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        喉癌組織微淋巴管密度和微血管密度的定量測定及臨床意義

        2012-04-29 00:44:03張亞軍盛成岳利華蔣志毅
        中國現(xiàn)代醫(yī)生 2012年24期

        張亞軍 盛成 岳利華 蔣志毅

        [摘要] 目的 探討不同喉部病變組織微淋巴管和微血管的密度及臨床意義。 方法 選擇喉鱗狀細胞癌40例及喉鱗狀上皮不典型增生和成人喉乳頭狀瘤患者各20例病變標本,分別進行微淋巴管及微血管染色。 結果 喉鱗狀細胞癌、喉鱗狀上皮不典型增生和喉乳頭狀瘤組織中LVD及MVD值之間差異均有統(tǒng)計學意義(P <0.01)。高分化癌組織LVD和MVD顯著高于中、低分化癌組織,TNM Ⅲ~Ⅳ期癌組織LVD和MVD顯著高于Ⅰ~Ⅱ期癌組織,淋巴結轉移的癌組織LVD和MVD顯著高于無淋巴結轉移的癌組織(P < 0.01),聲門上型癌組織MVD顯著高于聲門型癌組織(P < 0.05)。LVD、MVD及TNM分期是影響喉鱗狀細胞癌患者生存時間的獨立危險因素(P < 0.05)。 結論 喉癌的發(fā)展和轉移與微淋巴管及微血管的密度有關,兩者都是喉癌預后的負性因子,定量測定可作為喉癌預后的指標。

        [關鍵詞] 喉腫瘤;鱗狀細胞癌;微血管密度;微淋巴管密度

        [中圖分類號] R739.65[文獻標識碼] B[文章編號] 1673—9701(2012)24—0030—03

        The quantitative determination and its clinical significance of lymphatic vessel density and microvessel density in laryngeal carcinoma

        ZHANG Yajun SHENG Cheng YUE Lihua JIANG Zhiyi

        Department of Otolaryngology, First Hospital of Jiaxing City in Zhejiang Province, Jiaxing 314000, China

        [Abstract] Objective To investigate the lymphatic vesseldensity (LVD) and microvessel density (MVD) in different laryngeal lesions and the clinical significance of them. Methods Quantitative determination of lymphatic vessel density and microvessel density in laryngeal cancer (n = 40), laryngeal squamous dysplasia (n = 20) and laryngeal papilloma in adults (n = 20) were done. Results Laryngeal squamous cell carcinoma, laryngeal squamous dysplasia and laryngeal papilloma tissue differences between LVD and MVD were statistically significant (P < 0.01). LVD and MVD of poorly—differentiated cancer tissue were significantly higher than in well—differentiated cancer tissue; LVD and MVD of TNM Ⅲ—Ⅳ of cancer tissue were significantly higher than the TNMⅠ—Ⅱ cancer tissues, LVD and MVD of with lymph node metastasis in cancer tissues were significantly higher than those without lymph node metastasis in cancer tissues (P < 0.01); MVD of supraglottic cancer were significantly higher than the glottic cancer group (P < 0.05). LVD, MVD and TNM stage were the independent risk factors for laryngeal squamous cell carcinoma of the survival time of patients (P < 0.05). Conclusion The development and transferation of the laryngeal tumor is related to micro lymphatic and capillary density, both are laryngeal negative prognostic factors, quantitative determination of the index can be as a predictor of laryngeal tumor prognosis.

        [Key words] Laryngeal tumors; Squamous cell carcinoma; Microvessel density; Lymphatic vessel density

        喉癌是常見的頭頸部惡性腫瘤,鱗狀細胞癌是主要的類型,其發(fā)生與多種因素有關。腫瘤組織生長迅速,代謝旺盛,離不開血管系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)的支持,而腫瘤內(nèi)的微淋巴管和微血管也被證明與腫瘤的生長和轉移有關。為進一步了解喉癌組織中微淋巴管和微血管分布與喉癌臨床病理特征及預后的關系,指導臨床對喉癌的診斷和治療,本研究對喉鱗狀細胞癌組織中微淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD)和微血管密度(microvessel density,MVD)進行定量測定與分析。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選擇2008年1月~2011年6月在我院行喉部分或全切除術治療的原發(fā)性喉癌患者的喉癌病理組織標本40例,經(jīng)病理證實為鱗狀細胞癌,男31例,女9例,年齡43~76歲,平均(61.56±10.27)歲,均未接受任何放療、化療,聲門上型28例,聲門型12例;組織學分級按WHO1990年標準:高分化鱗癌15例,中分化鱗癌13例,低分化鱗癌12例;臨床分期按國際抗癌協(xié)會(UICC)2002年版TNM標準:Ⅰ期10例、Ⅱ期13例、Ⅲ期9例、Ⅳ期8例;淋巴結轉移22例,無淋巴結轉移18例。另選擇喉鱗狀上皮不典型增生和成人喉乳頭狀瘤患者病變標本各20例,三組患者的性別、年齡差異均無統(tǒng)計學意義(P > 0.05)。

