江南

（湖南衡陽市中醫(yī)醫(yī)院，湖南 衡陽421001）

偏癱康膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

江南

（湖南衡陽市中醫(yī)醫(yī)院，湖南 衡陽421001）

目的：建立偏癱康膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法（TLC）對處方中的石菖蒲、丹參、赤芍、郁金、冰片進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定制劑中丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量。結(jié)果：TLC法可檢出石菖蒲、丹參、赤芍、郁金、冰片的特征斑點；丹參酮ⅡA的線性范圍為0.032～0.32 μg（r＝0.999 9），平均回收率為99.28%（RSD=1.37%，n＝6）；丹酚酸B的線性范圍為0.56～5.6 μg（r＝0.999 9），平均回收率為99.02%（RSD= 1.74%，n＝6）。結(jié)論：該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可有效控制偏癱康膠囊的質(zhì)量。

偏癱康膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法

偏癱康膠囊是由石菖蒲、丹參、赤芍、郁金、冰片等9味中藥制成的復(fù)方制劑，具有活血化痰、祛瘀通絡(luò)的功效。用于缺血性中風(fēng)后遺癥，痰瘀阻絡(luò)，癥見肢體偏癱、語言蹇澀、舌唇紫暗、苔滑膩等。為保證偏癱康膠囊的質(zhì)量，本研究采用薄層色譜法（TLC）對方中石菖蒲、丹參、赤芍、郁金、冰片進行了定性鑒別，并采用高效液相色譜法（HPLC）對方中丹參的主要有效成分丹參酮ⅡA和丹酚酸B進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AT高效液相色譜儀 （日本島津公司），SPD-20AVP紫外檢測器 （日本島津公司），N2000色譜工作站（浙江大學(xué)智能信息工程研究所）。

1.2 試藥

偏癱康膠囊及陰性樣品 （衡陽市中醫(yī)醫(yī)院制劑室）；石菖蒲對照藥材、丹參對照藥材、赤芍對照藥材、郁金對照藥材、丹參酮ⅡA對照品、丹酚酸B對照品、芍藥苷對照品、冰片對照品（原中國藥品生物制品檢定所）；硅膠G（青島海洋化工廠）；甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 石菖蒲的鑒別[1-3]

取偏癱康膠囊（以下簡稱膠囊）內(nèi)容物0.4 g，加石油醚（60～ 90℃）20 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加石油醚（60～ 90℃）1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材0.2 g，同法制成對照藥材溶液。再取缺石菖蒲的陰性樣品，同法制成陰性溶液。照TLC（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～ 90℃）-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，放置約 1 h，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾。見圖1。

圖1 石菖蒲薄層色譜1石菖蒲對照藥材 2偏癱康膠囊 3缺石菖蒲的陰性樣品注：T，實驗時外周環(huán)境的溫度；RH，相對濕度（下同）

2.2 丹參的鑒別[1,4]

取膠囊內(nèi)容物1 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯 1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。另取丹參酮ⅡA對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL中含2 mg的溶液，作為對照品溶液。再取缺丹參的陰性樣品，同法制成陰性溶液。照TLC(中國藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述4種溶液各 5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。見圖2。

圖2 丹參薄層色譜1偏癱康膠囊 2丹參對照藥材 3丹參酮ⅡA對照品 4缺丹參的陰性樣品

2.3 赤芍的鑒別[1,4-5]

取膠囊內(nèi)容物3g，加水20mL，超聲處理10min，濾過，濾液加乙醚15 mL，振搖提取，棄去乙醚液，水液加水飽和的正丁醇15 mL，振搖提取，正丁醇液蒸干，殘渣加乙醇 1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取赤芍對照藥材0.5 g，加乙醇10 mL，超聲處理5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇 1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每 1 mL含 2 mg的溶液，作為對照品溶液。再取缺赤芍的陰性樣品，同法制成陰性溶液。照TLC(中國藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述4種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。見圖3。

2.4 郁金的鑒別[1-2]

圖3 赤芍薄層色譜1芍藥苷對照品2偏癱康膠囊3赤芍對照藥材4缺赤芍的陰性樣品

取膠囊內(nèi)容物 4 g，加無水乙醇 50 mL，超聲處理 30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇 1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取郁金對照藥材2 g，同法制成對照藥材溶液。再取缺郁金的陰性樣品，同法制成陰性溶液。照TLC（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯 （17∶3）為展開劑，預(yù)飽和30 min，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。見圖4。

圖4 郁金薄層色譜1偏癱康膠囊 2郁金對照藥材 3缺郁金的陰性樣品

2.5 冰片的鑒別[1,6-7]

