劉志英，肖 剛，劉鐵菊

（1.河北省唐山市婦幼保健院普外科，河北唐山063000；2.天津醫(yī)科大學(xué)病理教研室，天津300070）

青年乳腺癌中XIAP、Smac、Caspase-3的表達及其與HER2的相關(guān)性研究

劉志英1，肖 剛1，劉鐵菊2

（1.河北省唐山市婦幼保健院普外科，河北唐山063000；2.天津醫(yī)科大學(xué)病理教研室，天津300070）

乳腺腫瘤；診斷；免疫組織化學(xué)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。一般認為35歲以下青年乳腺癌患者在生物學(xué)行為及預(yù)后方面不同于其他年齡段患者，因此將之定義為青年乳腺癌［1-2］。作者對本院近年來收治的35歲以下乳腺癌病例進行回顧性分析，重點分析凋亡效應(yīng)因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、X連鎖凋亡抑制蛋白（X-1inked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）及其抑制因子第二個線粒體衍生的半胱天冬蛋白酶激活劑（second mitochon-driaderived activator of caspase，Smac）的表達情況及其與人表皮生長因子2（human epiderma1 growth factor receptor 2，HER2）過表達的關(guān)系，從細胞凋亡的角度闡述青年乳腺癌的分子生物學(xué)特征，以期為青年乳腺癌的診斷和治療提供新的靶點和思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料：河北省唐山市婦幼保健院2000年1月—2007年1月共收治≤35歲青年乳腺癌32例，均為女性，年齡23～35歲，平均31.8歲，均由病理證實。病理類型，浸潤性導(dǎo)管癌25例，浸潤性小葉癌6例，典型髓樣癌1例。術(shù)前均未接收放化療。以同期住院≥40歲的乳腺癌中隨機抽取的44例作為對照組，年齡40～73歲，平均52.1歲。

1.2 主要試劑：試驗用的XIAP、Smac、Caspase-3兔抗人單克隆抗體及免疫組化試劑盒均購自上海天呈生物用品超市，HER2鼠抗人單克隆抗體及試劑盒購自福建邁新生物公司。

1.3 主要儀器與器材：超凈工作臺（蘇州涂化設(shè)備公司）；微波爐（松下公司）；冰箱（海爾公司）；顯微鏡（日本NIKON公司）。

1.4 試驗方法：采用免疫組織化學(xué)SP法，石蠟切片，常規(guī)脫臘至水，用3%的H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶10min，枸櫞酸鹽抗原熱修復(fù)，小牛血清封閉10min，加入一抗HER2為即用型試劑，XIAP、Smac、Caspase-3的稀釋濃度分別為1∶200、1∶100、1∶100。4℃孵育過夜，加入二抗溫育20min（室溫），鏈親合素-過氧化物酶溶液溫育30min（室溫），DAB顯色15min，蘇木素對比染色后，脫水，透明，封片。用已知陽性標本切片和PBS分別做陽性和陰性對照。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.0軟件包進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 結(jié)果判斷：所有免疫組織化學(xué)陽性均呈棕色顯色，HER2陽性物定位于細胞膜及細胞漿上。Caspase-3以胞漿或胞核染成棕黃色為陽性表達，Smac抗原陽性反應(yīng)為位于細胞質(zhì)內(nèi)和（或）細胞膜上的棕黃色均勻細顆粒，XIAP染色以細胞質(zhì)著色為陽性細胞判定標準。根據(jù)陽性細胞數(shù)和著色深度計分，每例均隨機觀察計數(shù)5個高倍視野（×400），確定其每個視野的陽性率，取平均數(shù)，按下列計分，陽性細胞≤5%為0分，＞5%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%～75%為3分，＞75%為4分。陽性細胞表達的著色深度，基本不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將2項積分相乘，≥1為陽性，＜1為陰性。

2.2 XIAP、Smac、Caspase-3表達：32例青年乳腺癌組中XIAP陽性表達25例（78.1%），Smac陽性表達11例（34.4%），Caspase-3陽性表達10例（31.3%）；44例對照組中XIAP陽性表達24例（54.5%），Smac陽性表達27例（61.4%），Caspase-3陽性表達25例（56.8%）。2組陽性表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 2組XIAP、Smac、caspase-3表達比較（例數(shù)，%）

