馮婧 何先元 李達 馬發(fā)君

摘要：探討云木香（Ａｕｃｋｌａｎｄｉａ ｌａｐｐａ Ｄｅｃｎｅ．）多糖提取工藝的影響因素，確定其最佳提取工藝條件，為進一步分離純化及生產(chǎn)開發(fā)打下基礎(chǔ)。采用正交設(shè)計，以多糖提取率為評價指標(biāo)，對水提和醇沉的工藝分別進行優(yōu)化。結(jié)果表明，最佳工藝條件為固液比１∶１８（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ），提取時間２ ｈ，提取溫度８０ ℃，生藥濃度１．０ g／ｍＬ，乙醇體積分?jǐn)?shù)８０％，提取２次。

關(guān)鍵詞：云木香（Ａｕｃｋｌａｎｄｉａ ｌａｐｐａ Ｄｅｃｎｅ．）；多糖；提取工藝

中圖分類號：Ｑ９４９．７８３．５；Ｒ２８４．２ 文獻標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）14－3059-03

Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Technology ｏｆ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ａｕｃｋｌａｎｄｉａ ｌａｐｐａ

ＦＥＮＧ Ｊｉｎｇ１，ＨＥ Ｘｉａｎ－ｙｕａｎ１，ＬＩ Ｄａ１，ＭＡ Ｆａ－ｊｕｎ２

（１．College of Pharmacy， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００１０，Ｃｈｉｎａ；

２．Ｊｉｎｍａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． ｉｎ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０４６００，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｆａｃｔｏｒｓ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ Ａｕｃｋｌａｎｄｉａ ｌａｐｐａ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｏ ｂｕｉｌｄ ｔｈｅ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｉｔｓ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ． Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｓ ｉｎｄｅｘ， ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ａｌｃｏｈｏｌ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｃｈｅｍｅ ｗａｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ， ｓｏｌｉｄ ｔｏ ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ， １∶１８（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ）； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， ２ ｈ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ８０ ℃； ｃｒｕｄｅ ｈｅｒｂａｌ ｄｏｓｅ， １ ｍＬ／ｇ； ｖｏｌｕｍｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ， ８０％； ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｗｉｃｅ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ａｕｃｋｌａｎｄｉａ ｌａｐｐａ Ｄｅｃｎｅ．； ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ； extraction technology

云木香（Ａｕｃｋｌａｎｄｉａ ｌａｐｐａ Ｄｅｃｎｅ．）又名蜜香、青木香、南木香、廣木香［１］，為多年生高大菊科草本植物，以其根莖入藥，有健胃消脹、調(diào)氣解郁、止痛安胎的作用。云木香中含有萜類、甾體、配糖體、糖、生物堿、脂肪酸、酯和氨基酸等多種成分［２］?，F(xiàn)代研究表明多糖是中草藥發(fā)揮獨特療效的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，具有抗腫瘤、抗病毒、抗炎、降血糖、降血脂、抗輻射以及調(diào)節(jié)免疫功能等多種藥理作用［３］。研究采取多因素正交試驗對云木香多糖提取的工藝條件進行優(yōu)化，為進一步綜合利用云木香藥材資源，控制云木香藥材質(zhì)量以及云木香多糖的進一步生產(chǎn)開發(fā)打下基礎(chǔ)。

１材料與方法

１．１材料

１．１．１藥材與試劑云木香藥材采自重慶市奉節(jié)縣中藥材種植基地，經(jīng)鑒定為云木香（Ａｕｃｋｌａｎｄｉａ ｌａｐｐａ Ｄｅｃｎｅ．）的根；葡萄糖對照品、無水乙醇、氯仿、丙酮、乙醚、鹽酸均為分析純。

１．１．２儀器與設(shè)備ＵＶ－１２００紫外可見分光光度計購自上海美譜達儀器有限公司，電子分析天平購自北京賽多利斯儀器有限公司，ＳＨＺ－Ｄ（Ⅲ）循環(huán)水式多用真空泵購自鞏義予華儀器有限責(zé)任公司，ＫＱ５２００ＤＡ型數(shù)控超聲波清洗器購自昆山市超聲儀器有限公司，ＨＨ－６數(shù)顯恒溫水浴鍋購自江蘇省金壇市榮華儀器制造有限責(zé)任公司，ＲＥ－３０００Ａ旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購自上海亞榮生化儀器廠。

１．２方法

１．２．１標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的配制精確稱取于１０５ ℃干燥至恒重的葡萄糖５０ ｍｇ置于１００ ｍＬ容量瓶中，加去離子水溶解并定容至刻度，即得０．５ ｍｇ／ｍＬ葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取０．５、１．０、１．５、２．５、４．０ ｍＬ葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液至２５ ｍＬ容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，得一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

１．２．２苯酚溶液的配制?。保埃?ｇ苯酚，加０．１ ｇ鋁片和０．２ ｇ碳酸氫鈉。蒸餾，收集１８２ ℃的餾分５ ｇ，加１００ ｍＬ去離子水溶解，置于棕色試劑瓶中，制成５０ ｇ／Ｌ苯酚溶液，冷藏備用。

１．２．３標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確吸取由１．２．１配制的５種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液２ ｍＬ分置于１０ ｍＬ具塞試管中，各管再加入１ ｍＬ ５０ ｇ／Ｌ苯酚溶液，搖勻并迅速加入５ ｍＬ濃硫酸，于常溫放置２５ ｍｉｎ，于４９０ ｎｍ處以空白溶液為參比測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以吸光度（Ａ）對樣品濃度（c）進行回歸，得出標(biāo)準(zhǔn)方程為＝８．３２４ ７c＋０．０１９ ０，ｒ＝０．９９６ ４。

