董彥琪 肖艷 段風(fēng)華 原讓花 原連莊 吳濤 霍學(xué)文

摘要：綜述了影響小孢子培養(yǎng)的主要因素，包括供試材料(基因型、外部環(huán)境及生理狀況)、小孢子(發(fā)育時期和接種濃度)、培養(yǎng)基成分(基本培養(yǎng)基、蔗糖、生長調(diào)節(jié)劑和活性炭)、培養(yǎng)方式(低溫預(yù)處理、高溫預(yù)處理、振蕩培養(yǎng))等；闡述了影響小孢子植株再生的一些因素——胚狀體發(fā)育階段、小孢子胚在液體培養(yǎng)基中滯留時間、培養(yǎng)基水分含量、活性炭等；總結(jié)了小孢子植株繼代與加代技術(shù)，并提出了在該領(lǐng)域存在和需要解決的問題，展望了其在研究和生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：大白菜；游離小孢子培養(yǎng)；胚狀體；培養(yǎng)基；植株再生；生長調(diào)節(jié)劑；活性炭

大白菜 [Brassica campestris ssp.pekinensis(Lour.)Olsson]是原產(chǎn)于我國的一種重要蔬菜作物，屬于十字花科蕓薹屬蕓薹種大白菜亞種。大白菜在我國秋、冬季蔬菜生產(chǎn)與供應(yīng)中居主導(dǎo)地位，是我國栽培面積最大、產(chǎn)量最高的蔬菜作物。大白菜為異花授粉植物，雜種優(yōu)勢明顯，目前雜交種親本系的選育主要采用常規(guī)自交方法，此法所需年限較長，要育成純合的可利用親本需要5～7年。近年來常規(guī)育種的不足在實(shí)際工作中日漸明顯，各國學(xué)者開始尋找育種的新途徑和新方法。游離小孢子培養(yǎng)(isolatedmicrospore culture，IMC)技術(shù)是一種新興的生物技術(shù)。它具有單細(xì)胞、單倍體和較高胚胎發(fā)生率及較高同步性等特點(diǎn)，通過這種途徑可以迅速獲得雙單倍體(doubled haploid，DH)純合植株，2-3年內(nèi)便可獲得基因型完全純合的自交系，這就大大加快了育種進(jìn)程。20世紀(jì)80年代末期，日本學(xué)者Sato等首次在大白菜春性早熟類型上培養(yǎng)得到小孢子胚和再生植株：90年代初期，我國學(xué)者率先在國內(nèi)開展了大白菜小孢子培養(yǎng)。此后，國內(nèi)外學(xué)者在小孢子胚影響因素和發(fā)生機(jī)制、小孢子植株再生和加倍機(jī)制及實(shí)踐應(yīng)用等方面做了大量的探索，并取得了許多重要研究進(jìn)展，有必要進(jìn)行綜述和探討。

1影響游離小孢子胚胎發(fā)生的因素

1.1供試材料對小孢子胚胎發(fā)生的影響

1.1.1基因型基因型是影響小孢子胚胎發(fā)生率的關(guān)鍵性因素?；蛐蛯Π撞诵℃咦优咛グl(fā)生能力的決定作用體現(xiàn)在2個方面：(1)基因型的反應(yīng)范圍。曹鳴慶等、栗根義等、蔣武生等等眾多學(xué)者認(rèn)為大白菜是具有較強(qiáng)游離小孢子胚胎發(fā)生能力的栽培植物種，能成胚的基因型分別為94.12％、92.31％和87.50％：徐艷輝等的試驗(yàn)結(jié)果相反，據(jù)其報道能成胚的基因型比率較低，為18.92％。(2)胚胎發(fā)生頻率(產(chǎn)胚率)的差異。曹鳴慶等、栗根義等、蔣武生等、徐艷輝等、張鳳蘭等、方淑桂等、周英等、耿建峰等、胡齊贊等、張亞麗等、付文婷等認(rèn)為不同基因型大白菜胚狀體發(fā)生能力有明顯差異：四倍體大白菜基因型對小孢子胚胎發(fā)生能力有顯著影響。研究表明小孢子胚胎發(fā)生能力同其他遺傳性狀一樣。是一種受基因調(diào)控的遺傳特性，基因型是影響小孢子胚胎發(fā)生啟動與否的內(nèi)在因素。