取膠囊內(nèi)容物1 g，加乙醚15 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取冰片對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。再取缺冰片的陰性樣品，同法制成陰性溶液。照TLC（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。見圖5。

圖5 冰片薄層色譜圖1冰片對照品 2偏癱康膠囊 3缺冰片的陰性樣品

3 含量測定

3.1 色譜條件

3.1.1 丹參酮ⅡA色譜條件[8-10]色譜柱Kromasil C18（4.6 mm×150 mm,5 μm)，柱溫 25℃，流動相甲醇 -水 （75∶25），流速 1.0 mL/min，檢測波長270 nm。理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計算應(yīng)不低于2 000。

3.1.2 丹酚酸B色譜條件[8-10]色譜柱Kromasil C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱溫 25℃，流動相甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59），流速 1.0 mL/min，檢測波長286 nm。理論板數(shù)按丹酚酸B峰計算應(yīng)不低于2 000。

3.2 對照品溶液的制備

3.2.1 丹參酮ⅡA對照品溶液的制備 取丹參酮ⅡA對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含0.016 mg丹參酮ⅡA的溶液，即得。

3.2.2 丹酚酸B對照品溶液的制備 取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加75%甲醇制成每1 mL含0.28 mg丹酚酸B的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備

3.3.1 丹參酮ⅡA供試品溶液的制備 取膠囊內(nèi)容物0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.3.2 丹酚酸B供試品溶液的制備 取膠囊內(nèi)容物 0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 陰性溶液的制備

取缺丹參的陰性樣品，分別按3.3.1和3.3.2項下方法制備，即得。

3.5 系統(tǒng)適用性實驗

3.5.1 丹參酮ⅡA系統(tǒng)適用性試驗 分別精密吸取丹參酮ⅡA對照品溶液、供試品溶液、陰性溶液各5 μL注入高效液相色譜儀，測定，見圖6～8。丹參酮ⅡA保留時間約為32.5 min，與其他組分分離良好（分離度 ＞1.5），陰性溶液色譜圖在丹參酮ⅡA峰位置無干擾。

3.5.2 丹酚酸B系統(tǒng)適用性實驗 分別精密吸取丹酚酸B對照品溶液、供試品溶液、陰性溶液各10 μL注入高效液相色譜儀，測定，見圖9～ 11。丹酚酸B保留時間約為22 min，與其他組分分離良好（分離度＞1.5），陰性溶液色譜圖在丹酚酸B峰位置無干擾。

圖6 丹參酮ⅡA對照品色譜

圖7 丹參酮供試品色譜

圖8 缺丹參陰性色譜

圖9 丹酚酸B對照品色譜

圖10 丹酚酸B供試品色譜

圖11 缺丹參陰性色譜

3.6 線性關(guān)系考察

3.6.1 丹參酮ⅡA線性關(guān)系考察 精密吸取丹參酮ⅡA對照品溶液 2、8、10、12、16、20 μL進樣，按擬定色譜條件測定峰面積，以對照品進樣量X（μg）為橫坐標(biāo)、峰面積值Y（mv）為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，丹參酮ⅡA回歸方程

r=0.999 9，線性范圍為0.032～0.32 μg。

3.6.2 丹酚酸B線性關(guān)系考察 精密吸取丹酚酸B對照品溶液 2、8、10、12、16、20 μL進樣，按擬定色譜條件測定峰面積，以對照品進樣量X（μg）為橫坐標(biāo)、峰面積值 Y（mv）為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，丹酚酸B回歸方程

r=0.999 9，線性范圍為0.56～5.6 μg。

3.7 精密度試驗

3.7.1 丹參酮ⅡA精密度試驗 精密吸取丹參酮ⅡA對照品溶液5 μL，連續(xù)重復(fù)進樣6次，丹參酮ⅡA峰面積的RSD為0.82%（n=6），表明本測定方法精密度良好。

3.7.2 丹酚酸B精密度試驗 精密吸取丹酚酸B對照品溶液10 μL，連續(xù)重復(fù)進樣6次，丹酚酸B峰面積的RSD為0.95%（n=6），表明本測定方法精密度良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗

分別取同一批（110815）丹參酮ⅡA供試品溶液和丹酚酸B供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10 h測定峰面積。結(jié)果，丹參酮ⅡA供試品溶液的RSD=0.88%（n=6），丹酚酸 B供試品溶液的RSD=0.83%（n=6），表明兩個供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.9 重復(fù)性試驗

3.9.1 丹參酮ⅡA重復(fù)性試驗 取同一批號樣品（110815）6份，精密稱定，按3.3.1項下方法制備，進樣5 μL測定，測得丹參酮ⅡA 2.44 mg/g，RSD為1.46%（n=6），表明本測定方法具有良好的重復(fù)性。