１．２．４云木香多糖樣品的制備云木香樣品的處理：稱取云木香粗粉１８ ｇ，分成９份，每份２ ｇ，分別置于圓底燒瓶中，先用１００ ｍＬ無水乙醇浸泡，去色素，然后于常溫離心、干燥，即得到處理以后的云木香粉末。濃縮：將提取液趁熱過濾，通過水浴將濾液濃縮至一定體積，即得到含有一定濃度生藥的提取液。醇沉干燥：在攪拌下向濾液加入一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇，于４ ℃冰箱靜置２４ ｈ，過濾，用乙醇、乙醚洗滌，于６０ ℃將沉淀烘至恒重，精確稱定質(zhì)量，得多糖。測定多糖含量，計算多糖提取率，對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)處理和方差分析。

１．２．５樣品液的配制與測定精確稱取于６０ ℃干燥至恒重的云木香多糖提取物０．０５ ｇ，用去離子水溶解于５０ ｍＬ容量瓶中，量?。?ｍＬ至１０ ｍＬ容量瓶中，用去離子水定容至刻度，各取１ ｍＬ至具塞試管中，測定樣品吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方程計算多糖含量。多糖提取率＝［（沉淀質(zhì)量×多糖含量）／樣品質(zhì)量］×１００％。

１．２．６正交試驗根據(jù)云木香多糖的性質(zhì)和文獻［４］的報道，云木香多糖的提取可分為水提與醇沉２個過程，采用正交試驗設(shè)計分別對水提與醇沉的工藝條件進行了優(yōu)化，并采用方差分析對試驗結(jié)果進行分析。

１）水提工藝條件的優(yōu)化方法。以固液比、提取時間、提取溫度、提取次數(shù)４種因素為考察對象，每種因素各?。硞€水平（表１），按Ｌ９（３４）正交試驗設(shè)計，以多糖提取率為評價水提效果的指標(biāo)，對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)處理和方差分析。

２）醇沉工藝條件的優(yōu)化方法。影響醇沉提取效果的因素主要有生藥濃度、乙醇體積分?jǐn)?shù)。以上述２種因素為考察對象，每種因素各?。硞€水平（表２），按Ｌ９（３４）正交試驗設(shè)計，以多糖提取率為評價醇沉提取效果的指標(biāo)，對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)處理和方差分析。

２結(jié)果與分析

２．１水提工藝條件的優(yōu)化結(jié)果

對結(jié)果進行直觀分析和方差分析，從表３可知，４種因素對水提云木香多糖的影響為Ａ（固液比）＞Ｂ（提取溫度）＞Ｃ（提取時間）＞Ｄ（提取次數(shù)）；方差分析結(jié)果表明，因素Ａ、Ｂ各水平差異顯著，因素Ｃ、Ｄ各水平差異不顯著。直觀分析表明水提云木香多糖的最佳工藝條件為Ａ３Ｂ２Ｃ２Ｄ２，即固液比１∶１８（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ），提取時間２ ｈ，提取溫度８０ ℃，提?。泊巍?/p>

２．２醇沉工藝條件的優(yōu)化結(jié)果

對結(jié)果進行直觀分析和方差分析可知，兩種因素對醇沉提取云木香多糖的影響為Ａ（生藥濃度）＞Ｂ（乙醇體積分?jǐn)?shù)）（表４），因素Ａ、Ｂ各水平差異均無顯著性，從直觀分析可知醇沉云木香多糖的最佳工藝條件為Ａ１Ｂ２，即生藥濃度為１．０ ｇ／ｍＬ，乙醇體積分?jǐn)?shù)為８０％，并于４ ℃冰箱靜置２４ ｈ。

３小結(jié)與討論

多糖在抗衰老、抗病毒、腫瘤治療和糖尿病治療等方面有良好的應(yīng)用前景；另外多糖還可以改善食品的食用品質(zhì)、加工特性和外觀特性，在食品中的用途十分廣泛。

研究篩選出來的最佳工藝條件為固液比１∶１８（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ），提取時間２ ｈ，提取溫度８０ ℃，生藥濃度１．０ g／ｍＬ，乙醇體積分?jǐn)?shù)８０％，提?。泊?，于４ ℃冰箱靜置２４ ｈ。

多糖的水提和醇沉是不同的工藝過程，所以對水提和醇沉分離分別采用正交試驗設(shè)計來考察最佳水提工藝和醇沉工藝是有必要的。試驗結(jié)果證實醇沉提取工藝中只有在乙醇體積分?jǐn)?shù)適當(dāng)?shù)那闆r下提取云木香多糖才能達到比較理想的結(jié)果。

參考文獻：

［１］ 宋立人，洪恂，丁緒亮，等． 現(xiàn)在中藥學(xué)大辭典［Ｍ］． 北京：人民衛(wèi)生出版社，２００１．３３０－３３２．

［２］ 楊輝，謝金倫，孫漢董．云木香化學(xué)成分及藥理作用研究概況［Ｊ］． 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，１９９７，１０（２）：９０－９８．

［３］ 鄧小云，丁登峰，戴美紅，等． 植物多糖藥理作用研究進展［Ｊ］． 中醫(yī)藥導(dǎo)報，２００６，１２（９）：８６－８８．

［４］ 胡文靜，劉寶瑞，錢曉萍，等． 正交方法優(yōu)選黨參多糖的提取工藝［Ｊ］． 南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，２００７，２３（１）：５１－５３．