷頭取血5mL置于冰水浴冷卻的抗凝管中（含酶抑制劑）搖勻，1 000r/min離心5min分離血漿低溫保存。AngⅡ測(cè)定嚴(yán)格按照放射免疫試劑盒說明書操作。

1.2.3.4 心肌組織膠原蛋白含量：稱取左室游離壁約200mg濕質(zhì)量的心肌組織，應(yīng)用無水乙醇、丙酮脫水脫脂，揮發(fā)待干后稱取約20mg干質(zhì)量組織，用6mmol/L鹽酸3.0mL 95℃水解5h，氫氧化鈉（6mmol/L）調(diào)酸堿度至pH6.0，稀釋至10mL，離心后取上清2m L，根據(jù)試劑盒要求測(cè)定羥脯氨酸含量，計(jì)算膠原蛋白含量。

1.2.3.5 IL-6、IL-10及TNF-α測(cè)定：頸動(dòng)脈取血，離心取上清液。采用雙抗夾心ELISA法測(cè)定IL-6和IL-10，具體操作按照各試劑盒說明書進(jìn)行；TNF-α采用放射免疫法檢測(cè)：采用液相競爭法，分管加樣，混勻，4℃放置24 h，加入分離劑，混勻，室溫放置20min，4℃3 000r/min離心25min，吸棄上清液，在自動(dòng)γ計(jì)數(shù)器上計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線和TNF -α濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS11.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以ˉx±s表示，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血流動(dòng)力學(xué)變化：與假手術(shù)組比較，模型組的SBP、DBP、MAP，明顯升高（P＜0.01），可見心室重構(gòu)模型組心功能下降。與模型組比較，氯沙坦組，美托洛爾組，氯沙坦+美托洛爾組的SBP，DBP，MAP均降低（P＜0.05），且氯沙坦+美托洛爾組降低最明顯（P＜0.05）。見表1。

表1 5周后各組血流動(dòng)力學(xué)變化

2.2 心肌肥厚程度：造模后，模型組大鼠心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量/體質(zhì)量及左室質(zhì)量/體質(zhì)量較假手術(shù)組明顯增加（P＜0.05）。藥物組增加幅度均降低（P＜0.05），氯沙坦+美托洛爾組最明顯（P＜0.05），與假手術(shù)組接近，見表2。

表2 心肌肥厚指標(biāo)比較

2.3 AngⅡ及膠原蛋白含量比較：模型組血漿AngⅡ水平與假手術(shù)組明顯升高（P＜0.01），表明大鼠心室重構(gòu)模型組的腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)激活。與模型組血漿AngⅡ含量比較，氯沙坦組及氯沙坦+美托洛爾組明顯降低（P＜0.01），且氯沙坦+美托洛爾組顯著低于氯沙坦組和美托洛爾組。

模型組的心肌膠原蛋白含量較假手術(shù)組升高54.4%（P＜0.01），與模型組相比，美托洛爾組的心肌膠原蛋白含量降低了34.4%，氯沙坦+美托洛爾組降低了49.2%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表3。

表3 各組AngⅡ及Collagen含量比較

2.4 對(duì)高血壓大鼠細(xì)胞因子水平的影響：模型組動(dòng)物細(xì)胞因子變化與假手術(shù)組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），IL-6、TNF-α明顯升高，IL-10降低；藥物組與模型組相比，IL-6、TNF-α水平降低，氯沙坦+美托洛爾組作用最強(qiáng)，氯沙坦組較弱。IL-10水平升高，氯沙坦+美托洛爾組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表4。

表4 各組大鼠細(xì)胞因子變化比較

3 討 論

左心室肥厚常見于高血壓心臟病，已被單獨(dú)列為心血管疾病的危險(xiǎn)因子。因此，控制左心室肥厚成為控制高血壓心臟病的關(guān)鍵問題。現(xiàn)代運(yùn)用的超聲心動(dòng)圖、心肌活組織檢查、心血管造影和心電圖本身存在一定局限性［4］，故對(duì)心肌肥厚變化程度正確的評(píng)價(jià)有賴于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

腹主動(dòng)脈狹窄法是一種常用的壓力超負(fù)荷心肌肥厚動(dòng)物模型的制備方法。本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠腹主動(dòng)脈狹窄造模6周后，其左心室質(zhì)量與體質(zhì)量比明顯高于假手術(shù)組（P＜0.01），說明應(yīng)用腹主動(dòng)脈狹窄法制備壓力負(fù)荷性心肌肥厚的模型是成功的。

