童 穎，鄭 潔，孫境翊，衛(wèi) 偉

(東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210019)

壯觀霉素(Spectinomycin)又名奇霉素，屬于氨基糖苷類抗生素，其結(jié)構(gòu)式見圖1。壯觀霉素廣泛應(yīng)用于臨床和畜牧業(yè)領(lǐng)域，但同時濫用問題也日益突出，殘留的壯觀霉素存在于動物性食品中通過食物鏈進入人體，不但使多種致病菌耐藥性增強，而且長期低水平的接觸，易引起各種慢性、蓄積性毒性，致使致癌、致畸、致突變、生態(tài)毒性、發(fā)育毒性和免疫毒性等危害的產(chǎn)生。 因此，建立簡單、靈敏、可靠的壯觀霉素檢測方法十分重要[1]。

圖1 壯觀霉素的結(jié)構(gòu)式

目前，國內(nèi)外檢測氨基糖苷類抗生素的方法主要有微生物法、薄層色譜法和液相色譜法。微生物法簡單、成本低，但耗時長，總效價和特異性差，不能區(qū)分抗生素種類及相關(guān)組分。薄層色譜法耗時短、設(shè)備價廉，但影響因素較多，定量困難?；瘜W(xué)檢測法首先對壯觀霉素進行衍生，再用液相色譜法-熒光或紫外法檢測，衍生反應(yīng)會帶來副反應(yīng)，影響檢測[2～4]。

1 實驗

1.1 試劑與儀器

MPI-B型多參數(shù)化學(xué)發(fā)光分析測試系統(tǒng)-多功能化學(xué)發(fā)光檢測儀；CHI電化學(xué)分析儀。

三電極系統(tǒng)(玻碳電極為工作電極，鉑絲為對電極，Ag-AgCl為參比電極)。

1.2 電極制備

玻碳電極在使用前用0.1 μm及0.05 μm的α-Al2O3粉在麂皮上作拋光處理，先用自來水沖洗，再用二次水沖洗，用氮氣干燥，得到平滑光潔新鮮的電極表面。

2 結(jié)果與討論

圖1 電極(a)、N-C電極(b)在pH值7.0的0.1 mol·L-1磷酸鹽緩沖溶液中的循環(huán)伏安曲線(掃描速度為100 mV·s-1)

2.2 掃描速度對-N-C電極響應(yīng)的影響(圖2)

1～9，掃描速度(mV·s-1)：20、50、100、150、200、250、300、350、400

由圖2可見，隨著掃描速度的加快，其氧化還原的峰電位有一定的位移，氧化峰與還原峰之間的峰電位差增大。處理數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，氧化峰電流與掃描速度的算術(shù)平方根成反比、還原峰電流與掃描速度的算術(shù)平方根成正比。在20～ 400 mV·s-1的范圍內(nèi)，氧化、還原峰的電流與掃描速度算術(shù)平方根的相關(guān)系數(shù)分別為0.9823和0.9931，說明修飾電極在溶液中的電化學(xué)過程為擴散控制過程。

2.3 壯觀霉素對-N-C電極的電致化學(xué)發(fā)光影響

圖3 電極在0.1 mol·L-1pH值7.0的磷酸鹽緩沖溶液中不含壯觀霉素(a)與含2.0×10-4mol·L-1壯觀霉素(b)的電致化學(xué)發(fā)光圖

C12H16O7(N+·HCH3)2

2.4 檢測條件的優(yōu)化

不同pH值的磷酸鹽緩沖溶液對壯觀霉素的測定有較大的影響。因此需要優(yōu)化支持電解質(zhì)溶液的pH值。2.0×10-5mol·L-1的壯觀霉素在不同pH值的0.1 mol·L-1磷酸鹽緩沖溶液中的電致化學(xué)發(fā)光強度見圖4。

圖4 pH值對壯觀霉素電致化學(xué)發(fā)光強度的影響

由圖4可知，pH=7.0時，電致化學(xué)發(fā)光信號最強，所以本實驗的測定在pH=7.0磷酸鹽緩沖溶液中進行。

2.5 壯觀霉素的檢測與標(biāo)準(zhǔn)曲線

與其它氨基糖甙類藥物不同，壯觀霉素大劑量(每日高達8 g)肌肉注射并不發(fā)生耳和腎臟毒性。臨床上，壯觀霉素給藥途徑為深部肌肉注射，其吸收良好，血液和尿液濃度較高。一次注射2 g劑量后血漿峰值濃度超過0.1 mg·mL-1，尿液峰值濃度約9 mg·mL-1，其血漿濃度可持續(xù)8 h或更久。因此，所建立的壯觀霉素檢測方法可用于臨床樣品的檢測。

2.6 尿樣本的測定

取新鮮尿液0.5 mL，添加濃度為50 μg·mL-1、200 μg·mL-1和600 μg·mL-1的壯觀霉素，再依次加入高氯酸鉀0.5 g、二次水4.5 mL，混勻靜置10 min，在 100 000 r·min-1下離心15 min，取上清，在上述優(yōu)化的條件下測定尿液中壯觀霉素的含量，計算回收率，驗證方法的準(zhǔn)確度，結(jié)果見表1。

表1 尿液中壯觀霉素的加標(biāo)回收率實驗結(jié)果(n=3)

由表1可知，回收率在87.1%～120.2%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.4%～5.4%之間，說明該方法是準(zhǔn)確可靠的。

3 結(jié)論

參考文獻：

[1] Wei W，Wei M，Cai Z Y，et al.Determination of spectinomycin in human urine using CE coupled with electrogenerated chemiluminescence[J].Chromatographia，2011，74(3-4)：349-353.

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[3] Edder P，Cominoli A，Corvi C.Determination of streptomycin residues in food by solid-phase extraction and liquid chromatography with post-column derivatization and fluorometric detection[J].Journal of Chromatogr A，1999，830(2)：345-351.

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