        1.2 試劑

        鼠抗人CD105單克隆抗體、二甲胂酸鈉、二甲基甲酰胺、左旋咪唑、萘酚AS—MX磷酸鈉、腺苷—5—磷酸鈉、固藍BB鹽即用型免疫組化(SP)檢測試劑盒及DAB顯色劑均為美國Sigma公司產(chǎn)品,購自上海工碩生物技術有限公司。

        1.3 方法

        所有標本經(jīng)石蠟包埋,連續(xù)切片,厚4 μm,脫蠟、水化、過氧化氫預孵、漂洗。取同一標本相鄰切片分別采用酶組化染色法以腺苷—5—磷酸鈉進行淋巴管染色,鏈霉素親和素—生物素—過氧化物酶復合物技術(SABC)進行CD105標記血管染色。按試劑盒說明書操作進行。PBS替代一抗作為陰性對照,試劑公司提供陽性樣本作為陽性對照。

        1.4 判斷標準

        腺苷—5—磷酸鈉標記于微淋巴管內(nèi)皮細胞,陽性呈棕黃色。CD105標記于微血管內(nèi)皮細胞,陽性呈棕黃色。LVD和MVD計數(shù)方法均為:于40倍光鏡下尋找全部視野下淋巴管或血管高密度區(qū)域,再于400倍光鏡下計數(shù)5個視野內(nèi)微淋巴管/微血管數(shù),求平均數(shù)作為該標本LVD或MVD。

        1.5 統(tǒng)計學方法

        采用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學處理,計量資料采用t檢驗或方差分析,計數(shù)資料采用χ2檢驗,無進展生存曲線采用Kaplan—Meier法繪制,采用Log—rank法檢驗,采用COX模型進行多因素分析,P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結果

        2.1 不同喉部病變組織中微淋巴管和微血管染色表達比較

        喉鱗狀細胞癌、喉鱗狀上皮不典型增生和喉乳頭狀瘤組織中LVD及MVD值之間差異均有統(tǒng)計學意義(P < 0.01),喉鱗狀細胞癌組織LVD及MVD值均顯著高于喉鱗狀上皮不典型增生和喉乳頭狀瘤組織,喉鱗狀上皮不典型增生組織中LVD及MVD值介于喉鱗狀細胞癌和喉乳頭狀瘤組織之間。

        2.2 LVD及MVD與喉鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系

        低分化癌組織LVD顯著高于中、高分化癌組織,TNM Ⅲ~Ⅳ期癌組織LVD顯著高于Ⅰ~Ⅱ期癌組織,淋巴結轉移的癌組織LVD顯著高于無淋巴結轉移的癌組織(P < 0.01),與年齡、性別及腫瘤位置無關(P > 0.05)。低分化癌組織MVD顯著高于中、高分化癌組織,TNM Ⅲ~Ⅳ期癌組織MVD顯著高于Ⅰ~Ⅱ期癌組織,淋巴結轉移的癌組織MVD顯著高于無淋巴結轉移的癌組織(P < 0.01),聲門上型癌組織MVD顯著高于聲門型癌組織(P < 0.05)。見表2。

        2.3 LVD及MVD與喉鱗狀細胞癌患者預后的關系

        40例喉鱗狀細胞癌患者根據(jù)LVD和MVD均值分為:高于均值為HLVD組和HMVD組,低于均值為LLVD組和LMVD組,HLVD組和LLVD組分別為24例和16例,HMVD組和LMVD組分別為22例和18例,根據(jù)術后隨訪結果,隨訪時間(31.48±10.57)個月,HLVD組和LLVD組中位無進展生存期分別為22.38個月、30.53個月,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.396,P < 0.05);HMVD組和LMVD組中位無進展生存期分別為23.67個月、31.49個月,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.094,P < 0.05)。