小孢子胚胎的發(fā)生能力還與植株類型有一定的相關(guān)性。劉凡等報道疊抱類型大白菜產(chǎn)胚率高于合抱類型，早熟類型產(chǎn)胚率高于中、晚熟類型；方淑桂等㈣報道擰抱炮彈型品種不但比疊抱型品種胚誘導(dǎo)率高，且胚產(chǎn)量也高。

1.1.2生長環(huán)境供體植株生長的溫度條件是影響小孢子培養(yǎng)的關(guān)鍵因子。一般從發(fā)育健壯的植株上取花蕾進(jìn)行培養(yǎng)效果較好。現(xiàn)蕾開花期植株處于晝夜溫度10～25℃條件下胚狀體產(chǎn)量較高。日照長度對小孢子產(chǎn)胚量也有一定影響，長日照(14-18h)和低溫(15～20℃)條件下植株胚狀體發(fā)生數(shù)量及植株再生率高。方淑桂等研究表明，供體植株采蕾期的氣溫條件是小孢子胚胎發(fā)生的關(guān)鍵因素，采蕾前3d氣溫在14℃/24℃(夜/晝)最適宜小孢子發(fā)育。因此，在無人工氣候室的情況下，小孢子培養(yǎng)工作盡量在春季(3-4月份)進(jìn)行，以避開秋季日照短、溫度高對小孢子培養(yǎng)不利的環(huán)境條件。

1.1.3 生理狀況供體植株的花序齡對胚胎發(fā)生的影響不同。申書興等研究表明。無論是二倍體品種還是四倍體品種，株齡對小孢子胚胎發(fā)生率影響顯著，盛花期是小孢子培養(yǎng)的適宜時期。方淑桂等研究表明，盛花期的花蕾和供體植株營養(yǎng)狀況良好，有利于胚胎發(fā)生及植株再生。軒正英等研究表明，株齡對胚誘導(dǎo)率有一定影響。盛花期和末花期產(chǎn)胚率最高。周英等研究表明盛花期出胚率高于初花期和末花期，張亞麗、王秀英等也得到了同樣結(jié)果，王秀英等還進(jìn)一步指出下午取蕾優(yōu)于上午。

1.2小孢子發(fā)育時期及密度對胚狀體形成的影響

1.2.1發(fā)育時期選擇合適的花粉發(fā)育時期是提高誘導(dǎo)頻率的重要因素。胚胎發(fā)生的激發(fā)啟動，大致發(fā)生在單核中期至單核靠邊期這一短暫的發(fā)育過程中。與二倍體植株相似，四倍體大白菜的小孢子發(fā)育時期對胚胎發(fā)生率也有顯著影響。單核靠邊期小孢子占多數(shù)時胚胎產(chǎn)量最高。所以，選取合適的花粉發(fā)育時期對胚狀體的誘導(dǎo)非常重要。曹鳴慶等研究發(fā)現(xiàn)。蕾長與小孢子發(fā)育進(jìn)程密切相關(guān)。CCll基因型大白菜花蕾長2.0-2.5mm時，處于單核中期的小孢子占41.7％，處于單核靠邊期的小孢子占58.3％，此時產(chǎn)胚量最高。鄒金美通過細(xì)胞學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，當(dāng)花蕾長2.0～3.0mm，花瓣與花藥長度比為1/2～4/5時，50％-70％的小孢子處于單核靠邊期，最適合進(jìn)行花藥和游離小孢子培養(yǎng)。花蕾大小還與栽培條件有關(guān)，如溫室栽培的F₁，代材料，花蕾大小6～7mm時小孢子仍處于單核晚期，但生長在大田的植株合適花蕾僅2-4mm。因此，細(xì)胞學(xué)觀察與植物學(xué)結(jié)合確定合適的取材是必要和切實(shí)可行的。

1.2.2接種濃度接種濃度是小孢子培養(yǎng)能否成功的一個至關(guān)重要的因素。過高和過低均不利于胚的發(fā)育。過高時，會消耗大量營養(yǎng)物質(zhì)，并且釋放許多有害物質(zhì)，影響胚的發(fā)育；小孢子發(fā)育需要群體效應(yīng)，過低同樣不利于小孢子胚胎的生長發(fā)育。一般認(rèn)為小孢子密度2×10⁴～4×10²個·mL^-1最合適，而最近的研究表明1×10⁵～2×10⁵個·mL^-1最為合適。

