李東子 吳景東

[摘要]目的：研究與探討葛根對(duì)小鼠自然衰老的延緩作用。方法：健康4月齡雌性昆明種小鼠15只，作為青年對(duì)照組（A）；健康18月齡雌性昆明種小鼠90只，隨機(jī)分為6組：老年空白對(duì)照組（B）、老年陽(yáng)性對(duì)照組（C）、老年葛根中劑量組（D）、老年葛根高劑量組（E）、老年葛根素中劑量組(F)、老年葛根素高劑量組（G）。以灌胃方式給藥，以生化分析方法測(cè)定過(guò)氧化氫酶（CAT）及過(guò)氧化氫（H2O2）含量的影響。結(jié)果：與青年對(duì)照組比較，其余六個(gè)老年組CAT的活力下降，H2O2含量顯著增高；與老年空白對(duì)照組比較，其余五個(gè)老年用藥組均可提高CAT活性，降低H2O2含量。結(jié)論：葛根及葛根素具有延緩小鼠自然衰老的作用。

[關(guān)鍵詞]葛根；葛根素；自然衰老；過(guò)氧化氫酶；過(guò)氧化氫

[中圖分類(lèi)號(hào)]R332Q591.2[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455（2012）01-0082-02

Effect of radices puerarire and puerarin on activities of CAT and content of H2O2 of naturally senile mice

LI Dong-zi,WU Jing-dong

(1.Sahmyook University,South Korea 100-000;2.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China)

Abstract:ObjectiveTo study and discuss that radices puerarire and puerarin have function on delaying naturally senile mice.MethodsHealthy 4 month old mice were 15, as the young control group (A); healthy 18 month old mice were 90 as the elderly group, and then randomly divided into 6 groups:elderly control group (B), positive control group elderly (C),middlepuerarin dose group(D), high puerarin dose group(E), middle radices puerarire dose group(F),high radices puerarire dose group(G). Giving medicine by filling stomach. Determined by biochemical analysis of CAT and H2O2 content.ResultsCompared with the young control group,the remaining mice in each six elderly aged group's the vitality of CAT decreased significantly, H2O2 in serum were significantly higher. Compared with the elderly control group, treatment group of other elderly can improve the vitality of CAT and reduce H2O2 content.ConclusionRadices puerarire and puerarin have function on delaying the naturally senile mice.

Keyword：radices puerarire; puerarin; aging; CAT; H2O2

葛根為常用中藥，是豆科植物野葛或干葛藤的干燥根，干葛藤又可稱(chēng)為粉葛，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為中品，有“山人參”的美稱(chēng)。葛根性平，味甘辛，具有發(fā)表解肌、開(kāi)陽(yáng)透疹、解熱生津等作用?，F(xiàn)代研究表明，葛根具有多種藥理作用，如抗心律失常、降血糖、抗氧化、抗癌等。本課題通過(guò)觀察葛根及葛根素對(duì)自然衰老小鼠血清中CAT活力及H2O2含量的影響，探討葛根及葛根素是否具有抗皮膚衰老的作用，為研究和開(kāi)發(fā)延緩衰老的藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組方法：健康雌性4月齡昆明種小鼠15只，作為青年對(duì)照組(A)；健康雌性18月齡昆明種小鼠90只作為老年組，再隨機(jī)分成6組，每組15只：老年空白對(duì)照組(B)、老年陽(yáng)性對(duì)照組(C)、老年葛根中劑量組(D)、老年葛根高劑量組(E)、老年葛根素中劑量組(F)、老年葛根素高劑量組(G)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及給藥方法：實(shí)驗(yàn)藥物：中藥葛根（由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥藥劑科提供）；葛根素（購(gòu)自成都曼斯特生物科技有限公司）；維生素EC混懸液（購(gòu)于成大方圓藥房，藥品批號(hào)，國(guó)藥準(zhǔn)字H11022348北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司），將維生素EC顆粒與蒸餾水制成混懸液；0.9%生理鹽水，購(gòu)于成大方圓藥房，國(guó)藥準(zhǔn)字h22022056吉林省廣春藥業(yè)有限公司。以上藥物制備完成后置4℃冰箱備用。

給藥方法：A組：給予生理鹽水(20ml/kg)；B組：給予生理鹽水(20ml/kg)；C組：給予維生素EC混懸液(30mg/kg)；D組：給予中藥葛根(60mg/kg)；E組：給予中藥葛根(100mg/kg)；F組：給予葛根素混懸液(60mg/kg)；G組：給予葛根素混懸液(100mg/kg)。以上操作每日一次，連續(xù)進(jìn)行30天。

1.3 取材方法：第31天采用眼球后靜脈叢取血法，將取得的小鼠血液放入離心機(jī)中離心8 min，轉(zhuǎn)速為3 500r/min，抽取上清液即小鼠血清放入帶蓋離心管中，冷凍于-20℃冰柜中保存，待進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。

1.4 主要試劑和儀器：CAT及H2O2試劑盒，均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定均按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定，采用化學(xué)比色法。

BLG10電子秤、AnKeTDL-5-A離心機(jī)、水浴箱、酶標(biāo)儀（美國(guó)）等設(shè)備及其它實(shí)驗(yàn)器材均由遼寧中醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)均通過(guò)SPSS11.5 版本軟件進(jìn)行處理，各組實(shí)驗(yàn)參數(shù)以x±s表示，組間差異按方差分析進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，并用最小顯著差法（LSD法）作兩兩比較。