腎素-血管緊張素系統(tǒng)在心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)中起著重要的作用。AngⅡ作為腎素-血管緊張素系統(tǒng)的主要作用因子，從血流動(dòng)力學(xué)和非血流動(dòng)力學(xué)兩方面起作用，具有長期致肥厚和重構(gòu)的作用。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑分別通過直接抑制心臟局部AngⅡ的生成和間接抑制心臟交感神經(jīng)末梢釋放兒茶酚胺兩方面預(yù)防心室肥厚的發(fā)生。

有研究顯示［5］，MAP與LVH程度呈正相關(guān)，說明血流動(dòng)力學(xué)因素參與LVH形成過程；氯沙坦+美托洛爾組與氯沙坦組的AngⅡ較模型組顯著降低，提示氯沙坦作為血管緊張素Ⅱ型受體拮抗劑，其抗心肌肥厚作用可能主要依賴非血流動(dòng)力學(xué)因素。心臟肥厚與膠原含量呈正相關(guān)，顯示心臟肥厚包括間質(zhì)成分的病理性增生，心肌膠原成分增加易導(dǎo)致心室收縮和舒張功能異常、心律失常等。

近年研究表明［6］，炎性細(xì)胞因子不僅與炎癥、冠心病等多種臨床疾病有關(guān)，而且與高血壓、心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展存在密切的聯(lián)系。IL-6通過刺激膜上gp-130受體復(fù)合物在心肌細(xì)胞的激活和表達(dá)增高，刺激炎性蛋白的產(chǎn)生和心肌肥厚促使左室重構(gòu)；TNF-α在體內(nèi)增加心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)與收縮蛋白的表達(dá)，激活A(yù)T1受體表達(dá)上調(diào)，刺激誘導(dǎo)型一氧化氮合酶水平增高，促進(jìn)AngⅡ調(diào)節(jié)心肌纖維化的效應(yīng)，并引起平滑肌細(xì)胞增殖，最終導(dǎo)致心肌肥厚［7］。IL -10有對(duì)抗IL-6等因子所致平滑肌增殖等作用。本研究采用腹主動(dòng)脈結(jié)扎制備高血壓大鼠模型，結(jié)扎5周后，細(xì)胞因子IL-6、TNF-α水平升高、IL-10降低，當(dāng)兩藥聯(lián)用后，IL-6、TNF-α水平降低，IL-10升高較明顯，表明聯(lián)用可改善細(xì)胞因子的紊亂現(xiàn)象。

總之，氯沙坦和美托洛爾聯(lián)合應(yīng)用改善左室舒張功能可以產(chǎn)生良好的協(xié)同作用。原因可能為二者同時(shí)作用于腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)以及交感神經(jīng)系統(tǒng)等環(huán)節(jié)。

［1］ 辛穎，宋曉東，惠池太，等.左心室肥厚的影響因素及機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.中國分子心臟病學(xué)雜志，2009，9（1）：56-58.

［2］ 周懷能，李秀娟，廖新學(xué)，等.氯沙坦對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血管緊張素Ⅱ及炎癥因子的影響［J］.熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2011，11（5）：577-578.

［3］ 孫愛梅.美托洛爾治療高血壓病的療效觀察［J］.右江醫(yī)學(xué)，2011，39（3）：334-335.

［4］ MATTFELDT T，MALL G.Growth of capillaries and myocardial cells inthe normal rat heart［J］.JMol Cell Cardiol，1997，60（3）：1237-1246.

［5］ 蔣嘉燁，王現(xiàn)珍，羅珊珊，等.半夏白術(shù)天麻湯對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠左心室肥厚的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，30（10）：1061-1062.

［6］ WAGNER M.Signaling networks regulating cardiac myocyte survival and death［J］.Curr Opin Investig Drugs，2009，10（9）：928-937.

［7］ BANERJEE I，F(xiàn)USELER JW，INTWALA AR.IL-6 loss causes ventricular dysfunction，fibrosis，reduced capillary density，and dramatically alters the cell populations of the develop-ing and adult heart［J］.Am JPhysiol Heart Circ Physiol，2009，296（5）：1694-1704.

（本文編輯：趙麗潔）

R542.2

B

1007-3205（2012）02-0228-03

2011-10-28；

2012-01-11

李禎（1964-），男，河北康保人，河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院副主任藥師，理學(xué)學(xué)士，從事醫(yī)院藥學(xué)和醫(yī)院制劑研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.02.046