1.3培養(yǎng)基成分對小孢子胚胎發(fā)生的影響

1.3.1基本培養(yǎng)基培養(yǎng)基是誘導(dǎo)胚胎發(fā)生的基礎(chǔ)，其不僅影響小孢子細(xì)胞的分裂，而且對胚狀體產(chǎn)生再生植株的過程也有深刻影響。栗根義等曾用改良的Lichter培養(yǎng)液。日本學(xué)者Sato等采用了大量元素減半的NLN(Nitsch and Nitsch)培養(yǎng)基，張鳳蘭等采用了BM培養(yǎng)基。近年來，絕大多數(shù)學(xué)者采用最適宜的NLN基本培養(yǎng)基，大大提高了培養(yǎng)效果。大白菜四倍體材料的小孢子培養(yǎng)也采用了NLN基本培養(yǎng)基。

1.3.2蔗糖小孢子培養(yǎng)過程中普遍采用蔗糖作為碳源，其不但提供能量還維持細(xì)胞的滲透壓。蔣武生等在不加任何激素的試驗(yàn)中比較了不同蔗糖濃

度的NLN培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果，結(jié)果表明蔗糖含量為13％時培養(yǎng)效果較好。也有人選擇10％和17％蔗糖濃度，高濃度蔗糖可保持小孢子活力，而低濃度蔗糖能促進(jìn)小孢子分裂及其進(jìn)一步發(fā)育。

1.3.3外源激素外源激素對胚形成和植株再生的影響至今沒有取得一致的結(jié)果。軒正英等研究表明，6-BA(6-Benzylaminopurine，6-芐基嘌呤)能明顯促進(jìn)胚狀體的發(fā)生，質(zhì)量濃度0.05mg·L^-1時胚產(chǎn)量最高；張亞麗等和付文婷等研究認(rèn)為6-BA對胚狀體的發(fā)生和發(fā)育有促進(jìn)作用，適宜質(zhì)量濃度為0.2mg·L^-1；韓陽等研究認(rèn)為6-BA的最適宜質(zhì)量濃度為0.4mg·L^-1。

徐艷輝等報道，BA(Benzylaminopurine，芐氨基腺嘌呤)對小孢子胚胎發(fā)生有一定的促進(jìn)作用，最佳質(zhì)量濃度為0.2mg·L^-1；但對難成胚的基因型作用不大。韓陽等研究認(rèn)為，NAA(1-naphthlcetic acid，α-萘乙酸)質(zhì)量濃度在0.10-1.00mg·L^-1時對大白菜小孢子胚的發(fā)生有抑制作用，且濃度越高，其抑制作用越大。另外，在四倍體大白菜小孢子培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，BA在0.2mg·L^-1水平下，NAA為0～1.0mg·L^-1時小孢子胚都有較高的發(fā)生頻率，但NAA高于2.0mg·L^-1時會出現(xiàn)抑制作用。在0.5mg·L^-1NAA水平下，BA為0.05～0.20mg·L^-1時小孢子產(chǎn)胚率高；BA超過0.40mg·L^-1時出現(xiàn)抑制作用。

蔣武生等[司研究表明0.5mg·L^-16-BA+0.1mg·L^-1NAA對小孢子胚胎發(fā)生具有抑制作用。韓陽等研究認(rèn)為較低濃度的細(xì)胞分裂素能促進(jìn)胚狀體的發(fā)生，6-BA的作用大于ZT(zeatin，玉米素)，ZT的最適宜質(zhì)量濃度為0.2Mg·L^-1；2,4-D(2,4-D butyl ester，2，4-D丁酯)對小孢子胚的形成有強(qiáng)烈的抑制作用。

