劉幸平 彭青

（1.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院機能學(xué)實驗室，廣東 汕頭 515041；2.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，廣東 汕頭 515041）

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是我國院內(nèi)感染的重要原因之一，MRSA感染已成為臨床抗感染治療的巨大挑戰(zhàn)［1－2］。MRSA除攜帶編碼PBP2’蛋白的mecA基因外，還可攜帶其他抗生素耐藥基因而造成多重耐藥［3］。本研究就我院第一附屬醫(yī)院分離的MRSA進行了耐藥譜分析，以了解該院MRSA的耐藥情況，為臨床合理使用抗生素提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌株及試劑

92株金黃色葡萄球菌由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附一醫(yī)院檢驗科分離獲得，經(jīng)法國生物－梅里埃公司VITEK－60AMS全自動微生物分析系統(tǒng)鑒定為MRSA。金葡菌ATCC25923由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附一醫(yī)院檢驗科細菌室贈送。

MH瓊脂及肉湯、LB瓊脂及肉湯均購自中國檢驗檢疫科學(xué)研究院北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司。苯唑西林、頭孢呋辛、頭孢唑啉、頭孢噻肟、多西環(huán)素、米諾環(huán)素、慶大霉素、利福平、頭孢吡肟、四環(huán)素、紅霉素、氯霉素及環(huán)丙沙星均購自中國藥品生物制品檢定所。亞胺培南（美國默沙東藥廠）；氨芐西林（山東魯抗醫(yī)藥有限公司）；萬古霉素（美國禮來公司）；司帕沙星（上海新先鋒藥業(yè)有限公司）。

1.2 方法

最低抑菌濃度測定（MIC）方法參照CLSI2009［4］，采用瓊脂二倍稀釋法用無菌蒸餾水配制各種抗菌藥物原液濃度為5120μg·ml－1，分別取2ml稀釋好的抗菌液，加入一系列內(nèi)徑為90mm的平板內(nèi)，再取融化后已在50℃水浴中平衡0.5h的MH瓊脂18ml加進平板內(nèi)，邊加邊搖晃平板，使藥物和培養(yǎng)基充分混勻，使各抗生素終濃度為0.0312－256μg·ml－1。每個平板接種菌液105cfu·ml－1，將平板置35℃孵育過夜。以完全抑制菌落生長的最低藥物濃度為該藥對檢測菌的MIC。單一菌落生長可忽略不計。

2 結(jié)果

不同抗生素對MRSA的MIC值及耐藥率見表1。92株MRSA對于β－內(nèi)酰胺類抗生素，慶大霉素、大環(huán)內(nèi)酯及喹諾酮類抗生素的耐藥率均在80～90%以上，部分抗生素耐藥率達到100%。對利福平的耐藥率為42.39%，對四環(huán)素的耐藥率也高達97.83%，而對人工合成的四環(huán)素如多西環(huán)素和米諾環(huán)素耐藥率較低，分別為5.56%和0%，沒有發(fā)現(xiàn)萬古霉素耐藥的金黃色葡萄球菌（VRSA）。

3 討論

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）從發(fā)現(xiàn)至今感染幾乎遍及全球，已成為院內(nèi)感染的重要病原菌之一。產(chǎn)生低親和力的青霉素結(jié)合蛋白PBP2a（由mecA基因編碼）是MRSA對β－內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的主要原因，PBP2a相對分子質(zhì)量為78 kDa，具有PBPs的轉(zhuǎn)肽酶活性。當(dāng)β－內(nèi)酰胺類抗生素與MRSA接觸后，藥物以共價鍵與PBPs結(jié)合，使其失活，此時PBP2a可代替其他4種PBPs完成細胞壁的合成［3］。MRSA還可通過改變抗生素作用靶位，產(chǎn)生修飾酶，降低膜通透性，增加主動外排作用，產(chǎn)生大量PABA等不同機制而對氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、氟喹喏酮類、磺胺類及利福平等產(chǎn)生不同程度的耐藥［5］。

表1 17種抗生素對92株MRSA的MIC值和耐藥率

對當(dāng)?shù)嘏R床分離的MRSA耐藥譜進行調(diào)查，可為臨床醫(yī)生選擇抗菌藥物治療MRSA感染提供參考。本研究結(jié)果顯示，本院附一醫(yī)院的MRSA耐藥情況比較嚴峻。MRSA對包括亞胺培南在內(nèi)的所有β－內(nèi)酰胺類抗生素均已產(chǎn)生耐藥，92株MRSA對實驗中所有β－內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥率均在80%以上，有的甚至高達100%。絕大部分菌株對氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類也不敏感。但值得注意的是，超過半數(shù)的MRSA菌株對利福平保持敏感，對氯霉素，多西環(huán)素及米諾環(huán)素也普遍敏感，未發(fā)現(xiàn)耐萬古霉素的MRSA菌株。該結(jié)果與文獻報道的MRSA耐藥譜基本相符［6－7］。雖然 MRSA對大多數(shù)抗生素耐藥，但萬古霉素仍是MRSA的首選用藥。而半合成的四環(huán)素類，如多西環(huán)素及米諾環(huán)素對MRSA仍然具有良好的抗菌活性，可考慮用于臨床MRSA的抗感染治療。

綜上所述，我院第一附屬醫(yī)院的MRSA呈多重耐藥，但對氯霉素，半合成四環(huán)素及萬古霉素仍然敏感。本研究對臨床治療MRSA感染具有一定的指導(dǎo)意義。

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