2結(jié)果與分析

2.1 小鼠血清中CAT的活力：與青年對(duì)照組比較，其余六個(gè)老年組小鼠血清中CAT的活力顯著下降，分別是P﹤0.05，P﹤0.05，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01。與老年空白組比較，其他老年用藥組小鼠血清中CAT的活力均有提高， P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01。見(jiàn)表1。

2.2 小鼠血清中H2O2的含量：與青年對(duì)照組比較，其余五個(gè)老年各組小鼠血清中H2O2含量顯著增高，分別是P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01。與老年空白組比較，其他老年用藥組均可降低H2O2含量，分別是P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01。見(jiàn)表2。

3討論

衰老一種多環(huán)節(jié)的生物學(xué)過(guò)程，是機(jī)體在退化時(shí)期功能下降和紊亂的綜合表現(xiàn)，簡(jiǎn)而言之，衰老就是體內(nèi)各臟器細(xì)胞功能減低的現(xiàn)象。到目前為止，有關(guān)衰老機(jī)理的理論提出了很多，其中自由基學(xué)說(shuō)雖還不能完全解釋衰老的過(guò)程，但自由基和衰老之間的密切聯(lián)系已被大家所認(rèn)同。

自由基（Free Radicals）衰老學(xué)說(shuō)認(rèn)為[1]：體內(nèi)許多物質(zhì)代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生過(guò)氧化的自由基，當(dāng)機(jī)體內(nèi)的自由基代謝處于不平衡狀態(tài)時(shí)，過(guò)量的自由基就會(huì)引起機(jī)體損傷，將不飽和脂肪酸氧化成超氧化物，形成脂褐素。脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)對(duì)生物膜內(nèi)類(lèi)脂結(jié)構(gòu)的破壞極大，生物膜上不飽和脂肪酸過(guò)氧化后，雙層結(jié)構(gòu)破壞，膜功能受損，致細(xì)胞器功能障礙。

過(guò)氧化氫是生物氧化過(guò)程的產(chǎn)物[2]。對(duì)大多數(shù)組織來(lái)說(shuō)，H2O2可能是一種毒物，H2O2可以氧化某些具有重要生理作用含巰基的酶和蛋白質(zhì)，使之喪失活性，還可以將細(xì)胞膜磷脂分子中高度不飽和脂肪酸氧化成過(guò)氧化物，產(chǎn)生過(guò)氧化脂質(zhì)，后者又通過(guò)自身催化作用連續(xù)生成大量過(guò)氧化物，結(jié)果使磷脂的功能障礙。過(guò)氧化脂質(zhì)與蛋白質(zhì)結(jié)合形成的復(fù)合物，進(jìn)入溶酶體，不易被酶分解排出，可累積形成一種棕褐色的色素顆粒，稱(chēng)為脂褐素，在皮膚上可形成老年斑，與衰老有關(guān)。過(guò)氧化氫酶，其是過(guò)氧化物的清除劑，CAT催化過(guò)氧化氫分解為水和氧氣，從而保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)及功能不受氧化物的損害[3]。

葛根為豆科植物野葛或干葛藤的干燥根，干葛藤又可稱(chēng)為粉葛。葛根為常用中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為中品，有山人參之美稱(chēng)。其性平，味甘辛，具有發(fā)表解肌、開(kāi)陽(yáng)透疹、解熱生津等作用，還具有較強(qiáng)的活血化淤，舒筋活絡(luò)，升陽(yáng)止瀉作用，對(duì)心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等疾病有較好的治療效果[4]。葛根的藥用價(jià)值很大，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明其富含人體必需的氨基酸和多種微量元素，具有多種藥理作用，如抗心律失常作用、對(duì)高血壓高血脂的治療作用、降血糖作用、抗氧化作用、抗癌作用、對(duì)雌激素的調(diào)節(jié)作用、對(duì)記憶的影響對(duì)免疫作用的影響等。

臨床上葛根的常用量為15～30g/天 ,大劑量者可用到50～100g/天 ,亦未見(jiàn)不良反應(yīng),所以葛根的臨床使用比較安全。葛根素的LD50高達(dá)78.1mg/kg，有關(guān)不良反應(yīng),甚至罕見(jiàn)不良反應(yīng)也不斷見(jiàn)于文獻(xiàn),臨床上應(yīng)予以高度重視[5]。

結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可得出葛根及葛根素可以提高自然衰老小鼠血清中過(guò)氧化氫酶（CAT）活性，降低過(guò)氧化氫（H2O2）含量。葛根及葛根素通過(guò)清除氧自由基，對(duì)小鼠自然衰老進(jìn)程有一定的控制和影響作用，可起到抗氧化作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1]郝祥俊,顏勇.重要抗衰老研究近況[J].承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,23(1):75.

[2]韓曉琳.H2O2和細(xì)胞凋亡[J].濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,29(1):68-69.

[3]傅玉娟,吳景東.絞股藍(lán)提取液對(duì)光老化模型小鼠皮膚組織中CAT、GSH-Px活性與H2O2含量影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2005, 23:216-217.

[4]徐國(guó)鈞,何宏賢.中國(guó)藥材學(xué)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1996:249.

[5]王波,張俊斌.葛根素的非常規(guī)應(yīng)用及毒副作用[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志,2010,23 (2):209-210.

[收稿日期]2011-07-23[修回日期]2011-11-15

編輯/張惠娟