1.3.4活性炭適量的活性炭可以加快離體培養(yǎng)進(jìn)程，提高小孢子胚產(chǎn)量、子葉形胚率及胚狀體發(fā)育的同步性，但活性炭濃度不盡一致。徐艷輝等同報道，0.01-0.02mg·mL^-1的活性炭可明顯促進(jìn)小孢子胚狀體形成。申書興等研究發(fā)現(xiàn)添加0.05-0.10mg·L^-1的活性炭對二倍體及四倍體大白菜小孢子胚生率和發(fā)育同步性均有明顯促進(jìn)作用。孫丹等研究表明。在培養(yǎng)基中添加0.10mg·mL^-1活性炭能增加大多數(shù)品種的胚產(chǎn)量。原因可能是適量活性炭吸附了小孢子胚所產(chǎn)生的有害物質(zhì)。蔣武生等研究表明，0.50g·L^-1的活性炭有利于小孢子胚誘導(dǎo)和形成。劉凡等研究也發(fā)現(xiàn)，1.40mg·mL^-1活性炭質(zhì)量濃度下。原來一些無胚狀體形成的材料有胚形成。僅有較少胚狀體形成的材料產(chǎn)生了較多胚狀體；但個別材料無論如何也得不到胚或者只能得到1至數(shù)個不正常的胚。韓陽等研究發(fā)現(xiàn)，高濃度的活性炭對小孢子胚發(fā)生表現(xiàn)出抑制作用。

1.4培養(yǎng)方法對小孢子胚胎發(fā)生的影響

1.4.1低溫(冷擊)預(yù)處理培養(yǎng)前的花蕾低溫預(yù)處理對小孢子胚胎發(fā)生有一定影響。Sato等報道冷擊預(yù)處理花蕾能提高大白菜小孢子胚發(fā)生率。軒正英等研究表明，花序在4℃下處理1-2d時，小孢子誘導(dǎo)率可明顯提高。路翠玲等研究也得到了同樣結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)未經(jīng)低溫處理或處理時間過長，其胚狀體誘導(dǎo)率較低。耿建峰等研究表明低溫處理0-5d范圍內(nèi)小孢子胚誘導(dǎo)率差異不大，超過5d則明顯降低。

1.4.2高溫(熱激)預(yù)處理

當(dāng)大白菜小孢子接種到培養(yǎng)基上時，需要高溫來啟動和誘導(dǎo)改變小孢子發(fā)育的定向過程。即從配子體發(fā)育過程轉(zhuǎn)變?yōu)殒咦芋w發(fā)育過程。栗根義等認(rèn)為35℃高溫預(yù)處理對大白菜游離小孢子胚狀體誘導(dǎo)很重要，其作用機(jī)制可能是改變小孢子發(fā)育途徑，阻止小孢子向成熟花粉粒方向發(fā)展，促進(jìn)其沿胚胎發(fā)育途徑發(fā)展，最后形成小孢子胚。

姜立榮等研究認(rèn)為，35℃高溫誘導(dǎo)下小孢子第1次細(xì)胞分裂方式多種多樣，但對稱分裂方式占優(yōu)勢。劉公社等應(yīng)用FDA和DAPI熒光顯微技術(shù)，觀察了高溫處理對小孢子培養(yǎng)的影響，研究表明，33℃高溫預(yù)處理24h，然后轉(zhuǎn)入25℃條件下培養(yǎng)。小孢子成活率雖在第1天急劇下降，但隨后仍保持一定水平：膨脹后的小孢子多呈圓球形，以類似于胚胎細(xì)胞的對稱分裂方式為主：小孢子經(jīng)多次分裂形成緊密多細(xì)胞團(tuán)，最終形成胚狀體。李菲等研究表明小孢子主要發(fā)育途徑為B途徑，33℃高溫預(yù)處理24h后單倍體小孢子體積膨大，染色體發(fā)生自然加倍，從而激發(fā)小孢子進(jìn)入孢子體發(fā)育途徑。

趙冰等研究表明33℃高溫預(yù)處理24h，不同基因型材料出胚量存在明顯差別，誘導(dǎo)效率越高的基因型對高溫反應(yīng)越敏感，出胚量也越多。蔣武生等研究發(fā)現(xiàn)，較易誘導(dǎo)的基因33℃高溫處理24h的效果最好，對于難誘導(dǎo)的基因型處理48h后胚誘導(dǎo)率高。劉公社等咖研究認(rèn)為小孢子培養(yǎng)的高溫預(yù)處理時間因基因型而異，一般在24-48h有效：若以分裂頻率為評價指標(biāo)。小孢子接受高溫處理的敏感期位于開始培養(yǎng)的12h內(nèi)：若以胚胎發(fā)生為評價指標(biāo)，敏感期位于開始培養(yǎng)的24h內(nèi)。