        2.4 喉鱗狀細胞癌預后危險因素分析

        對年齡、性別、腫瘤部位、LVD、MVD、組織學分級、TNM分期及淋巴結轉移帶入COX模型進行多因素生存分析,LVD、MVD及TNM分期是影響喉鱗狀細胞癌患者生存時間的獨立危險因素(P < 0.05),暴露與非暴露相對危險度比(RR)以LVD最高。

        3 討論

        腫瘤組織的血管系統(tǒng)是腫瘤的生長、進展、轉移和復發(fā)基礎,近年來的研究均證明腫瘤組織中存在大量的新生血管,并受到如血管內(nèi)皮生長因子—C(VEGF—C)、缺氧誘導因子—1(HIF—1)、肝細胞生長因子(HGF)、內(nèi)皮素—1(ET—1)等多種生長因子的調(diào)控。相關的研究也是近幾年腫瘤研究的熱點,MVD計數(shù)是目前定量測定腫瘤組織內(nèi)新生毛細血管的主要方法。組織細胞異常增殖是惡性變的基礎,成人喉乳頭狀瘤是喉部的良性病變,但隨著復發(fā)次數(shù)的增多,人乳頭狀瘤感染的組織細胞則可能出現(xiàn)異常增殖,則出現(xiàn)惡性變的可能;喉鱗狀上皮不典型增生則已經(jīng)出現(xiàn)異常增殖,是喉鱗狀細胞癌的癌前病變。本研究將兩者與喉鱗狀細胞癌組織中MVD進行比較,結果三者組織中MVD呈現(xiàn)隨病變惡性程度增加而升高的趨勢,說明新生的微血管是喉鱗狀細胞癌發(fā)生和進展的重要因素,異常增生甚至惡性變的組織細胞對營養(yǎng)的需求量顯著高于正常組織或良性細胞,通過調(diào)高調(diào)控血管生成相關因子的表達,促進腫瘤內(nèi)部微血管的生成。

        腫瘤組織內(nèi)新生淋巴管的存在與否仍存在爭議,但目前許多的研究證實腫瘤內(nèi)有新生的微淋巴管,并且多分布于腫瘤組織的邊緣,且管壁結構不完整,瘤內(nèi)密度則較小,與本次研究觀察到的情況相似。這說明腫瘤內(nèi)存在新生的淋巴管,由于腫瘤邊緣細胞活性增殖程度最高,代謝旺盛,因而在腫瘤的邊緣分布密度更高,并且由于管壁結構的不完整,通透性增加,更有利于腫瘤細胞的擴散,并隨瘤內(nèi)微淋巴管到達瘤外組織中淋巴管及淋巴結形成轉移。微淋巴管促進腫瘤轉移的觀點仍存在一定爭議,某些惡性腫瘤內(nèi)部缺乏瘤內(nèi)淋巴管。也有些研究表明,VEGF—C不僅能夠促進微血管的生成,對微淋巴管生成也有調(diào)控作用,并與腫瘤轉移關系密切。本研究結果顯示,3種喉部病變組織中均存在微淋巴管,且LVD也隨著病變惡性程度的增加而升高,說明LVD與MVD在喉鱗狀細胞癌的進展過程中有相似的存在意義。

        同時,本研究將LVD和MVD與喉癌臨床特征的關系進行分析,結果也發(fā)現(xiàn),兩者主要與腫瘤本身組織學分級、TNM分期和淋巴結轉移有關,并且隨組織分化程度的降低及TNM分期的增加而升高,說明LVD、MVD與喉鱗狀細胞癌的惡性程度和轉移密切相關,而惡性程度和轉移則是直接影響患者生存時間的關鍵。本研究將喉鱗狀細胞癌患者按LVD和MVD均數(shù)進行分組,并對比各組在隨訪觀察時間內(nèi)的中位無進展生存期,結果發(fā)現(xiàn),HLVD和HMVD組患者中位無進展生存期均顯著少于LLVD和LMVD組患者,說明高密度的瘤內(nèi)微淋巴管和微血管對喉鱗狀細胞癌患者預后有顯著的負性作用。通過COX多因素生存分析,證明LVD和MVD是喉鱗狀細胞癌患者預后的負性因子,TNM分期也是影響喉鱗狀細胞癌的危險因素,而TNM分期越高腫瘤侵襲性越強,轉移的可能性大,正與LVD和MVD在腫瘤內(nèi)尤其是邊緣高密度分布有關。

        綜上所述,喉癌的發(fā)展和轉移與微淋巴管及微血管的密度有關,兩者都是喉癌預后的負性因子,定量測定可作為喉癌預后的指標。

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        (收稿日期:2012—03—30)

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