2.3 XIAP、Smac、caspase-3表達與HER2過表達的相關(guān)性：青年乳腺癌XIAP表達與HER2過表達呈正相關(guān)（rs=0.70，P＜0.01），Smac、Caspase-3表達與HER2過表達無相關(guān)性（rs=0.12、0.14，P＞0.05）。

3 討 論

XIAP作為一種細胞凋亡抑制蛋白，它不僅抑制Caspases的活性使細胞凋亡受阻，同時還調(diào)節(jié)著細胞分裂、細胞周期及信號傳導(dǎo)等多個重要環(huán)節(jié)，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切［3］。在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族的成員中，它被認為是作用最強的一種，與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展高度相關(guān)。Smac是一種可以減弱XIAP功能的蛋白質(zhì)［4］，能消除XIAP對Caspases的抑制作用而激活Caspases酶原，同時增加Caspases酶的活性。Caspase-3在細胞凋亡中處于核心位置，其高表達可引起細胞的凋亡，被稱為死亡蛋白。XIAP的BIR結(jié)構(gòu)又是Caspase和Smac結(jié)合的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)［5］。因此，XIAP、Smac和Caspase-3在細胞凋亡的共同途徑中有著極其重要的作用。

本研究結(jié)果顯示，青年乳腺癌和中老年乳腺癌XIAP陽性率分別為78.1%（25/32）和54.5%（24/ 44），Smac陽性率分別為34.4%（11/32）和61.4% （27/44），Caspase-3陽性率分別為31.3%（10/32）和56.8%（25/44），青年乳腺癌XIAP表達明顯高于中老年乳腺癌，Smac和Caspase-3表達明顯低于中老年乳腺癌，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。XIAP、Smac和Caspase-3的表達異?？赡茉诎┘毎麑垢鞣N凋亡誘導(dǎo)因素、拮抗癌細胞凋亡和癌細胞增殖過程中發(fā)揮重要作用，從而有助于青年乳腺癌這一特殊類型乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展。

本研究還發(fā)現(xiàn)XIAP表達與HER2過表達存在正相關(guān)性，提示HER2基因?qū)IAP表達可能存在正反饋調(diào)節(jié)，HER2表達增加直接或間接引起XIAP的表達增加，從而拮抗細胞的凋亡，促進青年乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及惡性增殖。

總之，研究XIAP、Smac和Caspase-3在青年乳腺癌中的表達不但對青年乳腺癌患者的預(yù)后有重要的參考價值，而且也為尋找青年乳腺癌的發(fā)病機制、改進治療方法提供有益的幫助。

【參考文獻】

［1］ 季永領(lǐng)，杜向慧.青年乳腺癌的研究進展［J］.中國癌癥防治雜志，2010 2（3）：244-246.

［2］ COLONNA M，DELAFOSSE P，UHRY Z，et a1.Is breast cancer incidence increasing among young women？An ana1ysis of the trend in France for the period 1983-2002［J］.Breast，2008，17（3）：289-292.

［3］ WANG ZH，CHEN H，GUO HC，et a1.Enhanced antitumor efficacy by the combination of emodin and gemcitabine against human pancreatic cancer ce11s via downregu1ation of the expression of XIAP in vitro and in vivo［J］.Int J Onco1，2011，39（5）：1123-1131.

［4］ YANG D，ZHAO Y，LI AY，et a1.Smac-mimetic compound SM-164 induces radiosensitization in breast cancer ce11s through activation of caspases and induction of apoptosis［J］.Breast Cancer Res Treat，2012，133（1）：189-199.

［5］ GONZáLEZ-LóPEZ M，WELSH K，F(xiàn)INLAY D，et a1.Design，synthesis and eva1uation of monova1ent Smac mimetics that bind to the BIR2 domain of the anti-apoptotic protein XIAP［J］.Bioorg Med Chem Lett，2011，21（14）：4332-4336.

（本文編輯：趙麗潔）

R737.9

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1007-3205（2012）10-1214-03

2012-02-03；

2012-05-26

劉志英（1972-），女，河北灤縣人，河北省唐山市婦幼保健院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事乳腺疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.10.042