1.4.3振蕩培養(yǎng)游離小孢子培養(yǎng)靠固體和液體培養(yǎng)2種方式。一般液體培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)容易被小孢子吸收，但由于透氣不良，會有褐色胚產(chǎn)生。申書興等在小孢子培養(yǎng)14d后進(jìn)行搖床培養(yǎng)(60r·min^-1震蕩培養(yǎng))7d，結(jié)果表明，搖床培養(yǎng)改善了培養(yǎng)基通氣性，促進(jìn)了原胚迅速發(fā)育成子葉形胚，促進(jìn)子葉形胚率和胚狀體發(fā)育的同步性及小孢子胚直接成苗。趙俊等報道80r·min^-1低頻振蕩極大地提高了出胚數(shù)量。

2影響小孢子胚植株再生的因素

2.1胚狀體發(fā)育階段

在早期的研究中小孢子植株成苗率很低。只有5％-10％。小孢子胚再生受基因型影響，再生能力強(qiáng)的基因型易形成小孢子植株，但同一基因型處于不同發(fā)育階段的小孢子胚成苗率差異很大，子葉期胚具有迅速再生成苗的能力。魚雷期胚則較難成苗，處于球形期和心形期的胚則發(fā)育停滯。曹鳴慶等研究表明心形期至魚雷期的胚胎移植后半數(shù)以上發(fā)育為幼苗，其中5％～10％為白化苗。韓陽等研究發(fā)現(xiàn)成熟的子葉形胚成苗率可達(dá)20％，子葉已擴(kuò)大的萌發(fā)胚成苗率更高，在90％以上；發(fā)育早期的胚較難成苗，尤其是心形胚和球形胚成苗率均為0。

2.2小孢子胚在液體培養(yǎng)基中滯留時間長短

成熟的小孢子胚在培養(yǎng)基中滯留時間長短對植

株再生影響甚大。劉凡等研究表明停留14d和21d的小孢子胚轉(zhuǎn)移至MS₀培養(yǎng)56d時成苗率分別達(dá)到85％和81.6％。停留28d和35d時最終成苗率只有63.3％和42.7％，大大低于前兩者。

2.3固體培養(yǎng)基中水分含量

增加瓊脂含量降低培養(yǎng)基中的含水量，可提高胚狀體再生植株率。韓陽等研究表明。小孢子胚成熟后需要較干燥的生長環(huán)境，及時將成熟的子葉期胚轉(zhuǎn)入相對干燥的培養(yǎng)環(huán)境對植株再生有利。當(dāng)培養(yǎng)基中瓊脂含量是1.2％時，最有利于小孢子胚成苗，再生株率為50.5％。劉凡等以含瓊脂1.2％的MS₀培養(yǎng)基處理的死胚數(shù)量最少，植株成苗率最高，達(dá)到85.8％。申書興等在四倍體材料小孢子培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基水分狀況與成苗率有關(guān)，適宜胚狀體成苗的培養(yǎng)基是B5附加3％蔗糖和1.2％瓊脂。蔣武生等報道，B5+0.2mg·L^-16-BA+3％蔗糖+1％瓊脂有利于小孢子胚長成植株。

2.4活性炭

劉凡等研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)活性炭處理獲得的胚狀體在光照下轉(zhuǎn)綠、萌發(fā)、成苗等方面。都不及未經(jīng)活性炭處理獲得的小孢子胚。原因可能在于活性炭的吸附作用無選擇性，當(dāng)超過適宜濃度后，在吸附培養(yǎng)基中有害物質(zhì)的同時，也吸附了生長調(diào)節(jié)劑、鐵鹽、維生素等與胚生長和分化密切相關(guān)的必要物質(zhì)。因此活性炭濃度不宜太高，否則會起負(fù)作用。韓陽等研究表明，添加活性炭比不含活性炭成苗率高20％～122.5％，其中200mg·L^-1活性炭最有利于小孢子胚的成苗。