3.9.2 丹酚酸B重復(fù)性試驗 取同一批號樣品（110815）6份，精密稱定，按3.3.2項下方法制備，進樣10 μL測定，測得丹酚酸B 65.4 mg/g，RSD為1.63%（n=6），表明本測定方法具有良好的重復(fù)性。

3.10 準(zhǔn)確度試驗

3.1 0.1丹參酮ⅡA準(zhǔn)確度試驗 采用加樣回收法，取已知含量樣品（110815），精密稱定6份，每份0.15 g，分別置6個具塞錐形瓶中，精密加入含丹參酮ⅡA對照品0.366 mg/mL的混合對照品溶液1 mL，按3.3.1項下方法制備，進樣5 μL測定，測得丹參酮ⅡA回收率 99.28%，RSD= 1.37%（n=6）。

3.1 0.2丹酚酸B準(zhǔn)確度試驗 采用加樣回收法，取已知含量樣品(110815)，精密稱定 6份，每份0.1 g，分別置6個具塞錐形瓶中，精密加入含丹酚酸B對照品6.54 mg/mL的混合對照品溶液1 mL，按3.3.2項下方法制備，進樣10 μL測定，測得丹酚酸B回收率99.02%，RSD=1.74%（n=6）。

3.11 樣品測定

3.1 1.1丹參酮ⅡA精密度試驗 取3批樣品（110815、110816、110917），按 3.3.1項下方法制備，分別精密吸取5 μL注入液相色譜儀，測定樣品中丹參酮ⅡA含量。結(jié)果，3批樣品的丹參酮ⅡA含量分別為2.44、2.47、2.42 mg/g。

3.1 1.2丹酚酸B精密度試驗 取3批樣品(110815、110816、110917），按 3.3.1項下方法制備，分別精密吸取10 μL注入液相色譜儀，測定樣品中丹酚酸B含量。結(jié)果，3批樣品的丹酚酸B含量分別為65.4、65.1、65.6 mg/g。

4 討論

石菖蒲、丹參、赤芍、郁金和冰片的薄層色譜鑒別方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，斑點清晰，陰性無干擾。丹參占處方藥量比例最大，為處方總量的1/4以上，因此，控制丹參的質(zhì)量能確保偏癱康膠囊的臨床療效。丹參藥材按中國藥典2010年版（一部）丹參含量測定項下檢驗，含丹參酮ⅡA 0.27%、丹酚酸B 7.2%。偏癱康膠囊的規(guī)格為0.35 g/粒，處方1 000粒膠囊所含的丹參藥材量為334 g，本研究測得膠囊內(nèi)容物含丹參酮ⅡA 0.244%和丹酚酸B總量為6.54%，經(jīng)過計算，與丹參藥材 (含丹參酮ⅡA 0.27%、丹酚酸 B 7.2%)比較，丹參酮ⅡA和丹酚酸 B的轉(zhuǎn)移率均為95%以上，說明膠囊中丹參酮ⅡA和丹酚酸B基本提取完全。實驗結(jié)果表明，本研究測定丹參酮ⅡA和丹酚酸B含量的方法穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好，精密度、回收率都較滿意，因此，能有效控制偏癱康膠囊的質(zhì)量。

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Study on the Quality Standards of Piantankang Capsules

Jiang Nan(Hospital of Traditional Chinese Medicine of Hengyang City,Hunan Hengyang 421001,China)

Objective:To establish the quality standards of Piantankang capsules.Methods:Acori Tatarinowii Rhizoma,Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma,Paeoniae Radix Rubra,Curcumae Radix and Borneolum Syntheticum were identified by TLC.The contents of tanshinoneⅡA and salvianolic acid B in the preparation were determined by HPLC.Results:Acori Tatarinowii Rhizoma,Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma,Paeoniae Radix Rubra,Curcumae Radix and Borneolum Syntheticum could be identified by TLC.The linear range of tanshinoneⅡA was 0.032-0.32 μg (r＝ 0.999 9),and the average recovery was 99.28% (RSD=1.37%,n＝6).The linear range of salvianolic acid B was 0.56～5.6 μg (r＝0.999 9),and the average recovery was 99.02% (RSD=1.74%,n＝ 6).Conclusion:The quality of piantankang capsules could be controlled effectively with the established quality standards.

Piantankang Capsules；Quality Standard；TLC；HPLC

10.3969/j.issn.1672-5433.2012.03.006

2011-11-18）

江南，男，主管藥師。研究方向：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和臨床藥學(xué)。E-mail：jiangnan_1977@163.com