3小孢子胚繼代、生根和移栽

蔣武生等研究表明，小孢子胚可在B5+0.20mg·L^-16-BA+0.02mg·L^-1NAA繼代培養(yǎng)基上每25～30d繼代1次。再將高度為3-5cm的健壯苗轉(zhuǎn)移到Ms+0.10mg·L^-1NAA生根培養(yǎng)基上形成完整植株，植株4～5片葉時。移入盛有園田土的營養(yǎng)缽中7d后生根，10～15d后成活，成活率可達(dá)95％。付文婷等也有近似報道，B5+0.20mg·L^-16-BA+0.02mg·L^-1NAA有利于小孢子胚發(fā)育成植株，1/2MS+0.1mg·L^-1NAA適宜小孢子植株生根。徐艷輝等研究表明，2個基因型的小孢子胚在MS+0.8％瓊脂+3％蔗糖+0.1mg·L^-1KT(Kinetin，激動素)+0.5mg·L^-1BA上的成活率分別為82％和92.5％。繼代培養(yǎng)后的小孢子植株在1/2MS+3％蔗糖+0.8％瓊脂+0.1mg·L^-1NAA生根培養(yǎng)基上生根良好，已生根的小孢子植株移到1/2壤土+1/2糞土的盆中便可生長。張亞麗等研究表明，B5+0.1mg·L^-1GA³(GibberellinA₃，赤霉素)是小孢子胚芽分化的最佳培養(yǎng)基，1/2MS+0.1mg·L^-1NAA為小孢子植株最適宜生根培養(yǎng)基。周英等研究表明，MS+0.10mg·L^-1NAA為小孢子植株生根最適宜培養(yǎng)基，

趙岫云等研究表明，小孢子植株再生能力的遺傳符合加性一顯性模式。主要受核基因控制，基因作用以加性效應(yīng)為主。植株再生能力由隱性基因控制，狹義遺傳力為70.6％。這為改良小孢子植株再生能力差的材料提供了一條有意義的途徑，可選用植株再生能力強(qiáng)的材料與之雜交，提高后代植株再生能力，從而獲得更多的小孢子再生植株。

4小孢子植株加倍技術(shù)

由小孢子培養(yǎng)所得到的植株只有通過染色體加倍成為二倍體才能應(yīng)用于育種實(shí)踐。小孢子再生植株中出現(xiàn)DH植株的頻率不完全相同，但總體趨勢是頻率較高。曹鳴慶等研究由小孢子培養(yǎng)產(chǎn)生的小孢子植株中自然加倍率在50％～70％。張鳳蘭等研究了春秋兩季小孢子再生植株自然加倍率不等，多數(shù)品種在70％，還認(rèn)為由該游離小孢子培養(yǎng)得到的再生植株無需人工加倍處理，有自然加倍成為二倍體的特點(diǎn)。這一研究結(jié)果為該技術(shù)在育種工作上的有效利用提供了廣闊前景。李菲等研究表明，小孢子胚再生植株具有較高的自然加倍率，并且與熱激誘導(dǎo)激發(fā)小孢子單核自然加倍為二倍體密切相關(guān)。如需人工加倍，主要用0.2～4.0mg·g^-1秋水仙堿處理單倍體植株。

5問題與展望

綜上所述，游離小孢子培養(yǎng)這一具有重要理論意義和實(shí)踐價值的生物技術(shù)越來越被科研工作者所重視，并得到廣泛應(yīng)用。但還存在著許多理論和實(shí)際問題，如在適宜條件下，大多數(shù)基因型可獲得小孢子胚，但也有少數(shù)基因型不能獲得小孢子胚及再生植株，這一領(lǐng)域所取得的進(jìn)展尚未達(dá)到隨意操作雄配子的程度，在啟動機(jī)理、微觀發(fā)育機(jī)制、發(fā)育途徑以及與之相關(guān)的生理生化方面的理論研究還十分欠缺。

利用該技術(shù)能夠在較寬的基因型范圍內(nèi)以較高的胚狀體發(fā)生率獲得小孢子胚和再生植株，但遠(yuǎn)遠(yuǎn)沒有達(dá)到建立起完善的、高頻的再生體系的程度。小孢子植株具有自然加倍成為二倍體的特點(diǎn)，在遺傳和g種研究方面具有十分誘人的應(yīng)用前景，但關(guān)于小孢子胚自然加倍機(jī)制尚待進(jìn)一步探討。

今后應(yīng)加強(qiáng)理論研究和實(shí)驗(yàn)技術(shù)兩方面的工作，建立能穩(wěn)定、高效地獲得純合二倍體的游離小孢子培養(yǎng)體系，使之與傳統(tǒng)育種技術(shù)有機(jī)結(jié)合成為大白菜育種的一個重要組成部分。

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